几丁质酶-葡聚糖酶双价基因导入滇型杂交稻恢复系提高稻瘟病抗性的研究

将含有菜豆(Phaseolus limensis)几丁质酶基因和烟草(Nicotiana tabacum)β-1,3-葡聚糖酶基因的pBLGC(16.5 kb)质粒用基因枪法导入滇型杂交稻(Oryza sativa L.ssp.japonica)恢复系"南29"中,总计获得93个转化再生植株,以β-1,3-葡聚糖酶基因制备探针对T1代株系进行Southern杂交分析,17个株系为杂交阳性,证实外源基因完整结构已整合到水稻基因组中;连续多代的PCR追踪检测证实外源基因已遗传至T4代;对所获得的6个PCR检测阳性T4代品系进行了稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)生理小种接种鉴定和稻瘟病大田诱发鉴定,结果表明,转基因品系对稻瘟病的抗性较受体对照大幅度提高,获得了稻瘟病新抗源,但不同品系稻瘟病抗性并不相同.     

提高水稻转化效率几个主要因素的研究

对水稻转化过程中涉及的愈伤组织的诱导、筛选、分化等进行了研究。幼胚在接种前低温预处理4天或7天,可提高愈伤组织的再生频率;对于继代时间较长的愈伤组织,高渗处理可提高抗性愈伤的比率。同时在筛选时期加大筛选压力,分化时去掉筛选压力,壮苗时加适当的选择压力,也可提高转化率。另外,在脯氨酸、二甲基亚砜对分化的影响,也进行了尝试。     

植物抗毒素转化水稻和转基因植株的生物鉴定

用基因枪法转化了水稻（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．）６个材料的未成熟胚、成熟胚及胚性愈伤组织。质粒ｐＳＳＶｓｔ１和ｐＶＥ５＋是由葡萄中分离出的编码芪类合成酶的植物抗毒素基因与３５Ｓ或它自己的启动子组成。Ｇ４１８（１００～１５０ｍｇ／Ｌ）或潮霉素（５０ｍｇ／Ｌ）筛选后,经ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ或Ｄｏｔｂｌｏｔ分析证明的转基因植株共５４株。对转基因植株及其后代进行了稻瘟病和白叶枯病的抗性鉴定。初步结果表明,芪类合成酶基因可以提高转基因植株及后代的抗性。     

影响籼稻花药培养诱导率的因素及基因型的作用研究

本文研究了影响籼稻花药培养诱导率的9种重要因素的作用。供试品种和杂种共70余种。结果发现,不同基因型的培养力存在很大差异,这种差异表现在对各种因素上,如基本培养基成分、激素的种类与配比、对低温预处理的时间等等不同反应上。低温预处理是提高籼稻出愈率的有效措施,但由于不同基因型小孢子对低温的耐受力不同,所需的适合预处理时间也就不同。花药接种后先在30℃下培养3天后,再转入26℃下培养,较直接培养在26℃下可大幅度提高花粉檀株的产量。诱导培养基中补加脯氨酸、马铃薯提取液对提高出愈率和绿苗分化率有明显效果。     

水稻离体花粉培养诱导形成植株

被子植物离体花粉培养的研究,近几年在双子叶植物菸草上有了新进展,可使近10％的花粉诱导成为胚状体及植株(Nitsch,1974)。本文首次报道了禾本科植物水稻的离体花粉培养诱导形成植株的研究结果。     

基因枪法转基因水稻中hpt基因稳定遗传

基因枪转化将潮霉素磷酸转移酶基因（ｈｐｔ）导入粳稻品种７７１７０,获得可育的转基因植株,研究外源基因遗传的稳定性。自交后代（Ｔ１和Ｔ２）经潮霉素筛选获得抗性植株和敏感植株,分子鉴定结果表明抗性植株带有ｈｐｔ基因,而敏感植株中没有ｈｐｔ基因存在。Ｔ１和Ｔ２代中潮霉素抗性表现为显性单基因位点的遗传方式,符合孟德尔分离规律,并得到分子鉴定结果的证实。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交结果显示,ｈｐｔ基因多拷贝整合在水     

抗生素G418胁迫条件下转基因水稻种子发芽特性及应用

在不同浓度的抗生素G418胁迫条件下对抗稻瘟病转基因水稻纯系材料D2-1-2及其受体对照中花9号进行了发芽试验。培养7d的结果表明：不同浓度抗生素处理对两个材料萌动无显著的影响;随抗生素浓度的上升,两个材料发根种子数、种子根长、芽长均受到不同程度的抑制;当抗生素浓度达100mg/L时,转基因材料D2-1-2仍可正常长根(平均1.45cm),但中花9号明显受到抑制(平均0.27cm),二者存在明显差异;根据这一特性,从中花9号和D2-1-2混合群体中筛选出来的长根（大于0.5cm）种子经PCR检测88.46%是转基因个体。     

用激光微束法将外源基因导人水稻细胞的研究

将外源基因导入植物细胞是植物基因工程的关键步骤之一。用激光微束技术转化动物细胞已经取得了成功,并证明外源基因已整合到细胞染色体上。最近又证明激光微束可穿透植物细胞壁和细胞膜,将pBR322DNA导入植物细胞和细胞器。本实验在利用激光微束技术将外源基因导入水稻培养细胞上进行了探索。 所用外源DNA是pBI121质粒,该质粒带有CaMV35启动子和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因,用     

云南生态条件下基因枪法转溶菌酶基因水稻潜在变异性

在云南2种生态条件下,对基因枪法获得的转溶菌酶基因水稻高代品系D2-1-2和受体品种中花9号的农艺性状、稻米蛋白质含量、氨基酸含量和11种矿质元素进行了对照分析。结果表明转基因品系和受体对照在生育期农艺性状上无明显的差异,但转基因水稻结实率和株高明显低于受体品种;转基因水稻糙米蛋白质含量、氨基酸含量以及9种矿质元素含量都有所增加,其中钙、铁和锌等元素增加幅度较大。认为基因枪法转基因植物可能会产生一些潜在的遗传变异,因此,建议应对转基因植物进行多年多点的环境风险评价。