基质金属蛋白酶-2，9及细胞外基质金属蛋白酶诱导因子与骨肉瘤患者性别、年龄、预后的关系

目的：检测基质金属蛋白酶-2(Matrix MetalloProteinase-2，MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(Matrix MetalloProteinase-9，MMP-9)及细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(Extracellular Matrix MetatloProteinase Inducer，EMMPRIN)在骨肉瘤组织中的表达，并判断其与骨肉瘤患者性别、年龄、肿瘤的部位、病理分型和复发、转移的关系，寻找有利于保肢治疗的良好时机。方法：收集1996-05／2003-05临床病理资料完整、获得随访的骨肉瘤患者60例，对其手术标本中具有诊断意义的部位进行免疫组织化学染色(S-P法)，观察MMP-2,9及EMMPRIN在骨肉瘤中的表达，并对其与患者性别、年龄、肿瘤的部位、病理分型和复发、转移的关系进行统计学分析。结果：在60例骨肉瘤标本中，MMP-2阳性率77％(46／60)，MMP-9阳性率78％(47／60)，EMMPRIN阳性率72％(43／60)，三者与患者的性别、年龄、肿瘤的部位、病理分型均无显著性相关关系(P&;gt;0．05)。MMP-2，9的表达与肿瘤的复发有显著性相关关系(P&;lt;0．05)，但和肿瘤的转移无显著性相关关系(P&;gt;0．05)。EMMPRIN的表达不但与肿瘤的复发有显著性相关关系(P&;lt;0．05)，而且和肿瘤的转移也有显著性相关关系(P&;lt;0．05)。EMMPRIN与MMP-2的相关系数为0．626(P&;lt;0．05)，与MMP-9的相关系数为0．504(P&;lt;0．05)。结论：EMMPRIN的表达与MMP-2，9的表达呈正相关，与肿瘤的复发及转移呈显著性相关。MMP-2，9及EMMPRIN在骨肉瘤中的表达高于正常组织，与患者的性别、年龄、肿瘤的部位和组织学类型无显著性相关，而与肿瘤的预后有明显的关系。     

成骨细胞异种移植的免疫观察

目的 探讨异种成骨细胞移植及组织工程骨构建的可能性。方法 用二步酶消化—组织块联合接种法行SD大鼠骨细胞原代培养，传代后用碱性磷酸酶(ALP)染色法进行细胞鉴定；再将28只大耳白兔分为3组：自体移植组(A组)、异种移植组(B组)、正常对照组(C组)，分别于腹直肌袋内注入自体软骨细胞悬液、SD大鼠成骨细胞及生理盐水，于1、2、4及8周行免疫学及组织形态学检测。结果 细胞原代接种后5天成单层，经鉴定为成骨细胞；实验兔各组移植后受体无明显全身及局部排异反应；B组移植后2、4周检测到特异性抗体，2周检测到细胞介导的细胞毒反应，4周达高峰，8周开始减退，HE染色见大量炎性细胞浸润，至8周无明显异位成骨现象。A、C两组移植后末见明显体液及细胞免疫反应。结论 单纯异种成骨细胞不能作为细胞移植及组织工程骨构建的可靠细胞来源。     

构建MYC反应元件修饰hTERT核心启动子引导Fcy1表达的腺病毒载体

目的：构建串联的MYC反应元件修饰人端粒酶逆转录酶（hTERT)核心启动子引导酵母胞嘧啶脱氨酶基因Fcy1表达的复制缺陷型腺病毒载体。方法：将串联的MYC反应元件修饰的hTERT核心启动子及下游酵母胞嘧啶脱氨酶基因Fcy1克隆到穿梭质粒pDC316上，上辅助质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293细胞获得重组复制缺陷型腺病毒并在HEK293细胞中扩增重组病毒。PCR法及斑形成实验鉴定重组腺病毒和病毒滴度。结果：成功获得由6倍和18倍MYC反应元件修饰hTERT核心启动子引导Fcy1基因表达的复制缺陷型腺病毒载体。结论：MYC反应元件修饰hTERT核心启动子引导Fcy1基因表达的腺病毒载体为进一步研究骨肉瘤转录靶向基因治疗奠定了基础。     

经尿道前列腺电切手术大量灌洗液对人体体温及凝血功能的影响

经尿道前列腺电切手术(TURP)目前已成为治疗老年患者前列腺增生的主要手段,其优点为手术方式简单、微创等。但手术中大量的灌洗液对人体体温的影响尚未见报道,对凝血功能的影响报道不一。本文对30例患者在TURP期间,观察经尿道灌入大量灌洗液对人体体温及凝血功能的影响及二者之     

髂骨恶性骨肿瘤切除后骨盆环稳定性重建

目的 评价髂骨原发性恶性骨肿瘤及转移瘤切除后椎弓根钉棒固定系统联合异体骨移植或联合骨水泥（polymethylmethacrylate，PMMA）重建骨盆环稳定的方法及效果。方法 1999年7月～2004年7月，采用完全切除重建的方法治疗16例髂骨恶性骨肿瘤，男9例，女7例。年龄16～80岁。原发性骨肿瘤10例，其中软骨肉瘤4例，骨肉瘤3例，尤文氏瘤2例，恶性骨巨细胞瘤1例；根据Enneking肿瘤分期系统进行分期，ⅠA期2例，ⅡB期8例，髂骨完全切除后，均采用异体骨联合椎弓根钉棒固定系统重建骨盆环稳定。转移瘤6例，其中乳腺癌2例，肺癌1例，肾癌1例，甲状腺癌1例，前列腺癌1例，均为孤市性转移病灶；采用椎弓根钉棒固定系统或结合PMMA固定重建。术后观察重建并发症，局部肿瘤复发及植骨愈合情况，采用Enneking保肢功能评价标准进行功能评定。结果 10例髂骨原发性恶性骨肿瘤获随访5～65个月，平均35．6个月。可疑深部感染2例，内固定松动2例，异体植骨不愈合1例；植骨愈合时间4．2～8．4个月，平均5．8个月，无排异反应；肿瘤局部复发2例，肺转移3例，死亡2例；8例生存者平均功能评分24．8（82．7％），其中优4例、良3例、可1例。转移瘤患者中位生存期11．8个月（4．6～48．5个月），4例患者生存超过1年；术后无深部感染，2例内固定松动均未使用PMMA，局部出现新病灶3例，术后患者疼痛均有明显缓解，并能负重行走；1年时随访，平均功能评分21．7（72．3％），其中优2例、良2例。结论 椎弓根钉一棒固定系统联合异体骨或PMMA对髂骨原发性及转移性恶性骨肿瘤全髂骨切除后骨盆环重建可以达到稳定的目的，其并发症低，功能效果满意。     

骨肉瘤P53、c－erbB－2、c－myc的表达及与预后的关系

作者对不同临床行为骨肉瘤的抑癌基因Ｐ５３突变蛋白、ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｃ－ｍｙｃ癌基因及增殖细胞核抗原ＰＣＮＡ进行研究。根据临床随访结果分组，高危组１０例；低危组２４例；巨大肿块组４例；转移病灶组７例。免疫组化实验ＰＣＮＡ及Ｐ５３单克隆抗体采用ＡＢＣ法染色，原位杂交实验采用地高辛试剂盒标记ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｅｒｂＢ－２基因探针。经统计学处理（Ｒｉｄｉｔ分析）高危组与低危组相差显著。研究结果显示，骨肉瘤Ｐ５３突变蛋白阳性表达的变化与预后有关，骨肉瘤中ｃ－ｅｒｂＢ－２、ｃ－ｍｙｃ癌基因有激活现象，阳性率较高的易转移，生存率低。骨肉瘤细胞ＰＣＮＡ均呈阳性，说明该肿瘤细胞增殖活跃，研究结果还显示骨肉瘤转移前后的组织学分型往往会改变，癌基因表达亦不同。提出可能存在第二原发灶和多中心性骨肉瘤的观点。最后作者强调术后长期持续免疫治疗和定期化疗对提高骨肉瘤生存率有重要作用。     

定制化胫骨平台系统的构建及应用

为解决传统人工胫骨平台假体个体匹配性差，结构强度与生物活性难统一等问题，提出了定制化复合增强型人工胫骨平台系统的设计制造方法。采用解剖学建模技术设计出外形匹配，内含三维网状构架的复合假体模型，利用快速成型技术制造出假体的树脂原型，并分别通过精密铸造和粉末烧结技术制造出钛合金胫骨平台和大段多孔陶瓷人工骨。结果显示，该方法能快速而精确地制造出形状复杂的人工胫骨平台系统，是实现假体定制化制造的有利保证；通过将金属假体和多孔陶瓷人工骨复合，解决了载重部位大段骨缺损的修复问题。临床应用表明，该假体能与对侧关节匹配运动，通过将机械重建与生物重建相结合可实现受损关节的功能重建。     

人源化抗人肺癌单域抗体基因的构建、表达及活性分析

目的： 构建人源化的抗人肺癌单域抗体hu3D3VH基因, 在大肠杆菌中表达, 对其蛋白活性进行分析.方法： 采用CDR移植技术对mAb3D3的重链可变区进行人源化, 通过重叠PCR获得hu3D3VH的基因.构建pET22（b＋）/hu3D3VH表达载体, 并转化大肠杆菌BL21（DE3）, 在IPTG诱导下表达.表达产物通过Ni亲和层析柱纯化.采用间接ELISA和竞争抑制ELISA法进行活性分析.结果： 通过重叠PCR获得序列正确的目的基因.目的蛋白以包涵体的形式表达, 表达量占菌体总蛋白的30%以上.纯化后, 目的蛋白的纯度达95%以上.hu3D3VH具有与亲本抗体相同的抗原反应性, 并能抑制mAb3D3与L342细胞的结合.结论： 获得的人源化单域抗体hu3D3VH, 保留了与mAb3D3相同的反应性和特异性, 为进一步临床应用奠定了基础.     

激素应用与SARS-CoV在患者体内存留的相关性探讨

探讨糖皮质激素的应用及使用时间与剂量是否与SARS患者体内SARS CoV存留有关。对象和方法 :标本来源 :2 0 0 3年 3～ 5月发病的 177例恢复期 (发病 2 8d以上 )SARS患者 ,平均病程为 (37 3± 0 7)d ,SARS CoV抗体检测阳性。检测 :收集患者咽漱液、尿、粪便标本 ,使用达安基因股