人egf基因在突变枯草芽孢杆菌WYBS2001中的转化、分泌表达及其产物功能研究

通过紫外线突变诱导获得了对感染致病菌具有显著抑菌作用的枯草芽孢杆菌突变株WYBS2001。采用PCR技术人工合成了175bp的人表皮生长因子（hEGF)的基因片段,并引入Pst I、Hind Ⅲ酶切位点,起始密码子及pUS186载体信号肽序列CTTAGA。经DNA测试分析,合成的片段与人egf基因序列完全一致。然后将其克隆至枯草杆菌分泌型质粒载体pUS186上构建成重组质粒pUSE,并转化枯草杆菌突变菌株WYBS2001,获得转入egf基因的枯草杆菌生态工程菌WYBS2001T。RIA检测结果表明,WYBS2001T阳性工程菌培养的上清液中可检测到hEGF。含量为7.6ng/ml,如果培养液中添加蛋白酶抑制剂可提高hEGF检测量,通过多代的培养仍然能够稳定地分泌表达hEGF。生物学功能实验表明,分泌的hEGF对人K562体外培养细胞的增殖和生长具有明显生物学活性。对烧伤动物模型的功能性实验观察到,WYBS2001T工程菌制剂对动物的烧伤有明显的治疗作用,该研究表明,微生态基因工程菌有很好的应用前景。     

高产莪术细胞悬浮系建立及产物前体对挥发油合成的调控研究

研究了高产莪术细胞悬浮系培养的条件及前体物质添加对挥发油合成的调控。结果表明：淡黄色颗粒状愈伤组织是建立高产细胞悬浮系的最佳供试愈伤组织;最佳培养基成分是MS培养基添加葡萄糖与蔗糖各15—30g／L(1：1),氮源为NH4^ 和NO3^-,比例为1：3,总量为80mmol／L;激素组合为6-BA3．0—5．0mg／L、2,4-D1．0mg／L;光下培养10—15天再转入优化条件下的暗培养,可形成稳定的高产细胞悬浮系;其细胞周期中的最大细胞生长量及挥发油含量分别是248g／L和2．28％;前体物质泛酸钙、乙酸铵、乙酸钾的添加均可有效提高培养细胞合成挥发油的百分含量,其中乙酸铵最有效,在指数生长中期添加0．5mmol／L乙酸铵,挥发油的最高含量可达3．11％,产量为8．27g/L,分别是添加前的1.25倍及1.2倍。     

高产莪术细胞悬浮系建立及产物前体对挥发油合成的调控研究

研究了高产莪术细胞悬浮系培养的条件及前体物质添加对挥发油合成的调控.结果表明淡黄色颗粒状愈伤组织是建立高产细胞悬浮系的最佳供试愈伤组织;最佳培养基成分是MS培养基添加葡萄糖与蔗糖各15-30g/L(11),氮源为NH+4和NO-3,比例为13,总量为80mmol/L;激素组合为6-BA 3.0-5.0 mg/L、2,4-D 1.0 mg/L;光下培养10-15天再转入优化条件下的暗培养,可形成稳定的高产细胞悬浮系;其细胞周期中的最大细胞生长量及挥发油含量分别是248g/L和2.28%;前体物质泛酸钙、乙酸铵、乙酸钾的添加均可有效提高培养细胞合成挥发油的百分含量,其中乙酸铵最有效,在指数生长中期添加0.5mmol/L乙酸铵,挥发油的最高含量可达3.11%,产量为8.27g/L,分别是添加前的1.25倍及1.2倍.     

外源基因在转基因植物中的遗传特性

GeneticCharacterofForeignGenesinTransgenePlantsWangGuanlinFangHongJunNaJie(BiotechnologyInstituteofLiaoningNormalUniversity,Dalian116029)1外源基因在转化植株中的遗传传递规律关于外源基因在转化植株世代过程中的遗传传递规体已有较多的研究,一般从表型传达、标记基因的表达及分子杂交分析等方面进行研究,Braun等问‘早在1959年已证明,nopaline型Ti质粒农杆菌侵染植物细胞后产生的冠瘿瘤细胞中带有T－DNA,并保留一些形态发生潜力、但只能形成异常穿,亦称畸形痛。通过嫁接到正常烟草植株上可使这些异常穿开花结果…     

网纹瓜单细胞固-液双层培养及体细胞无性系建立(简报)

网纹瓜(Cucumis melo Var.reticulatus)是名贵的优质甜瓜,为葫芦科、甜瓜属植物。我国引种后生长良好,产量高,经济效益好,每年从日本购进大量杂交种子。但由于种子不纯,基因型差异较大,植株不整齐,产量不稳定,而且价格昂贵。因此,选育适合我国种植的     

蜂毒溶血肽基因的定点诱变及其在大肠杆菌中的表达

从蜜蜂毒腺中提取总ＲＮＡ,通过ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增得到了蜂毒溶血肽前体蛋白的ｃＤＮＡ,再进一步通过定点诱变在蜂毒溶血肽序列前引入了羟胺裂解位点,构建了与β－半乳糖苷酶部分序列相融合的蜂毒溶血肽诱变蛋白表达载体,序列分析结果表明,成功地引入了目的密码子且与β－半乳糖苷酶部分序列构成正确的读码框,并在大肠杆菌中表达了诱变蛋白,为基因工程生产蜂毒溶血肽提供了新途径。     

樱桃砧木新品系组织培养

植物名称:樱桃(Prunus pseudocerasus) 材料类别:采用大连市农科所选育的樱桃砧木优良新品系136、5-145、4-145(银珠×玻璃灯)为培养材料.取其叶、冬芽、幼茎及茎段(不带芽),分别进行愈伤组织培养和茎尖培养。培养条件 (一)叶、茎段愈伤组织诱导培养:叶、茎段(不带芽)、茎尖常规消毒,接种。愈伤组织诱导培养基为MS分别附加IAA 0.1(单位mg/l,下同),NAA0.1,BA0.1 IAA0.5,BA0.1 NAA0.5;蔗糖3％.琼脂0.6％。分化培养基:MS BA0.5十NAA0.4;MS BA0.5 IAA0.4。生根培养     

高活性细胞激动素TDZ在植物组织培养中的应用

高活性细胞激动素ＴＤＺ在植物组织培养中的应用王关林方宏筠那杰（辽宁师范大学生物系,大连,１１６０２２）ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＯＦＰＯＴＥＮＴＣＹＴＯＫＩＮＩＮ－ＴＨＩＤＩＡＺＵＲＯＮ（ＴＤＺ）ＴＯＰＬＡＮＴＴＩＳＳＵＥＣＵＬＴＵＲＥＷａｎｇＧｕａｎ－...     

抗菌肽基因转化大白菜获得抗病转基因植株及稳定遗传

软腐病是大白菜( Brassica pekinensis Rupr.)的三大病害之一.抗菌肽对软腐病菌有很强的杀伤作用.建立了根癌土壤杆菌( Agrobacterium tumefaciens ) EHA105(pMOG410)工程菌的高频转化载体系统,将抗菌肽基因导入目前推广种植的大白菜AB-81自交系,获得了转基因植株.PCR及 Southern blotting分子杂交鉴定表明抗菌肽基因已整合到白菜基因组.转基因植株提取液的体外抑菌实验、试管苗及盆栽转基因植株的病原菌接种抗病测试结果表明转基因植株具有明显的抗病特性,并且能稳定遗传,转基因植株R1自交分离比为3∶1,R5的转基因植株保持抗Km和抗病特性,可望以其为亲本选育出大白菜抗软腐病的新品种.