基于SSR-HRM技术的4种药用天麻变型遗传多样性及遗传结构分析

目的 比较乌天麻Gastrodia elata f. glauca、绿天麻G. elata f. viridis、红天麻G. elata f. elata和黄天麻G. elata f. flavida4种药用天麻变型的遗传多样性、遗传结构和遗传信息差异，为天麻新品种选育提供依据。方法 从不同产地收集了40份不同天麻变型的花茎。应用简单重复序列(simple sequence repeat,SSR)分子标记与高分辨率熔解曲线(high-resolution melting,HRM)相结合技术，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳，从80对引物中筛选出15对多态性高的SSR引物。对这些天麻花茎样品进行实时荧光定量PCR扩增，统计遗传多样性参数，分析群体遗传结构，结合40份天麻的HRM数据进行聚类分析。结果 从15对SSR引物检测到114个等位基因，平均每对引物7.6个。天麻样品的观测杂合度(observed heterozygosity,Ho)、期望杂合度(expected heterozygosity,He)、和Nei’s多样性指数(Nei’s diversity index,Nei)的平均值分别为0...     

广丰千金薯烟草花叶病毒lncRNA测序鉴定、原核蛋白表达及其序列分析

目的 对广丰千金薯Dioscorea polystachya Turczaninow.cv.Guangfeng Qianjin烟草花叶病毒进行鉴定、原核蛋白表达和序列分析，为广丰千金薯脱毒苗的培育和鉴定提供理论依据。方法 通过lncRNA测序鉴定广丰千金薯烟草花叶病毒蛋白基因，利用大肠杆菌重组技术表达广丰千金薯烟草花叶病毒蛋白，并采用生物信息学方法进行序列分析。结果 广丰千金薯烟草花叶病毒蛋白基因包括复制酶1（ORF1）、复制酶2（ORF2）、RNA聚合酶、运动蛋白（movement protein，MP）、带电蛋白和外壳蛋白（coat protein，CP）；广丰千金薯烟草花叶病毒CP、MP、RNA聚合酶、带电蛋白、ORF1和ORF2基因cDNA总长度分别为480、807、1425、123、4851、3351 bp，其蛋白分别由159、268、474、40、1613和1114个氨基酸组成；广丰千金薯烟草花叶病毒蛋白除带电蛋白为疏水性蛋白质外，其余如ORF1、ORF2、RNA聚合酶、运动蛋白和外壳蛋白均为亲水性蛋白质；广丰千金薯烟草花叶病毒带电蛋白二级结构由β-片层和无规则卷曲构成，CP、MP、RNA聚合酶、ORF1和ORF2的二级结构均由α螺旋、β-片层、无规则卷曲构成；广丰千金薯烟草花叶病毒CP、MP、RNA聚合酶、带电蛋白、ORF1和ORF2三级结构均为单体；广丰千金薯烟草花叶病毒CP、MP、RNA聚合酶、带电蛋白、ORF1和ORF2的亚细胞定位分别为内质网、细胞核、细胞质、细胞核、线粒体、叶绿体；广丰千金薯烟草花叶病毒CP、MP、RNA聚合酶、带电蛋白、ORF1和ORF2与烟草花叶病毒的亲缘关系较近，同源性分别为99.79%、99.38%、99.23%、100%、99.38%、99.49%；广丰千金薯烟草花叶病毒复制酶、RNA聚合酶、MP和CP可实现大肠杆菌重组表达，表明广丰千金薯烟草花叶病毒的lncRNA测序结果准确。结论 广丰千金薯烟草花叶病毒与烟草花叶病毒同源性极高，氨基酸序列及核酸序列与烟草花叶病毒其他植物分离物相似度高，在进化上高度保守。     

盾叶薯蓣制备薯蓣皂苷元方法的研究进展

传统工业广泛采用直接酸水解盾叶薯蓣根茎制备薯蓣皂苷元，该方法大量使用无机酸催化剂，废水排放量大，环境污染严重。因此，探寻清洁、高效的制备方法和工艺成为实现薯蓣皂苷元工业生产可持续发展的必然选择。故笔者综述并分析了近10年来酶水解、微生物转化及改进酸水解等方法在盾叶薯蓣制备薯蓣皂苷元中的研究进展及存在问题，并展望了其应用前景。酶水解反应条件温和，但薯蓣皂苷元产率低、经济成本高、活性酶纯化过程复杂。微生物特异性好，转化效率高、转化过程清洁环保，但转化周期长，代谢产物复杂。改进酸水解法中，双相酸水解工艺优势在于酸使用量减少，磺酸功能化离子液体催化优势在于可代替无机酸，循环性能良好，但二者均无法避免废液排放，固体酸催化剂无腐蚀性，易回收，但需使用乙醇作为反应溶剂具有一定安全隐患，且催化剂制备过程繁琐。综上所述，探索清洁高效的转化方法是盾叶薯蓣制备薯蓣皂苷元的重要发展趋势。对于酶水解法，应深入探寻生物转化过程中的关键糖苷水解酶，充分阐明酶解皂苷的转化路径及酶特异性，着力提高酶水解效率；对于微生物转化法，以选育高效转化菌株为基础，优化稳定的转化体系和转化过程，加快推动微生物转化的工业应用进程，深入探究生物转化机制，充分阐明特异性关键水解酶及其催化特性，着力提高生物转化效率；对于改进酸水解法，探索使用结构简单、性能稳定、可生物降解的新型酸催化体系，有效解决环境污染及生产安全问题。     

盾叶薯蓣水溶性成分的研究

目的研究盾叶薯蓣的水溶性化学成分，寻找活性物质。方法用系统溶剂提取，色谱法分离，光谱法鉴定结构，如：^1H—NMR、^13C—NMR135DEPT、HMQC、HMBC、TOCSY。结果从盾叶薯蓣的水溶液中分离到-个薯蓣皂苷、一个苯苷类化合物、一个生物碱类化合物。薯蓣皂苷经测定分析，鉴定为26-O-（β-D-葡萄糖）-（25R）-furost-5-en-3β，26-diol-22-OMe-3-O-{α-L-鼠李糖-（1→4）-[β-D-葡萄糖-（1→3）-β-D-葡萄糖-（1→2）]-β-D-葡萄糖}。结论经文献检索为一新化合物，命名为盾叶薯蓣皂苷E（zingierenin E），另两个化合物在盾叶薯蓣中为首次报道。