重组4-1BB配体对治疗性重组人乳头瘤病毒16型蛋白疫苗的佐剂作用

目的 研究重组4-1BB配体(recombinant 4-1BB ligand,r4-1BBL)作为佐剂对治疗性重组人乳头瘤病毒16型(human papillomavirus-16,HPV16)蛋白疫苗(HPV16蛋白疫苗)免疫效果的影响.方法 对4-1BBL胞外功能区进行密码子优化,并通过NdeⅠ和XhoⅠ酶切位点定向插入pET28a表达载体.将获得的重组表达载体转化至大肠埃希菌BL21 (DE3),并用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导重组蛋白表达.用蛋白质印迹法对重组蛋白进行鉴定,并用非还原性十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和电子显微镜分析重组蛋白结构.用CCK-8试剂盒检测纯化r4-1BBL对小鼠T细胞体外增殖的影响.同时将r4-1BBL与HPV16蛋白疫苗联合免疫C57BL/6小鼠,用酶联免疫斑点试验检测小鼠的细胞免疫应答水平,观察r4-1BBL对HPV16蛋白疫苗抑制肿瘤生长的影响.结果 密码子优化的4-1BBL胞外功能区能在重组表达载体中表达,且表达产物同时以包涵体和可溶性形式存在.可溶性产物的结构主要为二聚体,电子显微镜下可以观察到类似亚单位的结构.纯化r4-1BBL可促进小鼠脾淋巴细胞的体外增殖.与单纯HPV16蛋白疫苗相比,r4-1BBL联合HPV16蛋白疫苗能诱导更强的特异性细胞免疫应答(t=3.525,P=0.024)和产生更明显的肿瘤生长抑制作用(t=2.534,P=0.021).结论 r4-1BBL能在小鼠中提高HPV16蛋白疫苗的免疫效果,具有作为HPV16蛋白疫苗佐剂的潜力.     

三斑海马及其混伪品的DNA条形码分子鉴定研究

目的 建立三斑海马Hippocampus trimaculatus的COI、16 S rRNA和ATP6的条形码序列数据库,应用DNA条形码技术从分子水平快速准确鉴定三斑海马和其他正伪品海马,探讨海马属药材鉴定的新方法。方法 提取三斑海马药材的基因组DNA,PCR扩增COI、16 S rRNA和ATP6的序列并进行双向测序,所得序列采用软件Codon Code Aligner V4.2对测序峰图进行校对拼接,应用ClustalX软件进行序列比对,MAGA5.0软件计算三斑海马的种内种间遗传距离(Kimura2-Parameter,K2P),构建邻接树(Neighbor-joingtree,NJTree)聚类分析不同品种海马药材的鉴定结果。结果 获得的三斑海马线粒体COI、16 S rRNA、ATP6序列长度分别649、572、603～605 bp,其中3个条形码序列的种内变异位点碱基数分别为8、4和15,种内的变异率较小,COI、16 S r RNA、ATP6序列的平均种内K2P遗传距离0.002、0.001和0.006,均远小于三斑海马的种间K2P距离;NJ树结果显示三斑海马与其他海马均可明显区分,具有良好的单系性。结论 COI、16 S r RNA、ATP6序列作为条形码均可以鉴定三斑海马及其他混伪品海马药材,为动物类药材及其混伪品和近源物种的分子鉴定提供依据,为对保障海马临床用药安全提供了新的技术手段。     

A new case of concurrent existence of PRRT2-associated paroxysmal movement disorders with c.649dup variant and 16p11.2 microdeletion syndrome

BackgroundThe PRRT2 gene located at 16p11.2 encodes proline-rich transmembrane protein 2. In recent reviews, clinical spectrum caused by pathogenic PRRT2 variants is designated as PRRT2-associated paroxysmal movement disorders, which include paroxysmal kinesigenic dyskinesia, benign familial infantile epilepsy, and infantile convulsions with choreoathetosis, and hemiplegic migraine. The recurrent 16p11.2 microdeletion encompassing PRRT2 has also been reported to cause neurodevelopmental syndrome, associated with autism spectrum disorder. Although PRRT2 variants and 16p11.2 microdeletion cause each disease with the autosomal dominant manner, rare cases with bi-allelic PRRT2 variants or concurrent existence of PRRT2 variants and 16p11.2 microdeletion have been reported to show more severe phenotypes.Case reportA 22-year-old man presents with episodic ataxia, paroxysmal kinesigenic dyskinesia, seizure, intellectual disability and autism spectrum disorder. He also has obesity, hypertension, hyperuricemia, and mild liver dysfunction. Exome sequencing revealed a c.649dup variant in PRRT2 in one allele and a de novo 16p11.2 microdeletion in another allele.ConclusionsOur case showed combined clinical features of PRRT2-associated paroxysmal movement disorders and 16p11.2 microdeletion syndrome. We reviewed previous literatures and discussed phenotypic features of patients who completely lack the PRRT2 protein.     

分选连接蛋白16的结构和功能及其在疾病中的研究进展

分选连接蛋白(SNX)16是SNX家族成员之一,其结构含有易与磷脂酰肌醇-3-磷酸结合的一类含有吞噬细胞氧化酶同源性结构域及C末端的卷曲螺旋结构域。研究表明,SNX16在细胞内吞、蛋白分选和细胞信号转导等过程中发挥了重要作用,并且与多种疾病的发生密切相关。本文就SNX16的结构特点、生物学功能及其在疾病中的作用进行综述,以期为SNX16在疾病防治中的研究提供参考。     

复合PCR鉴别葡萄球菌及其多重耐药基因

目的　建立既可鉴别金黄色葡萄球菌又可同时检测其耐药基因的分子诊断方法。方法　对应于femB、mecA、ileS基因的 3对引物与快速提取的单菌落模板DNA进行单管同步扩增 ,电泳观察PCR片段 ;mecA、ileS耐药基因扩增结果分别与苯唑西林、莫匹罗星药敏试验对比 ,分析菌株的耐药性。结果　检测femB基因可快速特异性地筛选出金黄色葡萄球菌 ,mecA基因的检出与常规药敏试验鉴定耐甲氧西林葡萄球菌 (MRS)的结果基本一致 ,而拥有ileS基因的全部葡萄球菌分离株对莫匹罗星耐药。结论　复合PCR可快速敏感地从葡萄球菌中区分金黄色葡萄菌 ,并同时检出MRSA和耐莫匹罗星的多重耐药菌株。     

常规与节段性栓塞化疗在小肝癌治疗中的比较研究(附56例报告)

目的　探讨常规栓塞化疗 (TOCE)与节段性栓塞化疗 (S TOCE)在小肝癌治疗中的疗效比较。方法　 5 6例中2 6例行TOCE治疗 42次 ,平均 1.6次 /例 ,3 0例行S TOCE治疗 3 9次 ,平均 1.3次 /例。术后随访 6～ 3 6个月以上 ,并行B超、螺旋CT(SCT)及DSA (再次治疗时 )检查 ,以判断疗效。结果　 2 6例行TOCE治疗病例 ,碘油完全充填 12例 ,占46.2 % ,-年内复发 5例 ,占 19.2 % ;3 0例行S TOCE治疗病人 ,碘油完全充填 2 5例 ,占 83 .3 % ,一年内复发 2例占 6.7% ;TOCE与S TOCE在小肝癌治疗中完全充填及术后复发等比较有显著差异 (P <0 .0 1)。结论　S TOCE是小肝癌非手术治疗首选方法。在疗效上与TOCE比较有显著差异