再生障碍性贫血的发病机制研究

再生障碍性贫血是一种罕见的骨髓衰竭性疾病,自身免疫系统失调介导的造血细胞损伤与再生障碍性贫血患者的造血衰竭相关。此外,造血干细胞自身异常如端粒缩短、端粒酶功能缺陷,BCOR/BCORL1、PIGA等基因突变和IFN-γ、TNF-α等促炎细胞因子基因多态性异常等也可能在某些情况下发挥作用。随着高通量测序、核苷酸多态性检测等技术的发展,对于再生障碍性贫血发病机制的了解不断深入。本文对当前再生障碍性贫血的免疫及病理机制的研究新进展进行综述,以期对再生障碍性贫血的临床治疗有新的启示。     

脂肪干细胞的急慢性炎症模型的建立

目的:在体外建立脂肪干细胞的急慢性炎症模型,为研究microRNAs在成体干细胞免疫功能中的调控作用及信号机制的研究提供实验模型。方法:对所分离的脂肪干细胞进行流式细胞仪表面抗原鉴定。加入3个浓度(1,10,100 mg/L)的脂多糖(LPS)于不同时间(2,6,12 h)刺激脂肪干细胞建立急性炎症模型,用LPS(1 mg/L)间断刺激脂肪干细4周建立慢性炎症模型,对照组加完全培养液。CCK8测定细胞增殖活性,ELISA法检测上清液中IL-6、TNF-α、IL-1β含量,Western Blot检测TLR2、TLR4蛋白表达,qPCR检测上述相关分子基因水平表达。结果:流式细胞仪分析脂肪干细胞的细胞表型:CD29、CD44、CD105阳性,CD34、CD45为阴性。与对照组比较,上述检测结果差异均具有统计学意义(P<0. 05)。结论:1 mg/L LPS刺激人脂肪干细胞6 h可以建立急性炎症模型,间断刺激4周人脂肪干细胞可以建立慢性炎症模型。     

RECK、MMP 9在三阴性乳腺癌组织芯片中的表达及临床意义

【摘要】 目的 探讨基质金属蛋白酶抑制剂(RECK)、基质金属蛋白酶 9(MMP 9)在三阴性乳腺癌（TNBC）组织、癌旁组织中的表达及与TNBC临床病理的关系。方法 选择绵阳市中心医院乳腺外科2011年5月~2013年7月经病理证实为TNBC的72例石蜡标本及同 患者癌旁组织,利用免疫组化组织芯片技术检测其RECK、MMP 9蛋白的表达。结果 RECK在TNBC组织及癌旁组织中阳性表达率分别为4306%、8056%（P=0000）。TNBC中RECK的表达与临床分期（P=0009）、组织学分级（P=0010）、腋窝淋巴结转移情况（P=0000）相关。MMP 9在TNBC组织及癌旁组织中阳性表达率分别为625%、1528%（P=0000）。TNBC中MMP 9的表达与肿瘤大小（P=0017）、临床分期（P=0001）、组织学分级（P=0001）、腋窝淋巴结转移状况（P=0001）、Ki 67表达情况（P=0034）相关。TNBC中RECK与MMP 9表达呈负相关(r= 0195,P＜005)。结论 RECK的表达缺失与MMP 9过度表达与TNBC浸润、转移有关,有望成为TNBC的预后指标,并且有可能成为TNBC治疗的靶点。     

不同剂量卡非佐米对多发性骨髓瘤大鼠SDF-1 CXCR4表达的影响及作用机制

目的 探讨不同剂量卡非佐米对多发性骨髓瘤大鼠基质细胞衍生因子 1(SDF 1)和趋化因子受体（CXCR4）表达水平的影响及相关作用机制。方法 随机选取50只健康SD大鼠中10只为空白组,其余40只大鼠进行多发性骨髓瘤模型建造,空白组大鼠不做处理。建模成功后,随机选取10只大鼠作为模型组,其余30只大鼠为给药组,对给药组大鼠采用不同剂量的卡非佐米进行干预,并根据使用剂量将给药组大鼠分为低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组各10只,并对低、中、高剂量组大鼠分别采用15、25、35mg/mL的卡非佐米进行干预,21d后处死大鼠,并对其皮下瘤组织进行切片染色观察,测量5组大鼠荷瘤重量平均值、腹水量平均值和肿瘤体积,采用免疫投射比浊法对5组大鼠SDF-1、CXCR4水平进行检测,酶联免疫吸附法检测核因子 κB（NF κB）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子 α（TNF α）和类胰岛素一号增长因子（IGF-1）表达水平,并阐述卡非佐米的治疗机制。结果 中剂量组大鼠的荷瘤重量平均值、腹水量平均值和肿瘤体积明显低于低剂量组和高剂量组,且SDF 1、CXCR4表达水平亦显著低于低剂量组和高剂量组（均P＜0.05）;中剂量组大鼠NF κB、IL-6、TNF α和IGF-1表达水平较低、高剂量组显著降低（均P＜0.05）。结论 卡非佐米能降低SDF-1、CXCR4水平的表达,抑制炎症通路活性来控制瘤细胞增殖,且中剂量卡非佐米的抑制效果更明显,可为临床用药提供一定的理论依据。     

雷珠单抗联合玻璃体切割术对PDR患者血清VEGF-A和SDF-1表达的影响

目的：探讨雷珠单抗联合玻璃体切割术(VT)对PDR患者血清VEGF-A、人基质细胞衍生因子1(SDF-1)表达的影响。

方法：选取2017-01/2018-01本院收治的PDR患者120例,依据随机数字表法分为A组和B组,每组60例,A组给予VT治疗,B组在此基础上给予玻璃体腔注射雷珠单抗治疗,比较两组VT手术情况、并发症及VEGF-A、SDF-1、BCVA、CMT。

结果：两组术后血清VEGF-A、SDF-1水平明显低于术前,且B组明显低于A组(P<0.05); B组VT手术时间、电凝止血、术中出血及并发症发生率明显低于A组(P<0.05); 两组术后1d, 3mo BCVA、CMT明显低于术前,且B组明显低于A组(P<0.05)。

结论：雷珠单抗联合VT可有效降低PDR患者血清VEGF-A、SDF-1水平,减少VT创伤及并发症,且可有效改善患者BCVA、CMT。     

试题与答案

1.白内障术后黄斑囊样水肿(CME)的确诊依据是:A.持续的典型症状;B.荧光素血管造影中的花瓣状荧光表现;C.皮质类固醇和前列腺素抑制剂滴眼液治疗有效;D. OCT示前外丛状层低反射性囊性空泡样表现。2.下列关于角膜生理的描述错误的是:A.角膜上皮5~7 d更新一次;B.角膜上皮基底层细胞为角膜缘干细胞.     

角膜碱烧伤中PMNs与MMP-9的关系

目的：研究角膜碱烧伤后基质损伤修复病程中多形核中性白细胞(PMNs)的浸润和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达的关系。

方法：建立25只家兔角膜碱烧伤模型,分别于伤后3、7、14、21、28d随机处死5只兔,裂隙灯下观察角膜病理修复情况,摘除角膜做病理切片,测定PMNs的浸润量值。免疫组化法测定MMP-9的表达。

结果：PMNs和MMP-9在角膜碱烧伤后的3d开始升高,14d上升达到最大峰值,之后逐渐降低,碱烧伤后角膜基质在第14d溃疡面积及深度最为严重。

结论：角膜碱烧伤病灶中PMNs和MMP-9的量值呈正相关,且角膜的病理损伤与PMNs的浸润和MMP-9的表达密切相关。     

三种角膜屈光手术对近视患者角膜内皮细胞的影响

目的：对比角膜板层刀制瓣的前弹力层下准分子激光角膜磨镶术(SBK)、飞秒激光制瓣的SBK术(FS-SBK)与飞秒激光小切口角膜基质透镜取出术(SMILE)对近视中央角膜内皮细胞的短期及长期影响。

方法：我院近视34例34眼行SBK术; 41例41眼行FS-SBK术; 49例49眼行SMILE术,术前和术后1wk,1a利用SP-1P型非接触角膜内皮显微镜检查角膜内皮细胞,统计分析各组中央角膜内皮细胞密度(ECD)、内皮细胞面积的变异系数(CV)和六边形内皮细胞百分比。

结果：三组间术前、术后1wk,1a裸眼视力及屈光度均无差异(P>0.05)。术后1wk三组中央ECD均较术前减少(P<0.01),术后1a各组均较术前无差异(P>0.05); 术前及术后各随访时间点,三组间中央角膜内皮细胞面积CV及六边形内皮细胞百分比均无差异(P>0.05); 不同组内,术前及术后各随访时间点结果均无差异(P>0.05)。

结论：SBK、FS-SBK和SMILE手术对近视内皮细胞的安全性确切,术后早期各组中央角膜ECD均轻度降低,1a后恢复; 术后各组中央角膜内皮细胞面积CV及六边形内皮细胞百分比较术前无明显改变。     

不同褪黑素治疗方案对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠内源性神经干细胞增殖的影响

目的 探讨不同褪黑素治疗方案对缺氧缺血性脑损伤（HIBD）新生大鼠脑内源性神经干细胞（NSCs）增殖及远期组织学的影响,以寻求褪黑素治疗的较优方案。方法 将96只7日龄Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组、缺氧缺血性脑损伤（HIBD）组、单剂量即刻褪黑素治疗（SDIT）组及7日连续褪黑素治疗（7DCT）组（n=24）。HIBD大鼠模型采用分离并电凝大鼠右侧颈总动脉,低氧舱（氧气浓度为8%±0.01%）内缺氧2 h的方法建立。造模后7 d,采用增殖细胞核抗原（PCNA）/巢蛋白（Nestin）免疫荧光双标法检测各组大鼠侧脑室室管膜下区（SVZ）及海马齿状回（DG）区内源性NSCs的增殖情况（n=8）;采用Western blot法检测各组大鼠脑Nestin蛋白的表达水平（n=8）。造模后28 d,采用苏木精-伊红染色（HE）和尼氏染色法观察海马CA1区的组织病理学及锥体细胞数的变化（n=8）。结果 免疫荧光染色结果显示：SDIT组和7DCT组PCNA⁺Nestin⁺DAPI⁺细胞数均较HIBD组增加,且7DCT组显著多于SDIT组（P < 0.01）;Western blot结果显示：SDIT组与7DCT组Nestin蛋白的表达水平均显著高于HIBD组,且7DCT组显著高于SDIT组（P < 0.05）;HE染色结果显示：SDIT组及7DCT组细胞损伤减轻;尼氏染色结果显示：SDIT组和7DCT组锥体细胞数均较HIBD组增加,且7DCT组显著高于SDIT组（P < 0.01）。结论 SDIT和7DCT均可促进HIBD新生大鼠脑内源性NSCs的增殖,减轻远期组织学损伤,且7DCT疗效优于SDIT。     

单倍体造血干细胞移植治疗幼年型粒单核细胞白血病的临床研究

目的探索单倍体造血干细胞移植(haplo-HSCT)治疗幼年型粒单核细胞白血病(JMML)的效果。方法回顾性分析2013年12月-2017年12月我科收治的12例JMML患儿进行haplo-HSCT的临床资料。男9例,女3例,平均发病年龄3.4(1.1～5.8)岁。采用haplo-HSCT治疗,观察预处理相关毒性、植入、移植物抗宿主病(GVHD)、移植物排斥、复发、感染及生存情况。结果 12例患儿预处理耐受性可;12例患儿全部获造血重建,中性粒细胞植活中位时间19.5(13～25)d,血小板植活中位时间25(12～129)d;移植后28d进行首次骨髓嵌合率检测:8例完全植入,3例混合植入,1例植入失败;aGVHD总发生率92%(11/12),其中Ⅲ～Ⅳ度aGVHD发生率42%(5/12),cGVHD发生率33%(4/12),广泛型cGVHD发生率为0%(0/12);2例并发移植物排斥,其中1例复发,1例经停用免疫抑制处理后再次达完全嵌合;12例患儿中2例复发,复发后1例接受二次移植,1例给予化疗+供者淋巴细胞输注(DLI)后再次达完全缓解。随访至2019年2月,中位随访时间21.5(7～61)个月,2年OS为75%,2年DFS为67%。结论 haplo-HSCT是治疗JMML的有效方法,但植入、GVHD、排斥、复发、感染仍是影响患儿生存的主要因素,优化移植方案及复发后的挽救性治疗方案是提高JMML生存的关键。