携带双自杀基因且可诱导敲除SV40T的逆转录病毒载体的构建与结构鉴定

目的构建携带双自杀基因且可诱导敲除SV40T的逆转录病毒载体,优化目前的肝细胞永生化。方法去除eGFP终止子taa的pSEB-HUS质粒为逆转录病毒基础质粒。先将SV40T及其启动子hEFH亚克隆至pSEB-HUS,再将LoxP位点插入至pSEB-SV40T质粒的抗性基因Blasticidin上游获得pSEB-LoxP-SV40T质粒。同时将CD自杀基因定向克隆至pSEB-HUS的eGFP下游;然后设计一段HSV-tk自杀基因引物,在上游引物的5′端加入方向一致的LoxP序列。PCR获得TK基因后,定向克隆至CD下游获得pSEB-CD-TK,最后将pSEB-CD-TK上的双自杀基因亚克隆至pSEB-LoxP-SV40T质粒上得到携带双自杀基因及SV40T的质粒。结果PCR及酶切鉴定均证实两个自杀基因及SV40T正确克隆至逆转录病毒质粒中,目的基因序列与GenBank报道一致,两个LoxP位点方向相同。结论成功构建携带双自杀基因且可诱导敲除SV40T的逆转录病毒载体。     

我国彝族一个新的DR15（2）等位基因的核苷酸序列分析

对一组彝族样本的寡核苷酸分型中发现的９个与ＤＲＢ１１５０１反应格局基本相似，但有差异的ＤＲ１５（２）阳性细胞进行了组特异性扩增并对扩增产物进行了Ｍ１３克隆和测序。发现它们第二外显子为６７位氨基酸编码的密码子由ＤＲＢ１１５０１的ＡＴＣ（为异亮氨酸编码）转换成为苯丙氨酸编码的ＴＴＣ。它是与所有已发表的ＤＲ２组的等位基因不同的一个新的等位基因，我们暂称之为ＤＲＢ１１５Ｙ１。     

甲型流感病毒与免疫

甲型流感病毒是引起大规模流感爆发的主要病原体，在流行期间引起超额死亡率。近年来，高致病性禽流感病毒（HSN1和H7N7）引发的疫情引起了全世界的广泛关注。对甲型流感病毒引起机体免疫系统的变化及免疫应答的发生深入了解，有助于了解甲型流感病毒的致病机制，以采取更有效的治疗措施、设计更有效的抗病毒药物和流感疫苗，有助于应对有可能到来的甲型流感爆发的威胁。本文就甲型流感病毒诱导机体免疫应答的研究进展进行综述。     

与人精子有共同抗原的临床细菌分离株的筛选

紧ＲＡＨＳ－Ａｂ与４９３株临床细菌分离株进行玻片凝集反应，筛选出４种１１株可与ＲＡＨＳ－Ａｂ发生明显凝集反应的细菌株。选择其中Ｅ．ｃｏｌｉ５０６株作进一步研究。制备Ｅ。ｃｏｌｉ５０６株全菌蛋白进行包被，ＥＬＩＳＡ检测可与ＲＡＨＳ－Ａｂ出现阳性反应。进一步将全菌蛋白与ＲＡＨＳ－Ａｂ进行Ｗｅｓｔａｒｎ印迹反应，发现可出现数处理阳性反应带，其中们于３６ｋＤ和６７ｋＤ的两个条带反应最为明显。制备人精子蛋白     

TWEAK蛋白对肝癌细胞增殖的影响

目的 观察TWEAK蛋白对肝癌细胞系增殖的影响,探讨TWEAK对肝癌细胞增殖的作用.方法构建PAVU6-TWEAK siRNA干涉质粒,转染HepG2和QGY7703肝癌细胞株,MTT法检测抑制TWEAK蛋白表达对肝癌细胞增殖的影响,并于培养体系中加入TWEAK蛋白,检测肝癌细胞增殖活性.结果成功构建PAVU6-TWEAK siRNA干涉质粒,转化肝癌细胞后肝癌细胞增殖受抑.肝癌培养体系中加入TWEAK蛋白后,肝癌细胞增殖活性有所增强.结论 TWEAK蛋白可促进肝癌细胞的增殖活性,抑制TWEAK表达,一定程度上可抑制肝癌细胞增殖.     

FK228抑制EPO介导的人红系前体细胞的增殖与分化

目的:探讨组蛋白脱乙酰化酶抑制剂FK228在红细胞生成素(EPO)介导的人红系前体细胞增殖与分化中的调节作用。方法:从经粒细胞集落刺激因子动员的肿瘤患者外周血单核细胞中分离CD34 细胞,用含干细胞生长因子(SCF)、EPO或SCF IL-3及不同浓度FK228的无血清培养基培养7d,分别用抗GPA及抗CD36单克隆抗体(mAb)染色并行流式细胞术检测;将CD34 细胞用含SCF IL-3的无血清培养基培养7d,分离CD36 GPA-细胞,将细胞用含有EPO FK228的无血清培养基培养7d,并行细胞计数;将CD36 GPAlow/-细胞用含EPO加或不加FK228的无血清培养基培养,并进行annexin V和PI染色。结果:FK228以一种剂量依赖方式抑制CD36 GPAhigh、CD36 GPAlow和CD36 GPA-细胞的产生;FK228可诱导CD36 GPAhigh和CD36 GPAlow/-细胞在含EPO的培养基中发生细胞凋亡。结论:FK228可抑制EPO介导的人红系前体细胞的增殖与分化。     

容积调控性氯离子通道与肿瘤

容积调控性氯通道在细胞的容积调节、增殖及凋亡等生理过程中发挥重要作用，其分子结构尚未确定。近年研究发现容积调控性氯通道与肿瘤细胞的增殖、侵袭、迁移、凋亡及多药耐药性等恶性生物学行为有关。随着研究深入，容积调控性氯通道将成为抗肿瘤治疗的新靶点。     

HLA单倍型等位基因交换重组对移植配型的影响(7个家系分析)

人类白细胞抗原（HLA）又称移植抗原，在器官移植中起着重要作用。HLA遗传区域在人的第6号染色体短臂6p21位置上，HLA—A，B，C，D，E，F，G的7个座位是表达基因，由于其座位靠得很近，故在遗传时常一起传递。同一条染色体不同座位上的等位基因组合成单倍型，每个人都有两条分别来自父母的单倍型。HLA复合体是紧密连锁的，这些连锁在一条染色体上的等位基因很少发生同源染色体间的交换。2005．3-2006．6期间，我们在骨髓移植HLA配型时，发现7例家系中的7位个体HLA单倍型座位中等位基因分别发生交换重组。现分析报告如下。