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丙型肝炎病毒多表位基因核酸疫苗的构建及其免疫原性 总被引:4,自引:0,他引:4
目的构建丙型肝炎病毒(HCV)多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm,用该重组质粒免疫BALB/c小鼠,并检测其免疫原性。方法用BamHⅠ和HindⅢ双酶切含有HCVC区、E2区模拟表位和NS3~NS5区细胞表位串联基因的原核表达载体pQE30-CtEm,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),脂质体瞬时转染CHO细胞,并检测其表达。以100μg重组质粒免疫BALB/c小鼠,检测其体液免疫和细胞免疫效果。结果所构建的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm在CHO细胞中能获得有效表达。该质粒免疫小鼠后可诱导高水平的抗体,特异性淋巴细胞增殖反应、IFN-γ水平及CTL活性均明显高于空载体和生理盐水对照组。结论已成功构建HCV多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm,免疫小鼠后可诱导特异性体液免疫和细胞免疫应答。 相似文献
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Hale Sutcu 《Korean Journal of Chemical Engineering》2007,24(5):736-741
Pyrolysis of peat obtained from Yeniça?a, Bolu, Turkey was conducted in a fixed-bed tube furnace under various conditions, and variations in the structure of the char, tar and gas products were examined. The chars produced were studied by proximate and ultimate analyses. The maximum tar yield of 20.41% was obtained at a heating rate of 20 °C/min, a temperature of 450 °C, a sweeping gas flow rate of 100 ml/min and a 0.5–2.0 mm size range. The chemical composition of the tar was examined by elemental analysis, FTIR spectroscopy, 1H-NMR spectroscopy and column chromatography. The chemical composition of the tar with dense aliphatic structure was established to be CH1.22O0.25N0.02. The composition of the gases obtained at a heating rate of 20 °C/min for the 0.5–2.0 mm size range was examined by gas chromatography. 相似文献
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针对最新的生物DNA研究,病毒中同一DNA碱基顺序可以编码出2条或者3条不同的多肽链.在此基础上分析与模仿了重叠基因和重叠密码的机理,得到一种新的基于重叠基因编码框架,从而提高了问题求解的效率;同时,得到一种移码解读框架的DNA遗传算法(SDNA-GA)计算模型,并将其应用于一类广义隶属度型T-S模糊神经网络控制器(GTS-FNNC)的优化设计,实现了GTS-FNNC的在线学习. 相似文献
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中国人丙型肝炎病毒全长NS3基因的克隆、序列分析及表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 为改进HCV试剂的质量克隆 1b型丙型肝炎病毒 (HCV)全长NS3基因并在原核细胞中表达。方法 用RT PCR方法从中国人血清中扩增全长NS3片段 ,进行序列分析 ,并克隆到pET3 0a(+)原核表达载体中 ,构建的原核表达载体pET NS3 180 0在大肠杆菌BL2 1(DE3 )中表达 ,用Westernblot方法进行验证。结果 扩增到 1b型HCV全长NS3片段 ,经Westernblot实验表明该片段具有抗原活性。结论 构建的质粒可在大肠杆菌中表达完整的NS3蛋白 相似文献
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Markland William; Pollock Daniel; Livingston David J. 《Protein engineering, design & selection : PEDS》1989,3(2):111-116
The interactions between tPA domains that are important forcatalysis are poorly understood. We have probed the functionof interdomain interactions by generating tPA variants in whichdomains are duplicated or rearranged. The proteins were expressedin a transient mammalian expression system and tested in vitrofor their ability to activate plasminogen, induce fibrinolysisand bind to a forming fibrin clot. Duplication of the heavychain domains of tPA produced enzymatically active tPA variants,many of which demonstrated similar in vitro amidolytic and fibrinolyticactivity and similar fibrin affinity to the parent molecule.Zymographic analysis of the domain duplication tPA variantsshowed one major active species for each variant. Selectionof the residues duplicated and the interdomain spacing werefound to be critical considerations in the design of tPA variantswith duplicated domains. We also rearranged the domains of tPAsuch that kringle 1 replaced the second kringle domain and viceversa. An analysis of these variants indicates that the firstkringle domain can confer fibrin affinity to a tPA variant andfunction in place of kringle 2. Therefore, in wild-type tPA,the functions of kringle 1 and kringle 2 must be dependent partiallyon their orientation within the heavy chain of the protein.The functional autonomy of the heavy and light chains of tPAis demonstrated by the activity of a tPA variant in which theorder of the heavy and light chains was reversed. 相似文献
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以枯草芽孢杆菌168(B.subtilis 168)染色体为模板PCR扩增出P43启动子,与大肠杆菌-枯草杆菌穿梭质粒pUBC19相连得到表达载体pUBC-P43,然后将枯草芽孢杆菌脂肪酶基因lipA克隆到载体pUBC-P43启动子下游,得到重组质粒pUBCPL并转化B.subtilis TZ10.经中性红油脂平板、酶切和PCR方法鉴定得到重组菌TZ10/pUBCPL.宿主菌TZ10是B.subtilis DB104染色体缺失了lipA基因后获得.重组菌经初步发酵,以橄榄油为底物测定发酵上清液最高脂肪酶活力为49.1 U·L-1,而相应菌株DB104发酵最高酶活力仅为11.4 U·L-1. 相似文献
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目的研制预防人乳头瘤病毒(HPV)感染的重组修饰的Ankara痘病毒(MVA)活载体疫苗。方法将HPV16L1基因插入MVA病毒转移载体psc11M2的P7·5启动子的下游,构建转移质粒psc11M2-L1,与MVA共转染鸡胚成纤维细胞(CEF),进行同源重组。通过9轮蓝斑筛选,以PCR和Westernblot鉴定重组病毒。结果获得的含目的片段的重组MVA病毒,表达产物与鼠抗人HPV16L1抗体发生阳性反应,目的蛋白相对分子质量约为55000。结论已成功地构建了可正确表达HPV16L1基因的重组MVA病毒株。 相似文献