脊髓提取液对培养脊髓神经细胞中GABA能及DYN能神经元突起生长的影响

本文以体外培养的小鼠脊髓神经元为模型研究了人胚脊髓提取液对E 12—15小鼠脊髓中GABA能神经元和DNY能神经元的突起生长的营养作用,结果发现人胚脊髓提取液在蛋白浓度为250μg/ml时对GABA能神经元的突起生长无营养作用,但对DNY能神经元的突起生长有显著的促进作用。提示了人胚脊髓提取液中有促进神经元突起生长的营养物质,且对特定胎龄的不同的神经元有不同的作用。     

垂体柄切断对腺垂体降钙素基因相关肽免疫反应神经纤维的影响

垂体柄切断对腺垂体降钙素基因相关肽免疫反应神经纤维的影响焦凯朱运龙陈健康鞠躬１王复周（第四军医大学生理教研室１神经科学研究所,西安７１００３２）近年来形态学研究表明,在多种哺乳动物的垂体前叶存大量肽能神经纤维,其中Ｐ物质（ＳＰ）和降钙素基因相关肽（Ｃ...     

人GM-CSF受体β链胞膜外区域与GM-CSF结合位点的研究

研究了抗人GM-CSF受体β链胞膜外区域4种人工合成多肽D1(9～114),D2(115～225),D3(226～325)和D4(326～422)4个多肽片段多克隆抗血清和McAb对GM-CSF生物学活性的阻断作用,结果首次发现抗D1多克隆抗血清和抗D1McAb 2A_9对 GM-CSF促进的 DMSO诱导的 HL60细胞、正常人胎儿骨髓细胞以及人GM-CSF依赖的TF-1细胞增殖有显著的阻断效应,抗D2McAb 1C₁₂对GM-CSF诱导的 TF-1细胞增殖也有显著的阻断效应,阻断抑制率均可达 90％以上,而其它抗受体 β链 McAb和无关对照 McAb E₇均无阻断活性.此结果表明:抗 D1 McAb2A₉和抗D2 McAb 1C₁₂所识别的表位则可能为受体β链与 GM-CSF的结合位点依据受体β链二级结构预测,受体与细胞因子结合部位的结构理论,设计和合成了受体β链45～75,56～75和 66～75 3个人工合成多肽片段,用间接ELISA结合试验分析表明,McAb 2A₉识别表位位于第 45～55位氨基酸内.应用受体与细胞因子结合部位的结构理论推测 McAb 1C₁₂识别表位可能位于β链内 216～220位氨基酸.此结果对于深入了解受体β链的结构与功能以及细胞因子与受体的相互作用均有十分重要的意义.     

降钙素基因相关肽、P物质、甘丙肽和γ-氨基丁酸免疫阳性细胞在大鼠结合臂旁核的分布

应用免疫细胞化学ABC技术观察了降钙素基因相关肽,P物质、甘丙肽和γ-氨基丁酸免疫阳性胞体在大鼠结合臂旁核中的分布。降钙索基因相关肽阳性神经元分布于臂旁内侧核的腹侧部及外内侧亚核、臂旁外侧核的外外侧亚核、极外侧亚核,背外侧亚核及上外侧亚核,也分布于KllikerFuse核。P物质阳性胞体分布于臂旁内侧核内侧部和外内侧亚核、臂部外侧核的外外侧亚核及极外侧亚核,在腹外侧亚核中亦见个别细胞分布。甘丙肽阳性细胞的分布较为广泛,分布于臂旁外侧核和臂旁内侧核所有的亚核及Klliker-Fuse核中,γ-氨基丁酸阳性神经元在中尾部臂旁核中分布于臂旁外侧核背内侧部包括背外侧亚核、腹外侧亚核、内外侧亚核及结合臂背侧部;在嘴部和中嘴部臂旁核,GABA阳性胞体除位于臂旁外侧核背内侧部的背外侧亚核、腹外侧亚核、中央外侧亚核、上外侧亚核及内外侧亚核外,也出现于腹外侧部的外外侧亚核、臂旁内侧核内侧部及Klliker-Fuse核。     

终纹床核

终纹床核是边缘系统的重要结构之一,它参与内分泌、内脏活动及性行为等多种生理功能的调节。终纹床核各个组成部分的形态构筑、纤维联系和免疫组织化学特征均不相同。     

一种简易的免疫PCR方法的建立

免疫PCR为一种高敏感度检测抗原的新技术,操作程序大多沿袭ELISA方法.用戊二醛作连接剂,将蛋白质高效率包被在普通PCR管内壁,使免疫及PCR反应用普通PCR仪得以在管中连贯地进行.实验结果表明,标准曲线的线性关系好,与ELISA方法比较敏感度高出约10⁵.这一改良法的建立,可望促进免疫PCR的普及应用.     

Proline rich结构域介导Nogo-A激活NF-κB信号

髓鞘来源的中枢神经再生抑制因子——Nogo-A被发现除表达于成熟的少突胶质细胞,还广泛高表达于多种类型的神经元中．目前,神经元中Nogo-A的功能还不明确．为探讨神经元内Nogo-A的功能,以HEK293FT细胞为模型,利用信号途径报告基因系统筛选过表达Nogo-A对多种信号途径的调控作用,发现过表达Nogo-A能特异激活NF-κB信号,利用不同的Nogo-A剪接体和截断体形式研究,证明Nogo-A激活NF-κB信号依赖于其氨基端的proline rich结构域,进一步使用NF-κB信号途径相关分子显性突变体揭示IκBα、TRAF6、 Rac/Cdc42 参与Nogo-A激活NF-κB信号．结果提示,Nogo-A可以显著激活NF-κB信号,且依赖于Nogo-A氨基段的proline rich结构域．     

过表达Nogo-C对PC12细胞存活及增殖的影响

以PC12细胞为神经元细胞模型,研究Nogo-C对神经元细胞存活及增殖的作用。在PC12细胞中转染过表达Nogo-C,使用G418药物筛选以获得稳定表达的细胞克隆,利用Hoechst33342染色、细胞计数、MTT以及流式细胞仪等技术检测Nogo-C对细胞增殖以及细胞周期的影响。结果表明:(1)Hoechst33342染色未观察到表达Nogo-C的细胞发生明显凋亡;(2)细胞计数及MTT实验观察到转染Nogo-C后的PC12细胞生长增殖活性明显降低;(3)流式细胞仪检测细胞生长周期,正常PC12细胞G1期的百分数为(37.8±7.9)%,S期为(50.4±8.5)%,而转染Nogo-C的PC12细胞G1期为(76.8±4.1)%,S期为(14.7±1.7)%,提示转染Nogo-C的PC12细胞的细胞周期被阻滞在G1期;(4)没有获得稳定表达Nogo-C的PC12细胞模型。实验证明,过表达Nogo-C通过使PC12细胞周期被阻滞在G1期而明显抑制细胞的增殖,但是并不引起细胞的凋亡。     

关于辣根过氧化物酶法的试验

辣根过氧化物酶(HRP)追踪神经系的束路联系法已有近十年的历史。近几年来在国内逐渐得到推广。四年来在应用HRP法进行研究的同时也对此方法本身作了一些试验,介绍如下:     

中枢去甲肾上腺素通路和前列腺素参与IL-6、TNFα对大鼠下丘脑室旁核神经元的兴奋作用

应用免疫组织化学方法研究了６羟多巴胺化学性损毁中枢去甲肾上腺素通路和中枢引入前列腺素合成抑制剂消炎痛对脑室注射白细胞介素６、肿瘤坏死因子α诱导下丘脑室旁核小细胞Ｆｏｓ表达的影响。结果显示,这两种处理均可使Ｆｏｓ表达细胞数目明显减少,说明白细胞介素６、肿瘤坏死因子诱导室旁核小细胞神经元Ｆｏｓ表达的作用与中枢去甲肾上腺素通路和中枢前列腺素有关。