查尔酮合酶基因的克隆、全序列分析及在大肠杆菌中的高效表达

类黄酮是植物中的一种重要的次级代谢产物,它与植物的花色形成有关。查尔酮合酶是类黄酮合成途径中的一个关键酶,在植物体内,ＣＨＳ表达量的增加或减少都可能改变花的。从矮牵牛花瓣的ｃＤＮＡ中克隆到了ＣＨＳ－Ａ基因,进行了全序列分析,并与国外已报道的ＣＨＳ－Ａ－序列进行了同源性比较。     

对水稻MADS-box基因M79的表达模式和功能的分析

利用简并引物和T引物,通过RT-PCR, 从水稻减数分裂时期的小花中扩增并克隆出一个MADS-box基因M79,序列分析表明M79与OsMADS7在DNA水平上同源性达到97.5%,推导的蛋白序列同源性却只有91.0%.M79的转录本有5个不同的 poly (A)添加位点,它同OsMADS7一样在水稻中为单拷贝基因,也定位在水稻的第8号染色体上.M79仅在花器官中表达,其表达从减数分裂前期开始贯穿整个花的发育各时期,并且成熟雌蕊中的表达量比成熟雄蕊中多.对两代转基因水稻的分析表明,M79涉及水稻的花时控制,异位表达可使烟草的花期提前,并且还可能参与控制营养生长中的分枝以形成更多的花芽.     

外源甜蛋白thaumatin II基因转入烟草的研究

利用土壤农杆菌系统,将高甜度的外源甜蛋白thaumatin II基因转入烟草细胞,并得到大量转基因植株及其后代。经分子杂交分析确证thaumatin II基因已整合到烟草植株的基因组中,并在转录水平检测到表达。标记基因胭脂碱合成酶(NOS)基因及新霉素磷酸转移酶(NPT II)基因也在转基因植株中正常表达。     

根癌土壤杆菌介导的咖啡转化

用五种不同的根癌土壤杆菌转化咖啡栽培品种小粒种的成熟胚培养物,筛选出对咖啡侵染力较强的菌株Gv3111(pTiB6s3)和A281(pTiB0542)。在无激素的Ms培养基(MsD)上得到淡黄色、松脆、生长迅速的瘤性愈伤组织,继代培养4—6周后,产生大量的畸胎芽。转化体经Opine检测,分别含有特异的章鱼碱或农杆碱。GV3111转化体的DNA分子杂交结果表明,在咖啡的基因组内有T-DNA的插入。用带有GUS基因和NPT I基因的双元载体系统pBI121／Gv3111和pBl121／A281转化咖啡子叶,转化后第三天可以检测到Gus基因的瞬时表达。在含卡那霉素(Kanamycin,Km)的Ms选择培养基上,得到抗性愈伤组织,这些愈伤组织仍能检测到GUS基因的表达·     

籼稻明恢63成熟种子愈伤组织的诱导及转基因水稻的抗性检测

利用不含附加营养成分的2,4-D培养基（2mg/L）诱导明恢63的成熟种子,9天预诱导后获得了大量的愈伤组织。利用基因枪辅助的土壤农杆菌转化法将天花粉蛋白（Trichosanthin, TCS）基因转入籼稻明恢63的愈伤组织,并通过再生（含有3mg/L 6-BA, 0.5mg/L ABA和1mg/L NAA的N6培养基）获得了转基因植物。 Southern blot分析和Western blot检测证明外源基因已经插入到T0代明恢63的基因组中并获得了表达。初步研究结果表明,转基因水稻对稻瘟病菌侵染具有抗性。     

定好"九五"科研规划,迎接世纪最后一役──在1995年院工作会议上的讲话

定好＂九五＂科研规划,迎接世纪最后一役──在１９９５年院工作会议上的讲话孟广震（中国科学院应用研究与发展局,北京１００８６４）制定科研发展规划在科研管理全过程中是非常关键的一环。规划对今后的科研活动有着重要的导向和规范作用,具有重要意义。应用研究与发展工作约覆盖我院７０％的科研活动,我局已把制定＂九五＂科研规划当成头等大事列入当前的工作日程,并投入大量时间和精力。     

人溶菌酶基因的合成和克隆

用固相亚磷酰胺法合成了人溶菌酶的全基因,全长为409bp,它包括了编码人溶菌酶的结梅基因,起始密码于ATG,终止密码子TAA、TGA,以及两端的BamHI和SphI的识别顺序。整个基因分成24个寡聚核苷酸片段进行合成,每个片段长度分别为26至38个核苷酸．然后用两种方法酶促连接成完整的人溶菌酶基因。基因克隆到M13载体上。用点杂交和限制酶酶切分析确定阳性克隆株。用双脱氧链终止法进行序列分析,证实所合成的人溶菌酶基因序列与设计的完全一致。     

具有高活力天门冬氨酸酶的大肠杆菌AS1．881固定化细胞

1．大肠杆菌Asl．881是一株天门冬氨酸酶的高产菌株,每毫升培养物为2000单位左右,约相当于每克湿细胞10万单位。 2．比较了琼脂凝腔包埋法和聚丙烯酰胺凝肢包埋法两种制备固定化细胞的方法,前者较后者有较大的优越性：收率高,无毒,成本低,方法简便. 3．比较了固定化细胞和自然细胞天门冬氨酸酶的一些生物化学性质：pH、温度和二价金属离子对两者酶促反应速度的影响相似;固定化细胞热稳定性较差,但Mn2+,Mg2+,Ca2+,Fc2+等二价金属离子对热钝化有保护作用;在底物和pH6.5柠檬酸缓冲液中于37℃保温,两种细胞的酶活力均有显著提高。 4．固定化细胞柱可被用于连续生产L一天门冬氨酸,包埋80克湿细胞的固定化细胞柱在37℃连续工作20天,可催化约1000升1M反丁烯二酸铵完全转化为L-天门冬氨酸,并保存其大部分酶活力。