蒺藜苜蓿MtROP5启动子与GUS基因融合构建的稳定转化及其表达特性

本文以3～4周大小的蒺藜苜蓿R108．1的叶片为外植体,通过根癌农杆菌介导的遗传转化系统将MtROP5启动子与GUS报告基因的融合构建导入蒺藜苜蓿中,该转化系统经体胚发生产生转化的再生植株。利用PCR扩增对转化植株进行初步鉴定,并通过GUS4J6学染色法分析MtROP5启动子的组织表达特性。结果表~）]MtROP5启动子主要在蒺藜苜蓿根、花、果荚、叶片和种子中表达。     

细胞融合技术

细胞融合是生物工程研究的重要内容和基本技术,综述了细胞融合技术中的常用方法：细胞融合仙台病毒（HVI）诱导法、细胞融合PEG（聚乙二醇）诱导法、细胞融合电场诱导法、细胞融合激光诱导法;以及最新研究进展：基于微流控芯片的细胞融合技术、高通量细胞融合芯片.并对它们的优缺点进行简要的评述.     

国内外苜蓿育种中的分子标记技术

概述了分子标记技术在苜蓿系统发育、种质资源、遗传育种以及根瘤菌的特异性等方面的国内外研究进展,简述了几种分子标记技术在苜蓿各研究领域的作用和贡献,并展望了分子标记技术在中国苜蓿研究中的广泛应用前景。     

肺炎链球菌荚膜多糖特异性IgG抗体定量ELISA检测及质量控制要求

检测肺炎链球菌荚膜多糖(PPS)特异性抗体的酶联免疫吸附试验多年来经历了两次主要改进。介绍了WHO推荐的人血清抗肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)荚膜多糖抗体IgG定量ELISA(Pn PS ELISA)检测方法、关键试剂、局限性以及方法验证等内容。ELISA定量检测法,为预防肺炎链球菌的婴幼儿侵袭性疾病提供准确的抗体水平,并对肺炎链球菌疫苗的临床评价提供血清学证据。人血清中肺炎链球菌荚膜多糖抗体IgG是判断肺炎链球菌疫苗效力的重要指标。     

不同培养条件对薄荷试管苗玻璃化现象的影响

以江苏东台产薄荷(M entha haplocalyxB riq.)的茎尖为外植体,以MS为基本培养基,研究了培养基添加物和培养条件对薄荷试管苗玻璃化现象的影响。结果显示,导致薄荷玻璃化苗产生的主要因素是培养基中的6-BA、蔗糖和琼脂浓度以及培养温度和光照时间;当6-BA浓度为2 mg.L-1、蔗糖浓度为4%、琼脂浓度为0.70%、培养温度25℃、光照12 h.d-1(2 000 lx)时,薄荷试管苗的繁殖系数较高,玻璃化苗率较低。     

鼠伤寒结合疫苗研制的初步探讨

通过对鼠伤寒沙门菌LH株的发酵培养,热酚水法提取脂多糖LPS,1%乙酸沸水浴水解90m in脱毒,Super-dex 200柱层析,收集第一峰为鼠伤寒O-SP抗原;然后用CDAP对O-SP活化、ADH衍生后,在EDAC的缩合作用下,结合到破伤风类毒素TT上,制备出鼠伤寒结合疫苗;用含2.5μg多糖鼠伤寒结合疫苗免疫小鼠,以2.5μgO-SP多糖生理盐水溶液以及生理盐水溶液为对照组,间隔14天,免疫三针;以LPS为包被抗原,用间接ELISA法测定血清中抗鼠伤寒LPS IgG抗体。鼠伤寒结合疫苗三针免疫后,小鼠血清抗鼠伤寒LPS IgG抗体效价达到1:80以上的比例为84.2%,而总的几何平均滴度(GMT)达到796;说明制备的鼠伤寒结合疫苗有良好的免疫原性,而且鼠伤寒结合疫苗在小鼠和豚鼠体内有良好的安全性。     

痢疾结合疫苗LPS制备条件的优化研究

通过对痢疾杆菌LPS提取过程中主要制备环节的优化和改进,确立最佳提取条件和纯化过程,并应用优化后的工艺路线分别制备八批次福氏2 a痢疾杆菌和宋内氏痢疾杆菌LPS;福氏2 a痢疾杆菌LPS批平均产量为1.633g,宋内氏痢疾杆菌LPS批产量平均为1.251g,批产量相对稳定,平均产量比优化改进前提高20%以上。LPS经过酸水解、柱层析纯化获得目标O-SP,福氏2 a痢疾杆菌和宋内氏痢疾杆菌O-SP的得率分别为20%和28%。检测结果证明,LPS和O-SP各项指标均符合规程(草案)相关要求。实验为今后痢疾结合疫苗大规模制备工艺的改进和提高打下了基础。     

重组铜绿假单胞菌外毒素A工程菌的高密度发酵与表达

高密度培养表达大肠杆菌生产重组铜绿假单胞菌外毒素A(rEPA)。用上海高机公司的30L自控发酵罐,采用分批补料培养技术,维持葡萄糖的浓度始终处于较低的水平,并分批补加氮源,同时溶氧控制在30%～40%,pH自动调控至7.0,培养至对数中期进行诱导。重组菌最终发酵液光密度(A600)未诱导时达到44,诱导时达到36,在上清液中表达的rEPA蛋白的含量占总蛋白的28.1%,在菌体中表达蛋白含量占总蛋白的4.7%。本实验为rE-PA的大规模生产奠定了基础。     

脂多糖:生物合成、跨膜转运及生物学功能

革兰阴性菌外膜外叶的脂多糖通常由类脂A、核心多糖、O-特异多糖三部分组成。最新的不同革兰阴性细菌的基因组数据方便了脂多糖生物合成的研究。大肠杆菌中与脂多糖生物合成及转运相关的基因及其编码的蛋白大多数已被鉴定出来,在大多数革兰阴性菌中都有这些基因信息。     

基于空间小波变换的生态地理界线识别与定位

为了提高生态地理分界线识别和定位的客观性,探讨了通过空间小波变换获取多尺度模极大值定位过渡带的方法.以NDVI和降水作为小波多尺度分解的对象,应用db3小波核函数分别对49条样带的模极大值进行了多尺度检测,并在GIS中确定其地理坐标.研究结果表明:识别半干旱半湿润生态地理分界线的最佳空间尺度为20～40 km,小于这一尺度定位过程容易受到局部地表覆被因素如城市区域或地形的影响,大于这一尺度由于要素被过度平滑,造成定位不准;从定位点的聚集度分析,NDVI的定位效果好于降水,特别是在较大空间尺度上.而与综合自然地理区划方案中的半干旱半湿润分界线比较,从定位点的方向性、平均最短距离以及均衡度三项指标综合判断,小波变换对于降水过渡带的定位优于对NDVI的定位.研究证实,空间小变换与GIS结合是提高生态地理分界线识别与定位科学性的重要途径,是对专家系统划分界线方法的有力补充和完善.