聚乙二醇20k修饰与转铁蛋白偶联睫状神经营养因子的生物活性对比研究

为了延长重组睫状神经营养因子在体内的保留半衰期,基于CNTF中天然的游离半胱氨酸残基,在前期工作中采用聚乙二醇修饰和转铁蛋白偶联的两种方式对CNTF进行了改造。此后又采用常规分析手段对PEG20k-CNTF和Tf-PEG5k-CNTF进行对比表征。高效凝胶过滤和动态光散射分析结果显示两者拥有相近的表观分子体积。细胞试验结果显示两种耦合物的活性分别下降至未修饰CNTF的50.6%和65.8%。抗体CNTF抗体亲和力结果显示PEG20k修饰后亲合力下降至原蛋白的3.8%,转铁蛋白偶联后保留89.9%原蛋白亲合力。药代动力学结果显示PEG20k-CNTF和Tf-PEG5k-CNTF在SD大鼠血液中的保留半衰期分别为5.34±0.26和8.65±0.60小时,与未修饰rh CNTF相比延长了约21.4倍和34.6倍。药效学结果显示在每周两次每次1.0 mg/kg(rh CNTF等量)的给药频率和剂量下,PEG20k-CNTF比Tf-PEG5k-CNTF更显著地降低实验小鼠体重。     

高效液相尺寸排阻色谱-多角度激光散射定量检测灭活禽流感病毒抗原中完整病毒颗粒

本研究旨在建立一种灭活禽流感病毒原料液中完整病毒颗粒准确定量的方法。针对直接采用高效液相尺寸排阻色谱法（high performance size exclusion chromatography，HPSEC）检测灭活禽流感病毒原液存在杂质干扰的问题，首先以H5N8型抗原为对象，分别考察了聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）沉淀和离子交换色谱法（ion exchange chromatography，IEC）进行预处理。在优化条件下，经DEAE FF阴离子交换层析纯化预处理，杂蛋白去除率为86.87%，病毒血凝回收率为100%。HPSEC分析预处理后的样品，8.5–10.0 min处色谱峰样品电泳检测显示主要为H5N8病毒蛋白，动态光散射分析平均粒径为127.7 nm，推测为完整病毒特征峰；在IEC预处理后的样品中加入抗体进行HPSEC检测，8.5-10.0 min处特征峰消失，显示IEC预处理有效去除了杂质干扰。通过将HPSEC与多角度激光散射技术（multi-angle laser scattering technique，MALLS）联用，可以准确获得样品中完整病毒颗粒的数量，且病毒颗粒数与色谱峰面积具有良好线性关系（R²=0.997）。建立的IEC预处理-HPSEC-MALLS检测方法应用于其他亚型（H7N9）、批次和浓度的病毒原液中完整病毒颗粒数的准确检测，均具有良好适用性，且重复性好，相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）<5%，n=3。