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日本血吸虫脂肪酸结合蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 总被引:5,自引:0,他引:5
用PCR法从日本血吸虫中国大陆株成虫cDNA文库中快速克隆出一大小为600bp左右的DNA片段,DNA序列分析证实,所扩增到的DNA片段中含有日本血吸虫脂肪酸结合蛋白(Sj-14FABPc)基因,将该基因重组到表达型质粒pGEX-2T中,表达的GST融合蛋白分子量是41kD,用谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化的重组蛋白不仅纯度好,而且得率高,纯化产量可达25mg/L培养物,免疫试验结果表明该重组蛋白具有良好的抗原性,为其用作疫苗分子创造了条件。 相似文献
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编码日本血吸虫抱雌沟蛋白及肌动蛋白的基因性别间的表达差异性 总被引:4,自引:0,他引:4
研究了所克隆的日本血吸虫两个基因的性别间的表达差异性。分别将所克隆到的编码日本血吸虫抱雌沟蛋白的cDNA(SjGCP1)和肌动蛋白的cDNA(SjAct)制成DNA探针,利用Southern blotting,Northern blotting和斑点印迹法对其相应基因性别间的表达差异性进行了研究。结果显示,日本血吸虫抱雌沟蛋白的基因在雄虫中转录而雌虫中不转录,血吸虫肌动蛋白基因在雄虫中转录量高于雌虫,表现出转录量的差异。证明这两个基因转录具有性别间的表达差异性。 相似文献
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以日本血吸虫mRNA为模板,用RTPCR法快速克隆到一大小约600bp的DNA片段,DNA序列分析证实,所扩增到的DNA片段中含有日本血吸虫22.6膜相关蛋白(Sj22.6(Ch))基因,将该基因重组到表达型质粒pGEX-4T中,表达的GST融合蛋白分子量约48kD,用谷胱甘肽琼脂糖凝胶亲和层析柱纯化的重组蛋白不仅纯度好,而且得率高,纯化产量可达40mg/L培养物,免疫试验结果表明该重组蛋白具有良好的抗原性,为其在血吸虫病抗感染中的免疫作用研究创造了条件。 相似文献
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乙肝表面抗原专一的单链嵌合抗体在大肠杆菌中的表达 总被引:3,自引:0,他引:3
利用重组PCR技术将乙肝表面抗原专一单抗的Vk与人源的C基因拼接成轻链嵌合抗体V-C,再通过编码柔性肽段(Gly4Ser)的Linker与V连接成单链嵌合抗体ScFV-C,并分别在大肠杆菌的热敏与分泌型表达系统中进行表达。表达产物的Western-blot与间接ELISA检测结果表明,SCFv-C产两种系统中的表达产物均具有抗原结合活性,并已在分泌肽的指导下ScFv-Ck能被E.coli分泌出胞外。 相似文献
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人α—干扰素基因在昆虫细胞中的表达 总被引:3,自引:1,他引:2
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蓖麻蚕核糖体核糖核酸基因上18S、28S和5.8S核糖体核糖核酸基因的定位 总被引:1,自引:0,他引:1
蓖麻蚕的核糖体核糖核酸(rRNA)的基因(rDNA)是多拷贝基因,其重复单位成线性方向排列。在每一重复单位中含有18S、28S和5.8S rRNA基因各一个。了解它们的排列状况是认识rDNA结构的基础。本文将无性繁殖的该rDNA用各种限制性内切酶水解后,制成Southern转移膜与放射性同位素标记的18S、28S和5.8S rRNA杂交;又将18S和28S rRNA制成Northern转移膜与放射性同位素标记的rDNA片段杂交,从而排出18S、28S和5.8S rRNA基因在rDNA上面的相对位置。 相似文献
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人源的核糖核酸酶抑制蛋白 (ribonucleaseinhibitor,RI)是一种富含亮氨酸和半胱氨酸残基的酸性蛋白质 ,分子量为 5 0kD。从人胚胎肝cDNA文库中克隆到一个核糖核酸酶抑制蛋白RI基因的变体 (ribonucleaseinhibitorvari ant,RIv)。序列分析表明 ,与RI相比较 ,RIv序列中仅有Arg359Ala和Leu36 5Pro两个氨基酸突变 ,而核苷酸同源性较低 ,为 78%。将RIv克隆于pET2 8a( ) ,并转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,IPTG诱导表达 ,利用 6×His亲和层析柱纯化得到了His RIv重组蛋白。将RIv克隆于转移载体pBacPAK8,利用家蚕核型多角体病毒 (BmNPV)表达系统表达得到重组RIv。体外活性测定实验表明 ,重组RIv具有抑制牛胰RNaseA酶解 2 8S和 18SrRNA的作用。 相似文献
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扩展青霉PF898碱性脂肪酶基因组DNA的克隆及序列分析 总被引:6,自引:0,他引:6
扩展青霉 (Penicilliumexpansum)PF898可产生一种具有重要工业生产价值的碱性脂肪酶(PEL) .在通过 3′RACE和 5′RACE获得PEL完整的cDNA序列的基础上 ,通过PCR方法首次克隆了该脂肪酶的完整的基因组DNA序列 (GenBank登录号为AF330 6 35 ) .该脂肪酶DNA全长 14 0 4bp ,包括PEL编码区、3′非翻译区和部分 5′非翻译区基因的序列 .编码区DNA由 1135个碱基组成 ,含有 5个内含子 ,大小分别为 5 8bp、4 7bp、5 0bp、5 6bp和 6 9bp .在已报道的丝状真菌脂肪酶中 ,PEL基因的内含子数量最多 ,而其大小与其它丝状真菌脂肪酶基因的内含子一样 ,均为只有几十个碱基的小内含子 .PCR扩增获得的PLEDNA序列还包括由 195个碱基组成的 3′端非编码区序列 ,74个碱基的部分 5′端非编码区序列 .PELDNA全长序列中的 - 2 4至 - 2 7nt为TATAbox ,终止码TGA下游15 6nt出现AATAAA序列 ,TGA下游 182位出现poly(A)尾 ,为典型的真核基因结构 .同源性序列分析表明 ,PEL与其它真菌来源脂肪酶的基因组DNA序列同源性约为 39%~ 4 9% ,PEL内含子之间或PEL内含子与其它丝状真菌脂肪酶基因的内含子之间的序列同源性约 4 2 %~ 5 7% . 相似文献
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扩展青霉PF898碱性脂肪酶cDNA的克隆及序列分析 总被引:13,自引:0,他引:13
扩展青霉 (Penicilliumexpansum)PF898可产生一种具有工业价值的碱性脂肪酶 (PEL) .在测定了其N端 12个氨基酸残基序列的基础上 ,通过RT PCR、5′RACE、基因克隆及序列测定 ,获得了PEL完整的cDNA序列 (GenBank登录号为AF2 84 0 6 4 ) .cDNA全长 10 5 0bp ,包括PEL编码区、3′非翻译区和部分 5′非翻译区基因的序列 .编码区cDNA由 85 5个碱基组成 ,编码 1个由 2 85个氨基酸残基组成的酶蛋白 ,其信号肽及前肽部分由 2 7个氨基酸残基组成 ,成熟肽部分由 2 5 8个氨基酸残基组成 .根据氨基酸组成推导该脂肪酶蛋白的分子量为 2 7 3kD .该脂肪酶的氨基酸序列 130~ 134位上有各类脂肪酶中普遍存在的G X S X G保守序列 相似文献
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中枢神经系统靶向性CuZn—SOD的构建和表达 总被引:1,自引:0,他引:1
SOD对中风等由氧自由基毒性引起的神经性紊乱有保护作用,但因血脑屏障使血液中的SOD不能进入中枢神经系统。靶向性SOD可能是进入该系统的途径之一。将人CuZn-SODcDNA与破伤风毒素C部分基因融合,分别整合进pET-22b(+)及pFastBacHTb载体中,并分别在E.coli及粉纹夜蛾Tn-5B1-4细胞中表达。表达产物分子量为68kD,与理论计算值。蛋白质印迹实验证实,其表达产物能与人CuZn-SOD多克隆抗人本及抗破伤毒素全毒互抗体有免疫反应。在Tn细胞中高效表达,表达产物占可溶性总蛋白质的20%,表达产物有SOD活性,且具有逆行轴突运输的能力。这为靶向性SOD的进一步应用创造了条件。 相似文献