规模化猪场猪支原体肺炎控制及净化技术研究

在四川蒲江某规模化８养猪场 ,对该场的猪支原体肺炎采用以监测、免疫为主,隔离、治 疗、淘汰、消毒等综合防制技术进行控制与净化,对全场有猪支原体肺炎症状的猪及可疑病猪进行隔治疗,治愈后的猪经与易感猪同居感染不发病,分离猪肺炎支原体为阴性,试验表明治愈后的猪不带菌。对全场种猪和后备健康猪群进行猪支原体肺炎疫苗的免疫接种,经抗体监测和攻毒试验,免疫后２４０天猪支原体肺炎的ＩＨＡ抗体仍可达到１：１０,保护率     

创新机制提升农村环境长效管理水平

近年来,浙江省海宁市以科学发展观为指导,大力实施统筹城乡发展战略,加快推进城乡一体化。根据省千万工程和嘉兴市百千工程的总体部署,全市上下组织开展了以小康示范、百村整治工程为龙头的新农村建设。到2009年     

绿色棉纤维发育过程中DNA表观遗传变化的甲基化敏感扩增多态性分析

【目的】分析绿色棉纤维发育过程中DNA甲基化状态差异。【方法】利用2组限制性内切酶Eco RⅠ/HpaⅡ和Eco RⅠ/MspⅠ对绿絮棉1号纤维基因组甲基化位点进行识别和切割,并采用甲基化敏感扩增多态性引物对切割产物进行扩增,分析基因组内5'-CCGG-3'位点的甲基化状态;同时对扩增的差异片段进行测序,分析其生物学功能。【结果】66对甲基化敏感扩增多态性引物共扩增出4112个条带;平均每个样品共扩增出822.4个带型,平均每对引物扩增出12.46个片段。随着绿色棉纤维的发育,甲基化条带总数、甲基化条带比率、全甲基化条带百分比均逐渐升高;其中,开花后10、15、20和25 d时甲基化条带总数分别比开花后5 d时增加11.45%,13.86%,20.10%和33.13%。与开花后5 d相比,开花后10、15、20和25 d时纤维DNA发生甲基化变化位点的比例分别为3.15%,3.43%,3.65%和2.52%;而去甲基化位点的比例分别为12.87%,14.72%,13.31%和48.81%。通过测序和Blast分析表明,17个片段与已知的功能基因同源性较高,包括棉花线粒体基因组、丝氨酸蛋白酶基因和酯酶基因,且这些基因均在开花后25 d发生去甲基化。【结论】绿色棉纤维发育过程中DNA发生了甲基化与去甲基化现象。     

家兔皮肤真菌病防控技术

本文主要从家兔的引种隔离检疫、消毒、药物防治和疫情处置几个环节,简要叙述了如何加强对家兔皮肤真菌病的防控。     

绞股蓝抗TMV蛋白的分离及编码基因的序列分析*

以半叶法测定抗烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus，TMV)活性为监控手段，采用(NH4）2SO4分级沉淀、阳离子交换及亲和层析等方法，从绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum)中分离到一种抗TMV蛋白，其分子量约为27kD，N端19个氨基酸残基为DINFSLAGADGQTYNTFIA(SWISS—PROT登录号为P83206)。N端序列分析表明，它是一种新的核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating proteins，RIPs)，命名为gynostemmin。gynostemmin与其它植物RIPs的N端同源性介于10％-73％之间，其中Y14F17构成植物RIPsN端的“钉子”位点；gynostemmin与葫芦科植物RIPs的同源性为31％～73％，其中F4L6A9Y14F17I18,6个残基为葫芦科植物RIPsN端“钉子”位点。根据N端序列和葫芦科植物RIPs下游保守氨基酸序列设计简并引物，采用PCR扩增并克隆了编码gynostemmin的基因，包含609个碱基，推导出的203个氨基酸残基约占成熟蛋白的75％，软件分析表明，它含有核糖体失活蛋白的活性位点区。     

抗病虫基因新资源:绞股蓝核糖体失活蛋白基因

核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating protein,RIP) 具有广谱的抗植物病毒活性和抵抗多种植物病原真菌以及农业害虫的活性,在植物保护上具有广阔的应用前景.从传统中草药绞股蓝中分离的13个核糖体失活蛋白基因序列,基因序列登录代码为:AY075115,AY134616-7,AY279104-7,AY279218-20,AY160767-9,为培育抗病虫作物新品种提供了新资源.     

利用生物信息学手段获得两个对硫磷水解酶

以黄杆菌(Flavobacterium)对硫磷水解酶(parathion hydrolase)的序列(AAA24930．1)对芽孢杆菌的基因组进行BLASTP,从Bacillus halodurans中发现两个对硫磷水解酶类似蛋白PTEa和PTEb,长度分别为679和331个氨基酸。利用conserved domain search和motif scan软件分析的结果证实它们具有对硫磷水解酶的结构特征。PTEa和PTEb的对硫磷水解酶上游标志区分别是“GVCACHEHL”和“GFTYSHEHI”,与标准的“G—x—T—L—x—H—E—H-【LIV]”大致吻合。PTEb的对硫磷水解酶下游标志区“AVARAHHETKAPIHSH”也与典型的“A—x—A—x—A—x(4)-G—x—P-[LIVM]-x(2)-H”基本一致,而PTEa中缺乏明显的下游标志区。PTEb序列对枯草杆菌基因组TBLASTN的结果表明枯草杆菌也可能存在对硫磷水解酶类似蛋白。     

C-末端缺失和完整的绞股蓝核糖体失活蛋白在大肠杆菌中的表达

将绞股蓝(Cynostrmma pentaphyllum)核糖体失活蛋白(Ribosome-Inactivating Protein，RIP)DNA部分片段和cDNA序列(GenBank登录号分别为AY075115和AY279219)插入到表达载体pGEX-2T的BamH 1/EcoR1位点处，构建了与谷胱甘肽S-转移酶(Glutathione S-transferase，GST)融合表达的载体。诱导表达和序列测定验证读码框的结果表明，C-末端缺失和完整的绞股蓝RIP在大肠杆菌DH5α菌株中实现了融合表达。     

卡那霉素浓度对抗虫棉和非抗虫棉种子萌发及苗期生长影响的比对

转基因抗虫棉是将能表达抗虫蛋白的基因转入到非抗虫棉中,使棉花具有一定的抗虫能力,其叶片对外源卡那霉素处理不敏感,而非转基因抗虫棉不携带嵌合基因卡那霉素,其叶片对外源卡那霉素处理敏感.本试验采用不同的卡那霉素浓度对抗虫棉和非抗虫棉种子进行浸泡处理,并将已萌发的棉花种子种植到田间.