体外定向化学诱导成人脂肪源性间充质干细胞分化为心肌样细胞

目的：研究在体外不同浓度、不同作用时间诱导条件下5-氮胞苷（5-aza）对脂肪间充质干细胞（ADMSCs）诱导分化为心肌细胞的影响。方法：酶消化筛选法体外分离ADMSCs并传代培养，流式细胞仪鉴定细胞CD44、CD34的表达，不同浓度5-aza（1、5、10、15、20μmol／L）分别诱导12、24、48、72h，相差显微镜下观察细胞形态变化；诱导后4周时免疫细胞化学鉴定心肌特异性肌钙蛋白Ⅰ（cTn—Ⅰ）的表达，分析细胞转化率。结果：体外分离培养的ADMSCs表达CD44，不表达CD34；5-aza诱导后4周时免疫细胞化学显示cTn—Ⅰ表达阳性，以10μmol／L5-aza诱导24h为适宜诱导条件；结论：体外5-aza化学诱导下成人脂肪组织间充质干细胞具有向心肌细胞分化的潜能。     

心电图avR导联ST段改变对急性心肌梗死患者预后的判断价值

目的 探讨心电图avR导联ST段改变对急性心肌梗死患者预后的判断价值.方法 回顾性分析2013年2月至2015年6月期间我院心内科收治的140例急性心肌梗死患者的临床及心电图资料,将52例avR导联ST段抬高者纳入A组,42例压低者纳入B组,余46例不偏移者纳入C组,比较三组患者冠脉三支病变发生率、冠脉内梗死相关动脉(IRA)分布及主要不良心血管事件发生情况.结果 A组、C组患者的三支病变发病率(分别为36.54%、34.78%)及主要不良心血管事件发病率(分别为19.23%、19.57%)明显高于B组的(分别为11.90%、4.76%),差异有统计学意义(P<0.05);A组患者IRA部位在左主干、左前降支近段发生率(分别为23.07%、57.69%)均明显高于B组(7.14%,21.43%)、C组(6.52%,6.52%),C组患者IRA部位在左回旋支发生率(56.52%)明显高于A组(7.69%)、B组(30.95%),差异均有统计学意义(P<0.05).结论 急性心肌梗死患者出现心电图aVR导联ST段改变对冠脉病变数量、部位及预后有较高的预测价值.     

成人脂肪间充质干细胞冻存前后的生物学特性

目的:目前关于脂肪间充质干细胞冻存和复苏的条件,以及冻存复苏过程对其基本生物学特性以及诱导分化能力影响的研究较少.实验拟观察冻存前后脂肪间充质干细胞的一般生物学特性以及向心肌细胞方向诱导分化的潜能.方法:实验于2006-12/2007-07在解放军兰州军区兰州总医院医学实验中心,解放军兰州军区重点实验室完成.①实验材料:成人腹部大网膜脂肪组织由解放军兰州军区兰州总医院普通外科提供.实验经患者知情同意,并经医院伦理委员会批准.②实验方法:白成人脂肪组织分离培养脂肪间充质干细胞.取对数生长期的第3代细胞,液氮中经短期3个月及较长期20个月冻存,复苏后台盼蓝拒染实验检测细胞存活率,采用MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞表面分子.取生长状态良好的脂肪间充质干细胞,以5-氮杂胞苷进行体外诱导,诱导后第28天采用免疫荧光技术检测心肌特异性肌钙蛋白-I,计算心肌样细胞转化率.结果:①短期冻存组与较长期冻存组的细胞存活率无差异.②短期冻存组、较长期冻存组,冻存前后脂肪间充质干细胞的生长曲线无明显差别,呈"S"形:接种后第1、2天为潜伏期,第3天进入对数生长期,第7天达顶点,第8天略有减少.⑨短期冻存组细胞呈CD29阳性、HLA-DR阴性;较长期冻存组细胞呈CD44阳性、CD34阴性,两组冻存前后脂肪间充质干细胞的表面分子表达无差异(P>0.05).④冻存前后脂肪间充质干细胞经5-氮杂胞苷诱导后第28天时心肌特异性肌钙蛋白-I均呈阳性表达.短期及较长期冻存组冻存前后诱导转化率无差别,两组间也无筹别.结论:脂肪间充质干细胞可经受短期及较长期冻存,复苏后细胞的存活率较高,基本生物学特性及诱导分化潜能无明显变化.     

刺囊酸对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌缺血损伤的影响

目的：观察刺囊酸对异丙肾上腺素（ISO）诱导大鼠心肌缺血损伤的影响。方法：将30只健康雄性sD大鼠随机等分为对照组（S）、异丙肾组（I）、刺囊酸＋异丙。肾（E）组,并造模给药。给ISO后24h,麻醉处死动物。测定血清肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）表达。HE染色后在光镜下观察心肌组织形态学改变。结果：和I组比较,E组血清中LDH、CK和MDA含量明显降低（P〈0．01）,SOD的活力明显升高（P〈0．01）。E组大鼠心肌病变的程度较I组减轻较明显。结论：刺囊酸对ISO诱导大鼠缺血损伤的心肌具有一定的保护作用。     

糖耐量减低患者胰岛素抵抗与血脂变化的临床观察

目的 探讨糖耐量减低（IGT）患者胰岛素抵抗和血脂的相关性.方法 选择2011年1月～2013年1月来本院下属5家社康就诊的120例IGT患者作为实验组,选取同时期120例糖耐量正常志愿者作为对照组,分别测定两组入选者空腹胰岛素（FIns）水平、餐后2h胰岛素（2 h Ins）水平、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、游离脂肪酸（FFA）等各项指标水平,并计算两组入选者胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、胰岛素分泌指数（HOMA-3）以及葡萄糖处置指数（GDI）等.结果 实验组TG、FFA、空腹血糖均显著高于对照组,HDL-C明显低于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）,而两组TC、LDL-C差异无统计学意义（P＞0.05）;实验组HOMA-IR、FIns、2 h Ins水平显著高于对照组,GDI显著低于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.结论 IGT患者有明显的胰岛索抵抗以及高血脂症状,因此临床中要注意防止出现高脂血症.     

无症状性心肌缺血的动态心电图分析

目的 探讨动态心电图对无症状心肌缺血的诊断价值.方法 应用holter对238例冠心病患者进行检测.结果 218例有缺血型ST改变（91.6％）,其中72.48％的缺血性ST改变阵次为无症状心肌缺血.有症状心肌缺血发生占27.52％.结论 holter是检测无症状心肌缺血的重要方法,临床上应高度重视无症状心肌缺血的发生并积极治疗.     

辛伐他汀逆转左室肥厚的作用与抑癌基因PTEN表达的关系

目的观察辛伐他汀逆转自发性高血压大鼠(SHR)左心室肥厚(LVH)的作用及其与抑癌基因-第10号染色体缺失的张力蛋白同源区(PTEN)表达的关系.方法16只雄性8周龄SHR测量体重和收缩压后,随机分为SHR治疗组和SHR对照组,分别给予辛伐他汀和安慰剂灌胃治疗,性别、年龄、数量匹配的Wistar大鼠给予安慰剂治疗作为正常对照组,疗程10周,观察辛伐他汀对大鼠收缩压和左心室重量/体重比值(LVW/BW)的影响,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Westernblot)检测辛伐他汀对心肌组织PTEN表达的影响.结果(1)治疗前两组SHR收缩压无显著差异(P＞0.05),均高于Wistar正常对照组大鼠(P＜0.01);给予辛伐他汀后,SHR治疗组收缩压(217.3±8.5)mmHg较SHR对照组(220.8±9.9)mm Hg略有降低,但无统计学意义(P＞0.05),且两组SHR收缩压仍高于Wistar正常对照组大鼠(126.0±5.8)mm Hg,差异非常显著(P＜0.01).(2)SHR对照组大鼠的LVM/BW(4.10±0.13)mg/g明显高于Wistar正常对照组(3.04±0.12)mg/g,并有统计学意义(P＜0.01),而SHR辛伐他汀治疗组的LVM/BW(3.73±0.08)mg/g较SHR对照组明显下降(P＜0.01).(3)SHR对照组大鼠心肌组织PTEN的mRNA表达水平(0.36±0.04)低于Wistar正常对照组(0.87±0.05),差异非常显著(P＜0.01),SHR治疗组大鼠的PTEN mRNA表达水平(0.60±0.05)较SHR对照组显著升高,并有统计学意义(P＜0.01).(4)Wistar正常对照组、SHR对照组和SHR治疗组大鼠心肌组织PTEN蛋白表达水平分别为50.53±2.92、24.65±3.89和40.32±4.04,其中SHR对照组明显低于Wistar正常对照组(P＜0.01),SHR治疗组则较SHR对照组显著升高(P＜0.01).结论辛伐他汀能够逆转SHR的LVH,其机制可能与PTEN表达水平增加有关.     

脂肪间充质干细胞移植对兔心肌梗死后微血管生成及心功能的影响

目的 探讨脂肪间充质干细胞(adipose tissue-derived mesenchymal stem cells,ADMSCs)移植对兔心肌梗死后微血管生成的可能机制及心功能的变化情况.方法 30只健康日本大耳白兔,完全随机分为假手术组、心肌梗死对照组和ADMSCs移植组(ADMSCs组).结扎兔前室间支,建立急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)动物模型,AMI 1 h 内将4',6-二脒-2-苯基吲哚(4',6-diamidio-2-phenylindole,DAPI)标记的第3代ADMSCs植入ADMSCs组梗死心肌,对照组及假手术组注射等量磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffered solution, PBS).术前及术后4周分别做超声心动图检查其心功能变化.处死动物,取其心脏,采用免疫组织化学法检测梗死区新生血管微血管密度,RT-PCR 检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)和碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)的表达.结果 ADMSCs组荧光显微镜下可以观察到DAPI标记细胞存在,部分分化为心肌样细胞;超声心动图证实移植后4周ADMSCs组心功能较心肌梗死对照组改善(P<0.05);ADMSCs组较心肌梗死对照组梗死区微血管密度明显增高[(20.00±2.65)vs(7.75±2.12),P<0.05];ADMSCs组bFGF和VEGF的表达水平均较心肌梗死对照组明显增高[(0.590±0.028)vs(0.569±0.021),(0.913±0.030)vs(0.886±0.049),P<0.05].结论 ADMSCs移植促进心肌梗死区微血管的生成,并改善心脏功能,其机制可能与促进bFGF、VEGF的表达有关.     

左西孟旦治疗心血管危重症的临床研究进展

左西孟旦是新近研发的一种钙离子增敏剂,通过发挥独立于β-肾上腺素能的强心作用而治疗失代偿期心力衰竭（HF）,在一些难治性HF治疗中疗效明显。现有证据表明左西孟旦在心源性休克,心脏围手术期和感染性休克等心血管危重症患者治疗中是安全有效的,能显著减少患者死亡率。但上述结论仍有待进一步随机对照研究（RCT）证实。     

构建线粒体钙离子摄入蛋白1慢病毒表达载体及在H9C2细胞中的应用

BACKGROUND: Mitochondrial calcium uptake 1 (MICU1) is one of the important molecules to maintain the mitochondrial calcium homeostasis. The regulation of MICU1 to mitochondrial calcium homeostasis may play an important role in diabetic cardiomyopathy, but the underlying mechanism remains unclear. OBJECTIVE:To construct a lentiviral vector carrying MICU1 gene to transfect H9C2 cells, and then to assess MICU1 level in H9C2 cells thereby establishing a platform for researching the occurrence and development of diabetic cardiomyopathy at a cellular level. METHODS: DNA fragments of MICU1 were amplified by PCR, cleaved with Spe I, EcoR I and cloned into the lentiviral vector pRRLsin.CMV.eGFP to construct pRRLsin.CMV.MICU1-eGFP vector. 293T cells were co-transfected with recombined pCMVDR8.91 and pCMV-VSVG to produce pRRLsin.CMV.MICU1-eGFP lentiviral viruses, and then used to infect H9C2 cells. mRNA and protein expressions of MICU1 in the transfected H9C2 cells were evaluated by real-time PCR and western blot assay. Mitochondrial calcium level in Rhod-2-stained H9C2 cells was tested under confocal microscope. RESULTS AND CONCLUSION: The recombinant inducible lentiviral vector containing MICU1 gene was successfully constructed. 293T could express green fluorescent protein with increased MICU1 level after pRRLsin.CMV.MICU1-eGFP transfection. The mRNA and protein expressions of MICU1 in the infected H9C2 group were obviously up-regulated compared with the other groups. MICU1 could remarkably improve the mitochondrial calcium level under Rhod-2 staining. These results show that pRRLsin.CMV.MICU1-eGFP lentiviral viruses are efficient to transfect H9C2 cells, which will be powered to lay a foundation for the immortalized cell line establishment. 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程