Leptin在大鼠肝缺血/再灌注介导的肠道损伤中的作用

目的:研究瘦素(leptin)在肝缺血/再灌注(H-I/R)后肠道内的表达变化,并探讨 leptin在H-I/R介导的肠道损伤中的作用.方法:建立大鼠70%H-I/R模型,大鼠随机分成5组,每组9只,依次为假手术(Sham)组、肝缺血60 min/再灌注60 min(I60'R60')组、I60'R150'组、I60'R240'组和I60'R360'组.采用酶比色法检测损伤后血清二胺氧化酶活性,采用HE染色和免疫组织化学法分别检测损伤后十二指肠的病理改变和leptin蛋白表达,并采用逆转录-PCR法观察损伤后十二指肠leptin mRNA达的变化.结果:与损伤后Sham组比较,四个再灌注组血清二胺氧化酶活性无显著差异,但I60'R60'组显著高于I60'R360'组(P=0.0077).病理学观察提示H-I/R早期的十二指肠损伤较重而后期逐步减轻.与损伤后sham组十二指肠leptin蛋白表达相比,I60'R240'、I60'R360'组显著升高(0.126503±0.005873,0.129458±0.003755VS 0.079269±0.001995,均P＜0.01),再灌注组之间按I60'R360'、I60'R240'、I60'R60'、I60'R150'组的顺序依次递减.与损伤后Sham组十二指肠leptin mRNA表达相比,I60'R150'组显著降低(0.944±0.033 VS 1.022±0.011,P=0.049).结论:Leptin在H-I/R后肠道内发生的表达变化与肠道损伤密切相关,提示 leptin可能作为一种保护因子对抗H-I/R介导的肠道损伤.     

利多卡因对大鼠肠缺血再灌注所致急性肺损伤的保护作用

观察利多卡因对肠缺血再灌注（I／R）所致急性肺损伤（ALI）的保护作用。成年SD大鼠随机分为4组（n＝8）：对照组，只分离而不阻断肠系膜上动脉；I／R组，肠I／R（60／180min）；利多卡因组（2组），分别于再灌注即刻或再灌注60min后静脉给利多卡因2mg/kg。利多卡因再灌注即刻用药组MAP下降，肺通透性、血中TNF－α水平及肺组织TNF-α mRNA表达增高，与I／R组比较差异显著（P＜0.05）。肺组织病理损害亦明显减轻；再灌注60min，用药对MAP、血中TNF－α水平无明显影响（P＞0.05），病理损害也无明显改善。结果提示，预防性应用利多卡因可减轻肠I／R后肺损伤，可能与其减少PMN肺内聚集以及抑制TNF－α合成有关。     

瘦素保护脓毒症后肾功能及其机制的研究

目的观察脓毒症对肾功能及相关酶活性的影响,探讨瘦素(Leptin)在急性炎症反应中的作用。方法采用盲肠结扎穿孔术制备小鼠脓毒症模型,用分光光度法检测血尿酸(UA)以及肾组织匀浆液中髓过氧化物酶(MPO)、谷胱甘肽S转移酶(GST)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、超氧化物歧化酶(SOD)等4种与自由基合成、解毒和嘌呤生成代谢相关的酶活性;采用放射免疫分析法测定肾组织匀浆液中Leptin水平,同时观察肾组织病理学改变。结果腹腔内注射Leptin(0.08mg/kg)和消炎痛(8mg/kg)可分别降低脓毒症后12h时血清UA水平〔分别为(295.79±80.86)μmol/L和(281.78±46.35)μmol/L,脓毒症组为(474.03±75.22)μmol/L〕;Leptin保护组脓毒症后12h和消炎痛保护组脓毒症后6h肾组织Leptin水平〔分别为(196.00±134.30)μg/g和(169.30±132.00)μg/g〕亦显著高于脓毒症组〔(61.65±27.29)μg/g〕。而Leptin和消炎痛保护后6h和12h对肾组织MPO、GST、XOD和SOD等酶活性有不同程度的影响,但结果并非完全抑制或促进。从总体上分析,Leptin和消炎痛有促进氧自由基清除和灭活的功能。结论低剂量Leptin可能对脓毒症后肾功能有一定的改善作用,其机制可能同消炎痛相似,与清除和灭活肾组织中氧自由基有关。     

不饱和脂肪酸对枯否细胞功能的影响

大鼠饲喂4周鱼油后，盲肠结扎穿孔，术后12h，摘取肝脏，分离枯否细胞并培养，检测培养液中细胞因子炎性介质、抗氧化酶和自由基产物、分析枯否细胞膜磷脂和花生四烯酸。结果表明，术前喂鱼油的大鼠，枯否细胞培养液中TNF，IL-l、IL-6、TXB2、6-kPGFt。明显降低，SOD明显升高，MDA明显减少。与此同时，枯否细胞膜PL及AA的古量明显增加、提示鱼油有修复脓毒症大鼠枯否细胞膜PL成分，调节枯否细胞功能的作用。     

黄腐酸对消炎痛或酒精引起的大鼠胃损伤和胃粘膜前列腺素E生成的影响

本文观察了黄腐酸对消炎痛或酒精引起的大鼠胃损伤和胃粘膜前列腺素E生成的影响。结果表明:(1)消炎痛能明显地抑制正常大鼠胃粘膜PGE的生成,同时胃粘膜发生严重损伤。(2)消炎痛对胃粘膜PGE生成的抑制作用能被黄腐酸所翻转,同时胃粘膜损伤的形成明显减少。(3)黄腐酸对正常大鼠胃粘膜PGE的生成无影响。(4)黄腐酸对无水酒精引起的胃损伤具有明显的细胞保护作用,但对胃粘膜PGE的生成并无影响。     

前列腺素E(PGE)在肠道疾患方面的实验研究

前列腺素 E(PGE)能被胃肠粘膜合成,也能保护胃肠粘膜,在不同情况下,PGE 又导致胃肠粘膜损伤。Gould(1975)研究了PGE 与溃疡性结肠炎的关系,发现溃疡性结肠炎病人大便中 PGS 增高,以后 Harris 检测了溃疡性结肠炎病人直肠粘膜内 PGE 合成酶的活力,以及血浆内 PG 类,新近还有些研究,探索 PGE 升高引起的病理生理、症候以及激素和柳氮磺胺吡啶阻抑 PGE 合     

磷脂酶A2阻断剂对缺血-再灌注损伤诱 导细胞凋亡和坏死的影响

Objective To investigate the effect of phospholipase A₂(PLA₂) activity on apoptosis and necrosis of neutrophils,thymocytes and splenic cells during ischemiareperfusion (I－R) injury.MethodsThe apoptosis and necrosis of above cells after I－R injury were examined by DNA agarose electrophoresis,fluorescence activated cell sorting,electronic and light microscope.ResultsIt showed that apoptosis or necrosis occurred in all above cells as manifested by a DNA ladder or diffused DNA tail in agarose electrophoresis,after 60 minutes of superior mesenteric artery occlusion followed by 270 minutes reperfusion.The apoptosis or necrosis of neutrophils could be significantly inhibited by the treatment of bromophanacyl bromide (pBPB) and chloroquine,two different PLA₂ inhibitors,or platelet activating factor receptor antagonist SR27417 (5 mg/kg),but these agents did no show obvious effect on thymocytes and splenic cells after I－R injury.ConclusionsThese results indicate that intestinal I－R injury could induce apoptosis or necrosis of thymocytes,splenic cells and neutrophils.Inhibition of PLA₂ in vivo could notably decrease the necrosis of neutrophils.     

白介素8放射免疫分析的建立及初步应用

目的：建立高灵敏和高特异性的ＩＬ－８放射免疫分析方法。方法：用人工重组的白细胞介素８（ＩＬ－８）多次免疫和习,获取商效价的ＩＬ－８抗体。用氯氨Ｔ法制备＾１２３４Ｉ标记ＩＬ－８,经Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５纯化,抗原抗全反应采用平衡一步法,４℃培养２４ｈ后经ＰＲ试剂分离结合和游离的标记抗原。结果：该法测定范围０．２～９．６ｎｇ／ｍｌ,最低检出量迷０．１ｎｇ／ｍｌ,批内和批间误差分别小于５％和１０％。     

脂肪酸结合蛋白放射免疫分析方法的建立及初步应用

用人工重组的人脂肪酸结合蛋白(FABP)多次免疫大耳白兔,获取高效价的FABP抗体.用氯胺T法制备125I-FABP,再经Sephdex G-25纯化;抗原抗体反应采用平衡一步法,4℃培养24h后,经PR试剂分离结合和游离的标记抗原.该法测定范围5-405ng/mL,最低检出量为9ng/mL,批内和批间CV分别小于6.4%和8.5%.用该法测得人血清FABP含量:健康人(45名)为15.68±2.9ng/mL;重症监护病人(46例)为72.08±32.64ng/mL;心脏病患者(73例)为78.95±24.83ng/mL,明显升高.结果表明,本法稳定,简便特异,其灵敏度适于检出人血清FABP水平的变化.     

体内外脓毒症损伤对Leptin表达水平的影响

目的：通过观察体内脓毒症时肺组织及脂多糖（或内毒素,LPS）诱导的体外炎症模型中leptin水平的变化,探讨leptin在脓毒症损伤情况下的作用及意义。方法：建立小鼠的脓毒症损伤模型和LPS诱导的ECV-304细胞炎症损伤模型,用高灵敏的leptin放射免疫分析检测肺组织及细胞上清中leptin水平。结果：脓毒症6h肺组织内leptin显著低于假手术组,而脓毒症12h恢复于假手术组水平之上;leptin保护组6h肺组织内lepin明显高于单纯的脓毒症组,而消炎痛保护组却没有此变化。LPS刺激使ECV-304细胞分泌leptin明显下降（P〈0．05）,且成时间依赖性。结论：lenin可能作为一种炎性因子在脓毒症损伤中发挥一定的保护作用。