铅镉联合作用对大鼠肾小管上皮细胞脂质过氧化的影响

为观察铅镉联合作用对大鼠肾小管上皮细胞脂质过氧化的影响 ,对原代大鼠肾小管上皮细胞提取、纯化、鉴定、培养后 ,采用 3× 3析因设计方法进行染毒实验 ,A组 :醋酸铅 0 0 2mmol L ;B组 :醋酸铅 0 1mmol L ;C组 :氯化镉 0 0 0 1mmol L ;D组 :氯化镉 0 0 0 4mmol L ;E组 :醋酸铅 0 0 2mmol L +氯化镉 0 0 0 1mmol L ;F组 :醋酸铅 0 0 2mmol L +氯化镉 0 0 0 4mmol L ;G组 :醋酸铅 0 1mmol L +氯化镉 0 0 0 1mmol L ;H组 :醋酸铅0 1mmol L +氯化镉 0 0 0 4mmol L。染毒时间为 6小时。经超声波粉碎细胞后 ,测定细胞内谷胱甘肽 (GSH)和丙二醛 (MDA)的含量 ,以及谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH Px)和超氧化物歧化酶 (SOD)的活性。与对照组比较 ,联合染毒组GSH、GSH Px、SOD水平显著降低 ,MDA水平显著升高 ,析因分析表明 ,铅镉联合作用在对大鼠肾小管上皮细胞GSH、SOD、MDA改变方面有交互作用 (P <0 0 5 ) ,即铅镉联合作用呈现增毒作用 ;在对GSH Px改变方面未见交互作用     

抗氧化低密度脂蛋白自身抗体与冠心病的关系

目的:研究抗氧化低密度脂蛋白自身抗体对冠心病发病的影响.方法:对稳定型心绞痛(SAP组,30例)、不稳定型心绞痛(UAP组,32例)、急性心肌梗死(AMI组,28例)和对照组(38例)采用7%聚乙二醇(PEG6000)沉淀法分离血清中抗氧化低密度脂蛋白免疫复合物(OX-LDL-IC).建立抗氧化低密度脂蛋白自身抗体酶联免疫测定方法,同时测定氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)、血清上清中游离的OX-LDL-Ab和沉淀里OX-LDL-IC的OX-LDL-Ab.结果:氧化低密度脂蛋白组OX-LDL、游离OX-LDL-Ab以及OX-LDL-IC水平及其阳性率均高于对照组(P<0.01);AMI组游离OX-LDL-Ab和OX-LDL-IC水平及其阳性率均高于SAP组和UAP组(P<0.05);SAP组和UAP组OX-LDL和OX-LDL-Ab水平及其阳性率差异无统计学意义(P>0.05),而OX-LDL-IC的水平及其阳性率UAP组比SAP组增高(P<0.05).结论:检测患者OX-LDL-IC比单纯测定游离OX-LDL-Ab能更好地判定冠心病病变的严重程度,指导临床治疗.     

当归多糖对小鼠骨骼肌卫星细胞增殖及干细胞因子受体蛋白表达的影响

目的观察在体外造血微环境中,当归多糖(angelica polysaccharides,APS)对不同培养条件下乳鼠骨骼肌卫星细胞(muscle satellite cells,MSCs)增殖及干细胞因子受体蛋白(c-kit)表达的影响。方法原代培养MSC,5天后采用结蛋白(desmin)免疫细胞化学鉴定;细胞随机分为8组,即空白对照组,骨髓基质细胞培养上清组,加入含100、200、300μg/mLAPS的DMEM/F12培养基实验组及经100、200、300μg/mLAPS干预后骨髓基质细胞条件培养基组,采用MTT法检测各组细胞的增殖活性及对细胞进行c-kit免疫细胞化学染色。结果分离培养的MSCs呈desmin染色阳性;MTT法检测发现各条件培养基实验组MSCs增殖显著;c-kit免疫强阳性反应存在于条件培养基培养的各组MSCs中,c-kit主要表达于细胞质。结论经APS干预的骨髓基质细胞条件培养基可以有效改变MSCs的生长特性,明显促进MSCs增殖及c-kit的表达,c-kit在MSCs增殖过程中可能起某种调节作用。     

甲基泼尼松龙冲击疗法引发骨坏死及骨质疏松的血清学研究

目的 探讨内毒素急性应激时甲基泼尼松龙冲击给药对家兔骨坏死、骨质疏松发生与发展的血清学机制.方法 健康新西兰家兔100只随机分为高剂量激素组、内毒素组、内毒素激素组、模型组和对照组5组,每组20只;分别于给药前,给药1、2、5、12周时测定血清胆固醇、三酰甘油、葡萄糖、总蛋白、碱性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶活性;于给药前、给药1、2、4、6周时酶标法测定血清肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-2水平;以给药2周、6周兔血清对正常兔骨髓基质细胞进行干预培养,MTT法检测细胞增殖情况、给药2周兔血清对正常兔骨髓基质细胞进行干预培养,锚定蛋白V-PI染色结合流式细胞仪法测定细胞凋亡.结果 (1)2周时内毒素激素组血清胆固醇、三酰甘油、总蛋白明显高于其他各组;内毒素激素组碱性磷酸酶在5、12周时明显低于对照组;(2)2周时内毒素激素组血清白细胞介素-2及肿瘤坏死因子-α明显高于其他各组;(3)内毒素激素组与高剂量激素组2周血清培养的细胞增殖明显低于其他各组,凋亡明显高于其他各组.结论 (1)内毒素引起炎症反应,在糖皮质激素的参与下,引发脂代谢与骨代谢紊乱,与骨坏死、骨质疏松的发生、发展密切相关;(2)激素冲击早期,血清对自体成骨潜能细胞产生促凋亡作用,影响正常骨代谢过程是骨坏死、骨质疏松发生的重要原因.     

输血相关的免疫调节改变及其预防

输血是治疗某些疾病挽救生命的重要手段.随着输血作用在临床实践中不断被认识,同种异基因的血液输注导致受血者免疫状态发生改变这一现象引起了临床医生和输血工作者的关注.本文就输血相关的免疫调节(Transuion-as sociated immunomodulation)机制及临床有关问题做一综述.     

促红细胞生成素多克隆抗体及酶标抗体的制备及纯化研究

目的以免疫亲和层析方法纯化重组人促红细胞生成素（rhEPO）并免疫新西兰家兔制备多克隆抗体,用辣根过氧化物酶标记抗体,为进一步建立ELISA检测体系做准备。方法购买rhEPO,用淋巴结内注射法制备多克隆抗体,EPO抗体与葡聚糖凝胶偶联,制成抗体亲和层析柱,以rhEPO作为抗原上样纯化。抗体先盐析粗提纯再过SPA亲和层析柱纯化。用高碘酸钠法制备酶标抗体。结果亲和层析纯化的抗原、抗体纯度较高,蛋白质含量测定分别为0.560、.41 mg/ml;酶结合率为0.578。结论免疫亲和层析法纯化rhEPO,制备的多克隆抗体及酶标记抗体的纯度好,可以满足下一步组建试剂盒的需求。     

CA125的生物素-亲和素酶联免疫检测方法的建立

目的:建立CA125的生物素-亲和素酶联免疫检测(BA-ELISA)方法,进行方法学评价.方法:纯化卵巢癌患者腹水得到CA125抗原,制备生物素化CA125抗体,酶标板包被生物素化BSA,建立BA-ELISA反应系统.观察本方法的灵敏度、回收率、特异度、稳定性等指标.测定卵巢癌患者以及卵巢良性肿瘤患者血清CA125水平,与化学发光免疫检测结果对比.结果:BA-ELISA方法灵敏度为3.18 U/L,与CEA、PSA等交叉反应率低;高低浓度样品平均回收率分别为107.11%、99.96%,批内和批间变异分别为7.97%、8.04%,稳定性好.本研究与化学发光免疫检测检出结果差异无统计学意义,检测卵巢癌患者血清CA125水平,回归方程为y＝-6.830 + 1.014x,r＝0.993.检测卵巢良性肿瘤患者血清CA125水平,回归方程为y＝1.936 + 0.937x,r＝0.986.结论:BA-ELISA检测方法的建立在诊断卵巢癌等方面灵敏度高、特异性强,操作简便,无需昂贵仪器,适合广泛应用.     

中药影响中性粒细胞活化作用的研究进展

中性粒细胞(PMN)活化后,通过“呼吸爆发”和脱颗粒作用产生大量炎性介质,为造成组织损伤和多器官功能障碍等危重病的首要原因之一。部分中药可有效抑制PMN活化和炎性介质的释放,并通过影响其与血管内皮细胞的黏附而发挥作用。     

脂质体包裹人血红蛋白微囊的制备及其对大鼠血液的影响

目的 :探讨用人血红细胞经低渗破膜释放出血红蛋白 (Hb) ,将Hb经过离心、超滤并制成血液代用品的新途径。方法 :采用脂质体包裹Hb的方法 ,并将制备脂质体包裹血红蛋白 (LEH)通过大鼠股静脉换血试验输入体内 ,异侧股动脉放等体积血 ,检测受试大鼠血液中的血红蛋白、红细胞、白细胞及血小板。结果 :制得Hb平均浓度为141g/L(5批 )、纯度为97.7 %稳定的LEH ,LEH包裹率为27.7% ,冰冻保存泄漏率<10 % ,LEH的直径为(237.5±37.3)nm。结论 :LEH是具有生物学活性的新型载氧制剂。     

BMP-2和地塞米松对成人成骨细胞增殖和分化的影响

目的 观察不同浓度骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)和地塞米松(dexamathasone,DEX)对体外培养的人成骨细胞增殖、分化的影响。方法成人髂骨松质骨胰蛋白酶消化后获得成骨细胞进行培养,用倒置显微镜进行活体观察并做碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(OCN)、Ⅰ型及Ⅲ型胶原染色观察成骨细胞生物学特征。培养的细胞加入不同浓度BMP-2(1、10、100、1000ng／m1)和DEX(10^-8、10^-7、10^-6mol／L)作用48h后,用MTT法检测细胞增殖,同时测定细胞裂解液中ALP活性和OCN含量。结果 体外培养的成人成骨细胞可合成碱性磷酸酶、骨钙素、Ⅰ型胶原,并形成钙化结节、3个浓度的DEX在48h后均能刺激成骨细胞的增殖,增加成骨细胞ALP活性和OCN含量,4个浓度BMP-2在48h后对成骨细胞无增殖作用,但都能增加ALP活性和OCN含量。结论 地塞米松促进体外培养的成人成骨细胞增殖和分化;短期作用下,BMP-2对成骨细胞的增殖无明显作用,但可促进成骨细胞的分化。