结直肠癌辨治体会浅述

结直肠癌(CRC)是常见的恶性肿瘤,是继肺癌和乳腺癌之后我国第三大常见恶性肿瘤。近年来,我国结直肠癌发病率和死亡率逐年增高,分别居于恶性肿瘤发病率及死亡率的第4位和第5位[1]。目前,早期CRC可通过手术治愈,术后总的5年生存率在50%左右[2]。但大部分结直肠癌患者就诊时已处于晚期,丧失手术机会,只能接受姑息治疗,以致其5年生存率明显下降。     

不同层析介质纯化H5N1型流感病毒的研究

目的分别用新型复合层析介质Capto Core700和传统分子筛介质Sepharose 4FF纯化MDCK细胞制备的H5N1型流感病毒浓缩液, 并比较分离纯化效果。方法用Capto Core700与Sepharose 4FF纯化灭活H5N1型流感病毒浓缩液, 透射电镜分析不同样品中病毒颗粒的形态;分别用单向免疫扩散法(single radial immunodiffusion, SRID)、福林酚法(Lowry法)、双抗体夹心ELISA、qPCR检测不同层析介质纯化前后病毒血凝素含量、总蛋白质含量、宿主细胞蛋白质(host cell protein, HCP)含量和宿主细胞DNA(host cell DNA, HCD)含量, 计算病毒抗原回收率和杂质去除率;用动物实验检测不同纯化病毒的免疫原性, 并用t检验分析两种层析介质纯化效果差异。结果 Capto Core700与Sepharose 4FF纯化的H5N1型流感病毒在透射电镜下均呈典型的流感病毒形态;两种层析介质纯化后病毒血凝素回收率差异无统计学意义(P>0.05), 但前者的杂质(总蛋白质、HCP、HCD)去除率均高于后者,...     

脂肪酸结合蛋白4在Hcy致泡沫细胞胆固醇聚积中的作用

目的探讨脂肪酸结合蛋白4(FABP4)在同型半胱氨酸(Hcy)致泡沫细胞胆固醇聚积中的作用和意义。方法体外复制THP-1单核细胞/泡沫细胞模型,油红O染色验证模型复制是否成功,给予100μmol/L Hcy处理细胞24 h后,实时定量PCR和Western blot检测泡沫细胞中FABP4 mRNA和蛋白的表达;体外构建FABP4过表达载体,双酶切法鉴定;转染FABP4至泡沫细胞,荧光倒置显微镜观察转染效率;胆固醇检测试剂盒检测细胞内胆固醇聚积情况。结果油红O染色显示泡沫细胞质内充满了大量红染脂质颗粒,胞核呈蓝色,且100μmol/L Hcy处理后细胞内胆固醇含量升高了2.4倍(P0.01);实时定量PCR结果显示100μmol/L Hcy处理后泡沫细胞中FABP4 mRNA表达上调(P0.01);Western blot检测结果显示FABP4的蛋白表达与其mRNA表达变化一致(P0.01)。FABP4过表达载体转染细胞后,可见大量绿色荧光蛋白表达;重组质粒组泡沫细胞中FABP4的表达水平明显升高(P0.01),细胞内胆固醇含量升高1.9倍,差异具有显著性(P0.01)。结论 FABP4表达上调可能是Hcy致泡沫细胞胆固醇聚积的重要机制之一。     

转录因子EB在衰老心肌细胞自噬中的作用机制研究

目的 探讨转录因子EB(TFEB)在衰老心肌细胞自噬中的作用机制。方法 动物实验：将20只老年Wistar大鼠采取随机数字表法分为假手术组（Sham组）和缺血再灌注组（I/R组）。细胞实验：（1）体外培养大鼠心肌细胞，采用8 g/L D-半乳糖孵育8 d后分为常氧（Normoxia）组和缺氧/复氧（H/R）组。（2）在衰老心肌细胞中分别转染过表达和干扰TFEB腺病毒分为过表达对照（Ad-GFP）组、过表达对照+缺氧/复氧（Ad-GFP+H/R）组、过表达TFEB(AdTFEB)组、过表达TFEB+缺氧/复氧（Ad-TFEB+H/R）组、干扰对照（sh-NC）组、干扰对照+缺氧/复氧（sh-NC+H/R）组、干扰TFEB(sh-TFEB)组、干扰TFEB+缺氧/复氧（sh-TFEB+H/R）组。（3）分别用DNMT1、DNMT3a、DNMT3b的特异性抑制剂DC-05、TFD、NA处理缺氧/复氧后的衰老心肌细胞分为H/R组、DC-05组、TFD组、NA组。（4）在衰老心肌细胞中转染干扰DNMT3b腺病毒分为干扰对照（sh-NC）组、干扰对照缺氧/复氧（sh-NC+H/R）组、干扰DNMT...     

持续硬膜外泵入吗啡、丁哌卡因、氟哌利多用于术后镇痛的临床研究

目的：探讨持续硬膜外泵入吗啡、丁哌卡因、氟哌利多混合液用于上腹部肿瘤切除术后镇痛的效果及副作用，并与单次注入吗啡进行临床比较。方法：８０例病人分为两组：持续组，关腹时经硬膜外导管注入负荷剂量０．１２５％丁哌卡因１０ｍｌ＋吗啡１ｍｇ＋氟哌利多１ｍｇ，术后连接Ｂａｘｔｅｒ泵（用药配方：０．１２５％丁哌卡因６０ｍｌ＋吗啡２ｍｇ＋氟哌利多２ｍｇ），以２ｍｌ／ｈ恒速持续泵入４８～６０小时；单次组，关腹时硬膜外一次性注入生理盐水１０ｍｌ＋吗啡２～３ｍｇ。术后对两组进行随访并记录疼痛评分（ＶＡＳ）、镇静评分、血压、呼吸频率、心率、血氧饱和度及副作用的发生情况。结果：两组ＶＡＳ评分：术后２、４、８时间段相似（Ｐ＞０．０５），１２、２４、４８时间段，单次组显著高于持续组（Ｐ＜０．０１），有统计学意义。副作用发生率：单次组恶心呕吐２０％，皮肤瘙痒５％，持续组均无一例发生。两组镇静评分、ＢＰ、ＲＲ、ＨＲ、ＳＰＯ２的比较无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论：持续硬膜外泵入小剂量吗啡、氟哌利多及低浓度丁哌卡因混合液，用药量少，镇痛效果完善，各种副作用发生不明显，临床上取得了满意的结果。     

重组流感血凝素三聚体蛋白疫苗的制备及免疫原性评价

目的制备重组流感病毒血凝素(hemagglutinin, HA)三聚体蛋白疫苗并进行相关表征分析, 研究重组HA三聚体在小鼠模型中的免疫原性。方法构建稳定表达HA三聚体蛋白的CHO细胞株, 通过Western blot、单向免疫扩散试验、蛋白质粒径检测和N-糖基化位点分析对重组蛋白进行定性及定量分析。根据剂量、佐剂等处理条件的不同将BALB/c小鼠分为11个组, 并进行一致的免疫程序。初次免疫后56 d检测血清中和抗体效价, 以评价免疫原性。结果构建的CHO细胞株能够分泌表达HA三聚体。HA三聚体具备生物学活性能够在单向琼脂免疫扩散试验中形成沉淀环, 蛋白质粒径大小约为18.79 nm, 具有10个N-糖基化位点, 包括高甘露糖型、复合糖型和杂合糖型;HA三聚体重组蛋白疫苗在2次免疫小鼠后, 3.75 μg剂量配伍RFH01佐剂与对照组单价疫苗原液15 μg引起的中和抗体效价差异无统计学意义(P=0.431 2, U=36), 配伍佐剂组免疫后血清抗体效价均高于未加佐剂组, 其中15 μg HA三聚体+RFH01组效价最高, 为1 280。结论成功制备了流感病毒重组HA三聚体蛋白, 其...     

基于结构的流感疫苗设计进展

流感病毒在人类中的传播已有百余年的历史, 然而由于其高度可变的抗原结构, 常规疫苗难以构建持久的保护作用, 开发具备跨亚型保护能力的疫苗成为研究人员面临的挑战。而近十余年发展形成的基于结构的疫苗设计策略有着不同的设计思路, 它注重抗原表位的作用, 将蛋白质结构信息用于抗原设计, 以得到稳定、高效且具有跨亚型保护作用的重组抗原, 为流感疫苗的开发提供了新的突破口。本综述汇总现阶段流感病毒中常见抗原的结构特点与表位特征, 主要针对流感病毒的3种表面蛋白血凝素(HA)、神经氨酸酶(NA)和基质蛋白2(M2), 分别讨论结构疫苗学在这些抗原设计中的应用与进展。     

EC-SOD在同型半胱氨酸致单核细胞源性巨噬细胞氧化应激中的作用研究

目的探讨细胞外超氧化物岐化酶(EC-SOD)在同型半胱氨酸(Hcy)致巨噬细胞氧化应激中的作用及机制。方法将THP-1单核细胞用佛波酯刺激48 h后演变成巨噬细胞,用0、50、100、200、500μmol/L Hcy作用细胞72 h,并加设叶酸+维生素B12(Vit B12)干预组(100μmol/L Hcy+30μmol/L叶酸+30μmol/L Vit B12)。微板法检测氧化应激指标(H_2O_2、O_2~-、OH-)的变化;实时荧光定量PCR检测巨噬细胞中EC-SOD的mRNA表达水平;Western blot检测巨噬细胞中EC-SOD的蛋白表达水平;EC-SOD测定试剂盒检测EC-SOD活性。分别构建EC-SOD重组质粒和干扰质粒转染细胞,检测EC-SOD的mRNA及蛋白的表达水平以及超氧阴离子的表达。结果与对照组相比,100、200、500μmol/L Hcy组H_2O_2、OH-活性显著增高(P0.01),EC-SOD mRNA和蛋白表达明显降低(P0.01)。与对照组相比,100、200、500μmol/L Hcy组EC-SOD活性分别下降了13.92%、8.62%、10.32%(P0.05,P0.01)。与100μmol/L Hcy组相比,叶酸+Vit B12干预组EC-SOD mRNA的表达升高了47%。分别转染EC-SOD重组质粒和干扰质粒后,与100μmol/L Hcy组相比,EC-SOD重组组O_2~-含量降低了63.89%,干扰片段-596组O_2~-含量则增加了33.59%(P0.05,P0.01)。结论 EC-SOD参与了Hcy导致的单核细胞源性巨噬细胞的氧化应激。在抑制Hcy诱导动脉粥样硬化的过程中,EC-SOD可能发挥着重要的作用。     

强化剂量瑞舒伐他汀与阿托伐他汀辅助治疗急性心肌梗死效果比较

目的 观察强化剂量瑞舒伐他汀与阿托伐他汀辅助治疗对急性心肌梗死(AMI)患者肝肾功能和血清炎症水平的影响。方法 选取2020年7月至2022年2月在该院住院治疗的AMI患者114例，随机分为观察组与对照组各57例。两组患者入院接受阿司匹林和替格瑞洛药物负荷后，规律口服阿司匹林(100 mg/次，1次/d)和替格瑞洛(90 mg/次，2次/d)。所有患者行经皮冠状动脉介入治疗后接受卧床、吸氧、控制血压、β受体阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂等常规治疗。在此基础上，对照组口服强化剂量阿托伐他汀40 mg，观察组口服强化剂量瑞舒伐他汀20 mg，均每日1次。比较两组治疗前、治疗3个月后肝肾功能和血清炎症因子水平等差异。结果 治疗后观察组GPT、GOT、CRP、白细胞介素-1β、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子-α水平优于对照组，差异均有统计学意义(t=2.81、7.00、6.37、7.23、7.90、5.22,P <0.01)。观察组药物不良反应发生率(3.5%,2/57)低于对照组(10.5%,6/57)，但差异无统计学意义(χ²=1.21,P> 0.05)。结...     

四价流感病毒亚单位疫苗配伍RFH01佐剂在小鼠体内的免疫原性研究

目的评价四价流感病毒亚单位疫苗配伍RFH01佐剂在小鼠模型中的免疫原性。方法按照《中国药典》2020年版(三部)的方法对4种单价流感病毒亚单位疫苗原液进行鉴别试验。在研究配伍RFH01佐剂的四价流感病毒亚单位疫苗小鼠模型中, 采用随机分组法将460只雌性6～8周龄BALB/c小鼠分为实验组、疫苗对照组、阴性对照组和空白组, 共46组, 每组10只。在研究四价流感病毒亚单位疫苗在老年和青年小鼠模型中, 采用随机分组将80只雌性10月龄和80只雌性10周龄BALB/c小鼠同时分为单价流感病毒疫苗、四价流感病毒亚单位疫苗、四价流感病毒亚单位疫苗+RFH01佐剂组、鸡胚四价流感病毒裂解疫苗对照组和PBS组, 共16组, 每组10只。均采用肌内注射免疫, 初次免疫21 d后, 采血分离血清, 并用相同程序和剂量进行加强免疫, 第42天采血分离血清。血凝抑制试验检测小鼠血清抗体水平。结果两次免疫后, 所有配伍RFH01的疫苗组阳转率均达到100%, 且血清抗体效价几何平均滴度(geometric mean titer, GMT)显著高于不含佐剂的疫苗组。配伍RFH01佐剂的单价流感病毒疫苗和四价流...