海南狗牙花的生物碱化学成分研究

目的对海南狗牙花Ervatamia hainanensis的生物碱化学成分进行研究。方法采用硅胶、Sephadex LH-20、MCI以及半制备HPLC等色谱方法进行分离纯化,根据理化性质和现代波谱学技术鉴定化合物的结构。结果从海南狗牙花甲醇提取物中分离得到12个生物碱,分别鉴定为冠狗牙花碱(1)、19-表海尼山辣椒碱(2)、9,10-二甲氧基冠狗牙花碱(3)、老刺木碱(4)、老刺木碱-4-氮氧化物(5)、3-oxo-19-epi-heyneanine(6)、劲直胺(7)、deacetylakuammiline(8)、pandine(9)、rhazicine(10)、rhazicine N(4)-oxide(11)、rhazimine(12)。结论化合物8、10~12为首次从该属植物中分离得到,化合物3、5~7为首次从该植物中分离得到。     

秦七风湿方HPLC指纹图谱研究

目的建立秦七风湿方的HPLC指纹图谱,为其质量评价及药效物质基础研究提供依据。方法采用Inert Sustain C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm);以0.1%磷酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱;检测波长为203 nm;柱温为30℃;体积流量为1 m L/min;测定10批秦七风湿方样品,利用中药色谱相似度评价系统(2004A版)建立秦七风湿方HPLC指纹图谱,并通过对照品对共有峰进行指认。结果建立了秦七风湿方HPLC指纹图谱,10批样品的相似度均在0.99以上,共标定19个共有峰,8个峰来源于珠子参,8个峰来源于秦艽,5个峰来源于山茱萸(其中1号峰为珠子参、秦艽和山茱萸共有),并通过与对照品比较指认了其中8个色谱峰,分别为马钱苷酸(2号峰)、莫诺苷(3号峰)、龙胆苦苷(5号峰)、马钱苷(6号峰)、人参皂苷Ro(12号峰)、人参皂苷F1(13号峰)、竹节参皂苷IVa(14号峰)、人参皂苷F2(17号峰)。结论所建立的方法稳定、准确、重复性好,可为秦七风湿方的质量控制及药效物质基础研究提供依据。     

HPLC-ESI-MS/MS法同时测定珠子参中15种皂苷类化合物

目的建立了高效液相色谱-电喷雾三重四极杆质谱法(HPLC-ESI-MS/MS)同时测定珠子参中15种皂苷类化合物(人参皂苷Rb2、人参皂苷Re、人参皂苷Ro、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rh2、人参皂苷F2、人参皂苷Rg3、人参皂苷Rf、三七皂苷R1、姜状三七皂苷R1、竹节参皂苷IVa)的检测方法。方法采用Waters Sunfire TMC18色谱柱(150 mm×1.5 mm,5μm),以含0.05%甲酸的乙腈-水(10∶90)为流动相,梯度洗脱分离,HPLC-ESI-MS/MS多反应监测模式(MRM)检测,外标法定量。优化了色谱分离条件、质谱去簇电压(DP)、碰撞能量(CE)和碰撞池出口电压(CXP)等参数,并考察了浓缩温度、提取时间等对提取率的影响。结果 15种皂苷类化合物在0.000 9~2 952.592 3μg/m L线性关系良好,r=0.999 6,检出限范围为0.003~626.554 ng/m L,定量限为0.075~1 762.150 ng/m L,平均加样回收率在98.15%~101.12%,RSD为0.82%~2.15%。结论该方法操作简便、快速、准确、灵敏度高,可以对珠子参中多种皂苷类化合物进行分析鉴定。     

基于生物活性导向分离及灰色关联度分析的山楂核干馏液抗炎和抗菌作用物质基础研究

目的 研究山楂核干馏液抗炎和抗菌的主要物质基础。方法 使用干馏釜制备山楂核干馏液;通过大孔吸附树脂柱色谱对干馏液进行分离;基于气相色谱-质谱法对山楂核干馏液进行分析;以脂多糖诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7生成一氧化氮模型评价山楂核干馏液的抗炎作用,采用微稀释法评估其体外抑制白色念珠菌生长活性,采用灰色关联度分析法建立其谱效关系,以评估其抗炎和抗菌活性,并筛选主要活性化合物。结果 山楂核干馏液及其4个亚流分具有明显的抗炎作用和抑制白色念珠菌生长作用,其中Fr.B的抗炎和抗菌作用均较强。从山楂核干馏液4个流分的色谱图中确定12个共有峰,其中发挥主要抗炎作用的成分为4、6、2、9号峰,质谱分析鉴定4个峰分别对应2,6-二甲氧基-4-甲基苯酚、1,2,5-三甲氧基-3-甲基苯、2,6-二甲氧基苯酚和乙酰丁香酮;发挥主要抗菌作用的成分为4、2、9、11号峰,质谱分析鉴定这4个峰分别对应2,6-二甲氧基-4-甲基苯酚、2,6-二甲氧基苯酚、乙酰丁香酮和二氢芥子醇。结论 山楂核干馏液具有较好的抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞生成一氧化氮的作用,同时对白色念珠菌的生长具有显著的抑制作用,明确了山楂核干馏液中2,6-二甲氧基-4-甲基苯酚、1,2,5-三甲氧基-3-甲基苯、2,6-二甲氧基苯酚和乙酰丁香酮4个成分对其抗炎作用贡献最大,2,6-二甲氧基-4-甲基苯酚、2,6-二甲氧基苯酚、乙酰丁香酮和二氢芥子醇对其抗菌作用贡献最大。研究结果为山楂核资源的开发利用及相关产品质量标准的制定提供参考。     

林下种植重楼和珠子参根际土壤与原生林地土壤特征差异

目的 比较林下种植重楼和珠子参根际土壤与原生林地土壤特征差异,了解植被变化对土壤特征的影响。方法 以林下移栽种植重楼和珠子参为对象,测定根际土壤特征并与相对应的原生林地土壤数据进行比较。结果 珠子参根际土壤有机碳（46.14 g·kg^–1）、有机质（79.55 g·kg^–1）、全钾（9.65 g·kg^–1）和硝态氮（0.006 g·kg^–1）质量分数较高,而全磷（0.49 g·kg^–1）、速效磷（0.03 g·kg^–1）和铵态氮（0.01 g·kg^–1）质量分数的最高值出现在重楼根际土壤中。原生林地土壤中蔗糖酶（51.66 mg·g^–1·d^–1）、脲酶（372.6 μg·g^–1·d^–1）、过氧化氢酶（9.65 μmol·g^–1·d^–1）和亚硝酸还原酶（932.04 μmol·g^–1·d^–1）活性最高。重楼根际土壤脲酶活性高于珠子参根际土壤,亚硝酸还原酶活性则与之相反,其他几种酶的活性在2种药用植物根际土壤间差异无统计学意义。主成分分析和冗余分析发现,3种土壤在养分构成、理化性质和酶活性方面的变化趋势不同。结论 土壤特征之间差异表明,植被类型养分需求和获取策略有所不同,酶活性及其与土壤理化性质的相关性受到植株自身生理状态和环境条件的双重影响,且往往出现复杂的网状联系。探明药用植物适宜的土壤类型差异能为引种栽培区域划分提供参考。     

基于网络药理和分子对接技术预测热炎宁合剂抗COVID-19作用

目的:探讨热炎宁合剂干预新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的可行性,并对其中具有抗新型冠状病毒(2019-nCoV或SARS-CoV-2)作用的活性成分进行虚拟筛选。方法:首先采用网络药理学方法,根据口服生物利用度(OB)、类药性原则(DL),对热炎宁合剂成分进行初步筛选,构建"中药-成分-靶点-通路"网络,通过靶点的相互作用、生物信息学注释对热炎宁合剂参与的代谢通路进行分析,预测其干预COVID-19的可能性。然后通过分子对接技术,筛选对2019-nCoV 3CL水解酶有抑制作用的活性成分。结果:基于成分筛选原则和方法,热炎宁合剂中有29个成分与35个冠状病毒肺炎及急性呼吸症状的靶点互作。关联网络分析结果显示,热炎宁合剂中的活性成分可通过作用于CD40配体(CD40LG)、C-X-C-趋化因子配体10(CXCL10)、C-X-C-趋化因子配体8(CXCL8)、干扰素γ(IFNG)、白细胞介素10(IL10)、白细胞介素2(IL2)和白细胞介素6(IL6)等15个重要靶点,参与调控细胞因子受体相互作用通路和白细胞介素17(IL17)信号通路,半枝莲和虎杖是作用的主要中药。分子对接结果将芹菜素、白杨素甲醚和儿茶素等7个化合物作为潜在的抗2019-nCoV成分。结论:热炎宁合剂可能通过抗炎、抗病毒复制等过程发挥多成分、多靶点、多途径的干预作用。     

正源方抗肝纤维化的网络药理学预测分析及实验验证

目的:基于网络药理学、分子对接技术预测正源方抗肝纤维化的作用机制,并进行细胞水平实验验证。方法:使用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)及文献检索获得正源方活性成分,通过PubChem、SwissTargetPrediction、Similarity Ensemble Approach数据库筛选活性成分潜在靶点,通过OMIM、GeneCards疾病数据库收集肝纤维化的相关靶点,运用Venny平台获得正源方与肝纤维化交集靶点,利用String数据库建立蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络,并通过Cytoscape-CytoNCA拓扑分析筛选核心靶点,利用String数据库进行基因本体功能注释(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,利用Cytoscape软件构建药物-成分-靶点-通路网络,使用AutoDock Vina软件模拟关键候选活性成分与核心基因的结合活性。建立人转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肝星状细胞LX2活化模型,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,蛋白免疫印迹法(WB)检测磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B(PI3K-Akt)信号通路相关蛋白表达。结果:网络药理学筛选得到正源方活性成分145个及相关靶点1109个,肝纤维化靶点1573个,正源方抗肝纤维化潜在作用靶点415个,拓扑分析得关键靶点61个;PPI网络分析核心靶点为Akt1、血管内皮生长因子A(VEGFA)、白细胞介素-1β(IL-1β)等,GO富集分析得到1753个条目,其功能主要与细胞凋亡、细胞增殖、酶结合等有关;KEGG富集分析得到174个条目,主要涉及癌症通路、PI3K-Akt通路、细胞凋亡通路等;分子对接显示,槲皮素、木犀草素、熊果酸等与Akt1、VEGFA、Jun原癌基因(JUN)等靶点结合活性较强;细胞实验结果表明,不同剂量的正源方给药后,可以显著抑制TGF-β1诱导的LX2细胞的活化,降低磷酸化PI3K(p-PI3K)/PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)/Akt蛋白表达,且具有质量浓度依赖性。结论:正源方可能通过多靶点、多通路发挥抗肝纤维化作用,其机制可能与抑制肝星状细胞活化、调控PI3K-Akt信号通路有关。     

基于抗类风湿关节炎作用评价膜分离技术富集山茱萸抗炎组分的适用性

目的评价山茱萸水提液(CO)、0.05μm无机陶瓷膜微滤液(CO-0.05)及中空10 K纤维膜超滤液(CO-10K)对成纤维样滑膜细胞(HFLS)和佐剂性关节炎(AA)大鼠的抗炎作用,评价膜分离技术富集山茱萸抗炎组分的适用性。方法制备白细胞介素-1β(IL-1β)/肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的HFLS炎症模型,CCK-8和ELISA法分别检测CO、CO-0.05及CO-10K对HFLS活力和分泌炎症细胞因子的影响;制备AA大鼠模型,SD大鼠分为对照组、模型组、CO(120 mg/kg)组、CO-0.05(120 mg/kg)组、CO-10K(120 mg/kg)组、阳性对照白芍总苷(TGP,0.125 mg/kg)组,造模同时ig给药,共给药23 d。检测各组大鼠足趾肿胀、体质量,ELISA法测定大鼠血清中炎症因子IL-1、IL-6、前列腺素E_2(PGE_2)、TNF-α水平。结果 CO、CO-0.05及CO-10K均可以显著抑制IL-1β/TNF-α诱导的滑膜细胞分泌细胞因子(P0.05、0.01、0.001),并且能够显著缓解AA大鼠足趾肿胀(P0.05、0.01、0.001),改善大鼠体质量增长缓慢的情况(P0.05、0.01、0.001),减少AA大鼠血清中炎性细胞因子的产生(P0.001)。通过山茱萸膜微滤液和膜超滤液对炎症细胞因子产生的抑制率比较,发现膜超滤液具有更显著的抑制炎症因子产生的作用。结论 CO-0.05和CO-10K均具有显著的抗炎作用,而中空纤维膜超滤分离技术更适用于山茱萸抗炎组分的富集。     

叶面喷施水杨酸对当归幼苗生理特性和保护酶活性的影响

目的:研究叶面喷施水杨酸(SA)对当归幼苗生长和保护酶活性的影响,为当归种子种苗的生产提供科学依据。方法:采用叶面喷施的方法,设置不同处理浓度,考察水杨酸对当归幼苗生物量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响。结果:叶面喷施适宜浓度的水杨酸能促进当归幼苗的生长并提高保护酶活性。其中以0.5 mmol·L~(-1)水杨酸处理的当归幼苗株高和鲜质量为最高,分别为对照组的135.2%和224.6%,超过此浓度,植株生长受到抑制。1.0 mmol·L~(-1)水杨酸处理的当归幼苗,SOD、POD、CAT酶活性分别为对照组的149.1%(7 d)、138.2%(7 d)、194.7%(5 d)。结论:叶面喷施0.5 mmol·L~(-1)的水杨酸能够促进当归幼苗生长,较高浓度的水杨酸对提高当归幼苗SOD、POD、CAT酶活性的效果较好,但会加剧对植株生长的抑制作用。     

不同LED光质对陕产重楼生理特性和成分积累的影响

目的:探究发光二极管(LED)不同光质对陕产重楼生理特性和成分积累的影响,初步揭示陕产重楼生长和次生代谢物积累所需最佳光质配比,为合理指导重楼人工种植提供理论依据。方法:以基质栽培的陕产重楼为试验材料,分别设置红光、蓝光、红光/蓝光4∶1、红光/蓝光2∶1、白光5种光质,考察不同光质处理对重楼生物量、叶绿素含量、蛋白质含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、总多糖和总皂苷含量的影响,初步揭示陕产重楼响应不同LED光质的生理机制。结果:与白光相比,红光/蓝光2∶1(2R1B)能够显著提高重楼叶片中叶绿素a、b含量,促进叶片蛋白质积累。2R1B处理30 d,叶片SOD酶活性相比对照组降低55.40%;2R1B处理20 d的重楼根茎中总多糖含量最高,为对照组的2.165倍。蓝光处理30 d的重楼根茎中总皂苷含量最高,为对照组的1.595倍。结论:综合多项指标,红光/蓝光2∶1对陕产重楼叶片中叶绿素含量、蛋白质含量和根茎中总多糖的积累具有显著的促进作用,重楼总皂苷的积累则以蓝光处理的效果为好。实际生产中应根据获取目标成分的不同合理选择最适LED光质处理。