VEGF-C真核表达载体的构建和体外表达

目的构建血管内皮生长因子C(VEGF-C)基因的真核表达载体,检测其在真核细胞CHO中的表达.方法根据人VEGF-C cDNA的序列,设计合成一对特异性引物,用RT-PCR法克隆乳腺癌细胞MCF-7VEGF-C基因的cDNA,回收PCR产物连接于克隆载体.扩增,质粒提取,酶切鉴定并进行基因序列鉴定.酶切回收VEGF-C cDNA全长的基因片段,与真核表达载体pcDNA3.1(-)连接称重组质粒进行酶切鉴定.采用脂质体转染法将构建的pcDNA3.1(-)/VEGF-C转染至CHO细胞中,G418加压筛选培养.最后用Western-blotting法检测细胞培养上清以及裂解细胞中的VEGF-C蛋白.结果基因测序证实RT-PCR产物包含VEGF-C cDNA全长.重组pcDNA3.1(-)中含有VEGF-C cDNA全长序列,Western-blotting检测到细胞培养上清中以及细胞内有VEGF-C蛋白存在.结论成功构建了人类VEGF-C真核表达载体并检测到载体在真核细胞中的表达.     

血管内皮生长因子C诱导骨髓间充质干细胞分化为淋巴管内皮细胞的研究

目的 研究骨髓间充质干细胞向淋巴管内皮细胞分化的潜能及条件,为淋巴管再生和重建提供理想的细胞来源。方法 分离SD大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞表面抗原CD31、CD14、CD29和CD90。将纯化的骨髓间充质干细胞加血管内皮生长因子C(VEGF-C)50ng/mL诱导培养10d,Western-blot法与免疫荧光染色法检测细胞中淋巴管内皮细胞标记物Prox-1和LYVE-1的表达。结果 骨髓间充质干细胞呈现典型的梭形和旋涡状排列;经VEGF-C诱导后,细胞变短、呈多边形。流式细胞学显示,分离培养的骨髓间充质干细胞表面抗原CD29、CD90呈阳性表达,CD31、CD14呈阴性表达;Western-blot检测显示,经VEGF-C培养诱导后,细胞明显表达淋巴管内皮特异性标记物Prox-1和LYVE-1;免疫荧光染色显示,诱导后细胞均明显表达Prox-1和LYVE-1,而未分化的骨髓间充质干细胞Prox-1和LYVE-1均不表达。结论 VEGF-C可以诱导骨髓间充质干细胞表达淋巴内皮细胞特异性标记物,促进其向淋巴管内皮转化。     

数字解剖融合慕课的线上线下混合式教学在系统解剖学教学的实践

系统解剖学是医学的基础课程,由于术语繁多,结构复杂抽象,教学学时又不断压缩,所以成了学生心目中具有挑战性的学科.随着信息化时代的到来,学生的学习习惯和获取知识的方式发生很大改变,因此需要探索新的教学模式来适应这种变化.混合式教学是把传统的面对面课堂教学的优势和e-learning(即网络化或者数字化教学)的优势结合起来,通过多元化教学方式的融合,实现优势互补[1].近年来,许多高校在解剖学教学中探索了混合式教学模式,融合的方式多采用线上慕课与线下课堂的融合[2,3],但对数字解剖的应用不足.本教学团队探索了在系统解剖学教学中应用数字解剖、慕课与课堂教学相融合的方式,将数字解剖应用于线上与线下教学,以期提高教学质量,供同行在教学改革中借鉴.