新疆维吾尔族慢性乙型肝炎病毒感染者病毒基因型及亚型分布特点

目的 了解新疆维吾尔自治区(简称新疆)维吾尔族慢性HBV感染者基因型、基因亚型分布情况及其与预后的关系.方法 采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析方法,分析109例新疆维吾尔族慢性HBV感染者感染病毒的基因型及基因亚型.多标本均数比较采用单向方差分析.结果 109例新疆维吾尔族慢性HBV感染者,其中慢性乙型肝炎88例,乙型肝炎肝硬化17例,肝癌4例.13基因型HBV感染者9例,占8.3%,C基因型感染者50例,占45.9%,C/D基因型重组体32例,占29.4%,D基因型感染者18例,占16.5%,C基因型、C/D基因型重组体为主要基因型.经过聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析及测序检测,鉴定9份B基因型HBV,均为Ba亚型.50例C基因型HBV感染者病毒基因亚型分布情况:Cl亚型27例,占54%,C2亚型23例,Cl亚型比C2亚型感染者多.在慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、肝癌患者中,HBV Ba基因亚型感染者分别为8例(9.1%)、1例(5.8%)和0例;C2基因亚型感染者分别为17例(19.3%)、8例(47.5%)和2例(50%);C/D基因型感染者分别为29例(33.0%)、2例(11.9%)和1例(25%),随着病情加重,Ba基因亚型和C/D基因型感染者所占比例呈下降趋势,C2基因亚型感染者所占比例增加.结论 新疆地区维吾尔族慢性HBV感染者以Cl基因亚型为主,新疆维吾尔族慢性HBV感染者存在C/D基因型重组体.C2基因亚型HBV感染预示病情严重,预后差.     

乙肝病毒基因型及病毒变异对慢性肝病进展的影响

目的进一步研究HBV基因型及病毒变异与慢性肝病进展的关系。方法用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）以及部分PCR产物测序的方法对401例慢性HBV感染者，包括112例HCC患者（HCC组）。129例无症状携带者（ASC组），70例肝硬化患者（LC组）和90例慢性肝炎患者（CH组）进行HBV基因分型以及BCP和PC变异检测。结果401例慢性HBV感染者中181例发生B基因型感染，220例发生C型感染。HCC组中C型分布高于其他3个疾病组；C基因型感染者BCP变异多于B基因型；B基因型感染者PC变异多于C基因型：同时BCP变异发生率随着病程进展而递增：在ASC组、CH组、LC组和HCC组里的BCP变异阳性率分别为22．4％、35．0％、50．0％、74．1％。C1与C2亚型相比，C1有较高BCP变异阳性率，而C2有较高PC变异发生率。结论BCP变异与肝病进程存在依从关系，因此BCP变异的检测对慢性HBV感染的疾病进展和临床结局的评估有重要意义。     

肺炎衣原体荧光PCR检测方法的建立和应用

目的采用Taqman探针技术,组建肺炎支原体荧光PCR基因检测方法。方法对GenBank登录的肺炎衣原体的基因序列进行生物信息学分析,针对保守区域设计引物和探针,组建实时荧光PCR检测方法。对来自本院的560份临床咽拭子样本和肺泡冲洗液样本进行检测。采用流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病毒进行特异性评价。结果本实时荧光PCR方法对甲型流感病毒(甲型、乙型)、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、呼吸道腺病毒无特异性反应。本院的临床样本检出26份,其中咽拭子9份,肺泡冲洗液17份。结论肺炎支原体荧光PCR检测方法可用于肺炎衣原体感染的辅助诊断。     

幽门螺杆菌NCTC11639基因hpaA的克隆表达及鉴定

目的获取幽门螺杆菌（Hp）hpaA基因的序列。预测其编码蛋白hpaA作为候选疫苗的可行性。在大肠杆菌表达系统中表达hpaA。方法提取Hp标准株NCTC11639的基因组DNA。使用PCR扩增hpaA基因。克隆入pGEM—T载体中测序。并进行同源性分析。将hpaA克隆入表达载体pGEX-4T-1中，诱导表达。SDS-PAGE电泳鉴定。结果同源性分析表明hpaA具有很高的保守性，成功构建出可以高效、分泌型表达hpaA的原核表达系统。结论hpaA具有高保守性，在Hp各菌株中普遍存在，是有良好应用前景的Hp候选疫苗。     

咽拭子和痰标本中SARS冠状病毒核酸检测

目的 建立SARS冠状病毒的RT—PCR核酸检测方法。方法 合成针对SARS冠状病毒特异性引物，从SARS病人及疑似病人标本中提取RNA，经反转录和巢氏PCR扩增出相应大小的DNA片段。对这些片段克隆后进行DNA序列分析，并将序列与SARS冠状病毒和其它已知冠状病毒进行同源性分析。结果 从SARS病人痰、咽拭子或血液标本中得到多例RT—PCR阳性片段，其中8个片段经克隆和DNA序列分析证实为SARS冠状病毒序列(同源性100％)，而所有参照标本RT—PCR均为阴性。结论 该方法可用于SARS冠状病毒的RT—PCR核酸检测。     

食道鳞状上皮细胞癌转移体外细胞模型的建立

目的建立一个适宜的食道鳞状上皮细胞癌（ESCC）体外转移研究模型。方法将ESCC细胞系HK2置于未处理细胞培养皿中培养、传代,筛选出具有非锚定依赖生长能力的细胞株。以体外侵袭实验。软琼脂克隆形成实验比较、验证筛选细胞系与母代细胞的侵袭能力和非锚定依赖生长能力。利用比较蛋白质学的方法分析筛选细胞与母代细胞间的蛋白表达图谱差异。结果成功筛选出具有较高转移能力并可传代培养的HK2-AD细胞株。HK2和HK2-AD细胞侵袭至小室膜反侧的细胞数分别为（16．7±2．5）和（28．7±7．4）,软琼脂集落生成实验表明,HK2和HK2-AD细胞形成的集落数分别为（16．8±3．2）和（25±5．1）,差异均有统计学意义（P〈0．05）。HK2-AD细胞中一些与细胞运动、细胞无氧代谢及抑制凋亡相关的蛋白质分子表达明显上调。结论利用肿瘤细胞的非锚定依赖生长特性建立了一个高转移能力、呈三维生长的HK2-AD细胞株,为ESCC肿瘤转移机制研究和药物筛选提供了一个有价值且易于操作的食道癌转移体外细胞模型。     

稽留流产绒毛组织人细小病毒B19、巨细胞病毒及弓形体感染的研究

为研究小病毒Ｂ１９、巨细胞病毒、弓形体与稽留流产的关系,应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）检测稽留流产１０３例及人工流产５３例的绒毛组织中３种病原体ＤＮＡ。结果发现流产组细小病毒、巨细胞病毒、弓形体感染率分别为１７．４７％、２５．２４％、２９．１３％,明显高于对照组,流产组两种及两种以上的病原体感染者２０例,而对照组无多种病原体感染者。由此证明导致稽留流产可以一种病原体感染引起,也可能是多种病原体感染     

慢性肾衰患者并发结核病的诊断结核菌DNA-PCR与抗PPD-IgG的比较

慢性肾衰患者的结核病发生率高，肺外结核多见，缺乏特异的临床表现，故诊断较为困难。本研究检测了１１例慢性肾衰并发结核患者的血中结核菌ＤＮＡ－ＰＣＲ和血清抗ＰＰＤ～ＩｇＧ（ＥＬＩＳＡ），并检测了其中５例患者的渗出液（肺、腹水）及排泄物（尿，痰），结果表明，在血中，抗ＰＰＤ－ＩｇＧ的阳性率明显高于结核菌ＤＮＡ－ＰＣＲ，在渗出液或排泄物中，二者的阳性率大致相同．提示在尿毒症患者这一特定的人群中，血清或渗出液（排泄物）中抗ＰＰＤ－ＩｇＧ的检测对诊断结核有重要意义。     

腰神经根封闭配合手法治疗腰椎间盘突出症54例

笔者用腰椎旁神根封闭加手法治疗54例临床症状典型、体征明显、CT检查确诊的腰椎间盘突出症患者，取得较为满意的结果，现总结如下。