干扰素市场风云录——2002年第一季度广州市27家医院干扰素临床使用分析

干扰素是病毒性肝病以及肿瘤的主要治疗药物,是人体细胞或动物细胞在病毒或干扰素诱导剂作用下产生的具有抗病毒和抗肿瘤作用的低分子量蛋白质,能干扰病毒代谢从而抑制其繁殖,具有抑制细胞分裂和调节免疫系统反应的作用。 在本期肝病专题中,干扰素是许多专家的关注所在,它在肝药学术中有着不可替代的地位,而它在肝药市场中是否也是举足轻重?在众多的干扰素生产商中,谁又能叱吒风云?先请看广州市27家医院2002年第一季度干扰素临床使用分析:     

感冒灵分散片的研制

目的 筛选感冒灵分散片的处方。方法 考察微晶纤维素(MCC)、聚乙二醉(PEG4600)、气相微粉硅胶(Aerosil200)、交联PVP(CPVP)等辅料对中药提取物包衣颗粒压制成的感冒灵分散片质量的影响。结果 处方Ⅲ制备的感冒灵分散片符合英国药典中分散片的标准。结论 处方Ⅲ适合生产感冒灵分散片。     

脂质体介导10-23脱氧核酶对人血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 :研究针对增殖细胞核抗原 (PCNA)基因特异性的 10 - 2 3脱氧核酶 (DNAzyme)对人血管平滑肌细胞(VSMC)PCNA的表达和细胞增殖的影响。方法 :应用脂质体转染法将不同寡聚核苷酸转入体外培养的人脐动脉VSMC。采用3 H -TdR掺入法观察空白对照组、脂质体组和等摩尔浓度 (1.0 μmol/L)的DNAzyme、反义寡核苷酸 (A SODN)、mDNAzyme在干预 2d后VSMC的DNA合成速率 ;免疫组化检测 1.0 μmol/L的DNAzyme和ASODN转染 2d后对PCNA表达的影响 ;四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法分析不同剂量的DNAzyme(0 .12 5、0 .2 5、0 .5、1.0、2 .0 μmol/L)转染5d后VSMC增殖活性。结果 :1.0 μmol/LDNAzyme和ASODN转染 2d后 ,VSMC的3 H -TdR掺入量均较对照组显著减低 (P <0 .0 5 ) ,DNAzyme较ASODN更显著减低 (P <0 .0 5 ) ;1.0 μmol/LDNAzyme作用 2d后细胞增殖抑制率为 6 4 .5 % ,高于ASODN组 (37.7% )、mDNAzyme组 (11.9% )和脂质体组 (3.3% )。DNAzyme和ASODN处理细胞 2d后 ,PCNA的表达水平 (平均光密度值 )分别为 0 .2 95 6± 0 .0 2 5 1和 0 .3880± 0 .0 92 5 ,明显低于空白对照组 0 .7342± 0 .2 136 (P <0 .0 1)。转染 5d后 ,DNAzyme的作用呈剂量依赖性 ,0 .12 5 μmol/LDNAzyme处理后VSMC的增殖较对照组低 (P <0 .0 5 )。     

高效hCu,Zn-SOD-PTD融合蛋白的表达及其穿膜功能的研究

目的 探讨hCu,Zn-SOD-PTD融合蛋白的表达及其穿膜功能. 方法 首先,人工设计合成蛋白转导域序列(protein transduction domain,PTD),以人胚肝组织的总RNA为模板,逆转录扩增得人铜锌超氧化物歧化酶全长cDNA序列.其次,将此序列及人工合成PTD序列定向插入pET16b载体;测序鉴定后,将构建成功的重组载体导入E coli BL21菌株,异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,经镍柱纯化,洗脱液经SDS-PAGE检测.最后,将纯化产物与食管癌细胞(EC9706)共孵育,用激光共聚焦和流式细胞仪的方法检测蛋白穿膜能力及活性. 结果 测序结果与人铜锌超氧化物歧化酶全长cDNA序列相符;SDS-PAGE结果出现18.6 kd和20 kd的目的条带;激光共聚焦和流式细胞仪的方法显示蛋白可穿膜且保持活性. 结论 本实验成功构建了PET16b/hCu,Zn-SOD-PTD原核表达质粒,可在大肠杆菌中稳定表达融合蛋白,融合蛋白具有穿膜且保持活性.     

Chk1基因在二烯丙基二硫诱导的乳腺癌细胞MCF-7凋亡中的作用

目的:探讨Chk1基因在二烯丙基二硫诱导的乳腺癌细胞MCF-7凋亡和细胞周期中的作用。方法:采用siRNA转染MCF-7细胞靶向干扰Chk1基因,采用Western blot检测Chk1蛋白表达;采用流式细胞术检测Chk1基因沉默对二烯丙基二硫诱导乳腺癌细胞凋亡及细胞周期的影响。结果:转染Chkl siRNA后,乳腺癌细胞MCF-7中Chkl蛋白表达水平降低,明显低于对照组(P<0.05)。FCM检测结果显示,转染Chkl siRNA后,G2/M期乳腺癌细胞数量有所降低(P<0.05),并且si-Chkl+DADS组G2/M期比率明显低于NC siRNA+DADS组(P<0.05)。Chk1基因沉默后,二烯丙基二硫诱导的细胞凋亡率由(14.7±1.0)%上升到(29.8±1.7)%。结论:siRNA抑制Chk1基因表达可明显消除G2/M期阻滞,并显著增强二烯丙基二硫诱导乳腺癌细胞MCF-7凋亡的敏感性。     

硫化氢对油酸诱导急性肺损伤大鼠细胞外基质的调节作用

目的 探讨外源性硫化氢(H2S)对油酸诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠细胞外基质(ECM)的调节作用.方法 雄性SD大鼠35只,随机分为对照组(n=5)、油酸组(n=15)、油酸+硫氢化钠(NaHS)组(n=15).油酸组大鼠尾静脉注射油酸0.1 mL/kg;油酸+NaHS组先腹腔注射NaHS 56 μmol/kg(溶于0.5 mL生理盐水中),30 min后再尾静脉注射油酸0.1 mL/kg.以上两组均分为2、4、6 h三个观察点,每个点5只.对照组大鼠尾静脉注射0.1 mL/kg生理盐水,观察6 h.在观察时间结束后,麻醉大鼠,行支气管肺泡灌洗,灌洗液(BALF)沉渣行瑞士染色进行中性粒细胞(PMN)分类计数;取右肺上叶,计算湿重/干重(W/D)值;用ELISA法检测血浆、肺组织匀浆基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)水平;用敏感硫电极法检测H2S水平.结果 与对照组比较,油酸组2、4、6 h PMN显著升高(P均<0.01);与油酸组比较,油酸+NaHS组各时间点PMN显著降低(P均<0.05).与对照组比较,油酸组2、4、6 h肺W/D值显著升高(P均<0.01);与油酸组比较,油酸+NaHS组4、6 h肺W/D值显著降低(P均<0.05).与对照组比较,油酸组2、4、6 h血浆、肺组织匀浆H2S水平显著降低(P均<0.01);与油酸组比较,油酸+NaHS组血浆、肺组织匀浆H2S水平4、6 h显著升高(P均<0.05).与对照组比较,油酸组2、4 h血浆、肺组织匀浆及6 h血浆MMP-9水平显著升高(P均<0.05);与油酸组比较,油酸+NaHS组4 h 血浆MMP-9水平显著降低(P<0.05),2、6 h血浆、肺组织匀浆及 4 h 肺组织匀浆MMP-9水平降低,但差异无统计学意义(P均>0.05).与对照组比较,油酸组4 h 血浆、肺组织匀浆及6 h肺组织匀浆TIMP-1水平显著降低(P均<0.05);与油酸组比较,油酸+NaHS组2、4、6 h血浆、肺组织匀浆TIMP-1水平升高,但差异无统计学意义(P均>0.05).结论 外源性H2S可能通过调节肺组织MMP-9和TIMP-1水平的变化,发挥对油酸诱导大鼠ALI 的细胞外基质的调节作用.     

HPLC法测定银翘解毒颗粒中连翘苷和牛蒡子苷的含量

目的：建立以RP-HPLC法测定银翘解毒颗粒中连翘苷和牛蒡子苷含量的方法。方法：采用Agilent C18（4．6mm×250mm,5μm）色谱柱,流动相：乙腈-水（27：73）,检测波长：280nm,柱温：30℃,流速：1．0ml／min。结果：连翘苷在0．02142～0．10710μg范围内进样量与峰面积呈良好线性关系,平均加样回收率为99．93％,RSD为0．71％;牛蒡子苷在0．8368-6．6940μg范围内进样量与峰面积呈良好线性关系,平均加样回收率为99．75％,RSD为0．44％。3批样品中连翘苷和牛蒡子苷的含量分别为0．04318、1．07300mg]g;0．04306、1．07000mg／g;0．04310、1．07100mg／g。结论：本法灵敏、准确,专属性强,重现性好,可作为银翘解毒颗粒中连翘苷和牛蒡子苷的含量测定方法。     

高效液相色谱串联质谱法分析菊花水提取液的化学成分

目的采用高效液相色谱串联质谱法分析菊花水提取液的化学成分。方法采用水为溶剂加热回流提取法提取菊花药材,提取液采用高效液相色谱串联质谱法对其主要的化学成分进行分离和鉴定。结果通过高效液相色谱可将20个主要的化学成分较好的分离,其中13个通过串联质谱进行了结构鉴定,8个通过对照品得到了确证。结论高效液相色谱串联质谱法快速、准确,可用于菊花药材的化学成分鉴定。     

沉默Chk1基因对姜黄素诱导胃癌细胞SGC7901凋亡敏感度的影响

目的探讨siRNA沉默Chk1基因表达对姜黄素诱导胃癌细胞SGC7901凋亡和细胞周期的影响,评价其作为姜黄素治疗胃癌增敏靶点的有效性。方法采用RNAi技术在胃癌细胞SG-7901中将Chk1基因沉默,采用Western blot检测转染前后Chk1蛋白表达的变化,采用流式细胞术检测Chk1基因沉默对姜黄素诱导胃癌细胞凋亡及细胞周期变化的影响。结果转染Chk1 siRNA后,胃癌细胞SGC7901中Chk1蛋白表达受抑制,明显低于对照组(P＜0.05)。FCM检测结果显示,si-Chk1组较空白对照组G₂/M期百分比有所降低(P＜0.05),si-Chk1+Curcumin组G₂/M期比例明显低于Empty vector+Curcumin组(P＜0.05)。siRNA沉默Chk1基因使姜黄素诱导的细胞凋亡率由(14.7±1.1)%上升到(28.9±1.8)%。结论siRNA沉默Chk1基因可明显消除G₂/M期阻滞,并显著增强姜黄素诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡的敏感度,提示Chk1可作为姜黄素治疗胃癌的有效增敏靶点。     

黄体生成素细胞在摩杂一代水牛垂体内的免疫组织化学定位

黄体生成素(luteinizing hormone, LH)是动物腺垂体前叶促性腺激素细胞合成和分泌的一种糖蛋白类促性腺激素,它是LH分泌细胞受下丘脑脉冲式释放的促性腺激素释放激素(gonadotrophin releasing hormone, GnRH)刺激后合成分泌的~[1],在动物的性腺发生发育和繁殖过程中起着重要作用.