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目的 建立一种快捷、灵敏、成本低的蛋白质溶解度的共振光散射(RLS)表征方法,用于蛋白质突变体溶解度比较。方法
同步扫描模式下,跟踪RLS信号强度对蛋白浓度的响应,根据响应曲线拐点预测蛋白质相应分散状态的最大浓度,据此定义该状态的溶解度。选择牛血清白蛋白(BSA,0~50.0 g/L),考察pH(6.5、7.0、7.4)、盐离子浓度(0.05、0.10、0.15、0.20 mol/L)对溶解度测定值的影响;并测定谷胱甘肽 S-转移酶同工酶alpha(GSTA,0~27.0 g/L)、Mμ(GSTM,0~20.0 g/L),考察方法通用性。应用RLS测定季也蒙毕赤酵母菌尿酸酶(MGU,0~0.4 g/L)溶解度并指导其突变体溶解度改进。结果 所测蛋白质RLS响应曲线均出现两个拐点,低浓度拐点可近似蛋白质单分子分散状态的最大浓度,而高浓度拐点近似蛋白质多分子聚集状态的最大饱和浓度即热力学平衡溶解度。BSA(等电点4.6)两个拐点均随pH的增大(6.5~7.4)而增高,pH7.4 HEPES缓冲液中分别对应~1.2 g/L、~33 g/L,后者与相同条件下商品溶解度接近;加入 NaCl 使两个浓度拐点均降低,初步表明 RLS 可直接表征蛋白溶解度。GSTA、GSTM 的RLS响应曲线低浓度拐点为~0.7 g/L,~0.8 g/L,高浓度拐点分别为~10 g/L、~11 g/L,均小于BSA,方法有通用
性。MGU两个拐点分别对应0.24 g/L和0.30 g/L,而其突变体溶解度提高约2倍。结论 共振光散射法可直接表征蛋白质溶解度,且简便、灵敏,蛋白用量少,尤其适用于表达丰度低的蛋白质突变体溶解度的快速比较。 相似文献
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目的 在MDT模式下PBL教学模式用于胸外科临床教学,评价临床实习生教学质量.方法 纳入实习生90例,随机分为带教组、对照组,各45例,对照组用传统教学模式,带教组用PBL模式方法学习,对带教后在教学成绩、满意水平等方面一一评价.结果 与对照组比,带教组实习生理论考核成绩、技能考核成绩、综合素质成绩均提升明显,组间带教评分分数值相差大;带教组对胸外科教学中带教满意度、带教老师满意度均增高,组间差异有统计学意义(P<0.05).结论 胸外科教学PBL教学模式在临床带教中效果改善很明显,比传统方式取得的成绩更佳. 相似文献
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目的:用两种聚乙二醇(Polyethylene glycol,PEG)不饱和酸单酯经自由基共聚包被纳米Fe3O4磁芯制备磁性微球,考察其功能化后特异性和非特异性结合作用。方法:水解沉淀法制备纳米Fe3O4磁芯;用PEG-350单甲醚丙烯酸酯和PEG-1540单顺丁烯酸单酯为单体,在正庚烷-水组成的油包水体系自由基共聚制备磁性微球;将微球表面来自PEG-1540的羟基经甲磺酸酯活化、连接乙二胺后再用活化生物素修饰。透射电镜观察其外貌;测定与碱性磷酸酶标记链亲和素(Streptavidin labeled byalkaline phosphate,AP-SAV)的特异性结合、与4-硝基-1-萘酚苯甲酸酯等的非特异性结合。结果:所得Fe3O4粒径60 nm左右,生物素修饰后粒径接近200 nm。此磁性微球可从混合蛋白中选择性分离碱性磷酸酶酶标记的链亲和素,结合容量约51 ng蛋白/g磁性微球;4-硝基-1-萘酚苯甲酸酯在浓度很低时同此磁性微球的结合低于检测限,在浓度高达64μmol/L时仍无显著结合。结论:用两种PEG不饱和酸酯共聚包被Fe3O4可制备表面亲水磁性微球,功能化后有特异相互作用且非特异性作用很弱,但还需提高此磁性微球功能化后的特异性结合容量。 相似文献
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目的探讨ScvO2在外科术后危重患者中的临床应用价值.方法选择入SICU的外科术后危重病患者共18名,根据预后及有无并发MODS分为对照组、MODS组以及死亡组3组,进行持续ScvO2及常规血流动力学监测,并进行相关性分析.结果 3组患者ScvO2值在早期差异有统计学意义(P<0.05),但患者的心率、血压、CVP监测结果直到经抢救治疗后24 h才显示出差别.ScvO2监测值与血乳酸值、APACHEⅡ评分存在负相关(r:-0.721/-0.80).结论患者ScvO2水平与病情严重程度相关,早期持续监测对评价病情和判断预后有重要意义. 相似文献
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用线性动力学方法考察黄嘌呤对尿酸酶的抑制作用 总被引:4,自引:1,他引:4
目的:以米氏常数相差较大的两种尿酸酶为模型,考察用两个底物浓度下标定比活性确定酶动力学参数和筛选抑制剂的可靠性.方法:用293 nm吸收监测尿酸酶反应.通过两个底物浓度下标定比活性确定表观米氏常数(apparent michaelis-menten constant,Kmapp)和表观最大反应速度(apparent maximal reaction rate,Vmapp).据表观动力学参数随抑制剂浓度的变化确定抑制类型和抑制常数(inhibition constant,Ki).结果:只要所用尿酸浓度中较小者(the lower concentration of uric acid,SL)大于待测Km的0.8倍且较大者(the higher concentration of uric acid,SH)在SL的1.4倍以上,此线性动力学法能可靠测定Bacillusfastidiosus和Candida species尿酸酶的米氏常数,且与双倒数法结果一致.如SL大于Km的3.8倍而SH为SL的3倍,此线性动力学法所得Candida species尿酸酶Kmapp与抑制剂浓度成正比,Ki为(4.8±0.5)μmol/L,与双倒数法结果一致.Bacillus fastidiosus尿酸酶Km太高,底物浓度有限时不能用此方法筛选其抑制剂.结论:此线性动力学方法仅用高于Km的底物浓度也能可靠确定酶动力学参数,有利于用常规定量方法筛选对底物具有高亲合力特殊靶酶的抑制剂. 相似文献
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毛蕊花苷和角胡麻苷对肌肉疲劳的延缓 总被引:7,自引:0,他引:7
很多实验表明,肌肉持续剧烈收缩诱发产生活性氧[1-3].活性氧会导致肌肉组织中肌质网[4],收缩蛋白[5]等功能障碍.活性氧清除剂在小鼠负重游泳实验中能抗疲劳[6,7].我们发现电刺激蟾蜍腓肠肌离体标本持续收缩,肌肉匀浆脂质过氧化物含量同收缩能力呈负相关[2],活性氧促进肌肉疲劳而其清除剂能抗肌肉疲劳[3].马先蒿(PedicularisresupinataL.)在藏北称‘土人参’,在藏药中常用作强心药.我们从马先蒿中提取并鉴定了几种具有多酚结构的苯丙素苷[8].这些苯丙素苷在亚油酸胶束及鼠肝微… 相似文献
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目的:探讨抗氧化体系干预物质和维生素C(VC)对血红蛋白(Hb)测定的干扰.方法:兔红细胞溶血后为样品.比较抗氧化酶抑制剂和VC对直接测定Hb、测定碱化Hb、测定叠氮Hb等的干扰.结果:直接测定Hb吸收、测定叠氮Hb都受到VC、超氧化物歧化酶抑制剂、过氧化氢酶抑制剂等的干扰,碘乙酰胺和谷胱甘肽过氧化物酶抑制剂干扰较小.上述物质对测定碱化Hb几乎没有干扰.结论:测定碱化Hb用于评价高浓度VC的溶血作用和机制更可靠. 相似文献
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目的 动态评价阿克苏地区改水工程运行情况及水氟含量,了解地方性氟中毒病情变化趋势。方法 在监测村开展改水工程运转和水氟含量调查,开展8~12周岁儿童氟斑牙患病情况、成人氟骨症患病情况及尿氟含量调查。结果 12个监测村均已完成改水且正常运转,2016—2022年改水工程水氟合格率分别是72.73%、81.82%、100%、100%、100%、100%和100%;2016—2022年8~12岁儿童氟斑牙检出率分别为37.44%、30.92%、28.47%、22.10%、21.97%、16.68%和14.25%;2019年成人氟骨症检出率为0.83%,尿氟几何均值为0.90 mg/L,成人尿氟>1.6 mg/L,占15.31%。结论 阿克苏地区防治饮水型氟中毒效果显著,但改水降氟防控措施是一项长期而艰巨的系统工程,各相关部门应建立健全长效工作机制,加强改水工程管理维护和日常监测,保证工程水源水量充足,同时应加大防病宣传,增强病区群众防病意识。 相似文献
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目的 比较白内障囊外摘出及后房型人工晶状体植入术中 2种不同的截囊方法的术中术后效果。方法 将 14 0例患者随机分为A、B两组 ,A组 72例 82眼 ,采用开罐式截囊白内障囊外摘除囊袋内人工晶状体植入术 ,B组 6 8例 74眼采用信封式截囊囊袋内人工晶状体植入术。随访 12~ 2 4月 ,比较 2组视力恢复情况和术中术后并发症。结果 术中A组囊袋放射状撕裂 6 3眼 ,占A组的 76 % ,术中B组囊袋放射状撕裂 37眼 ,占B组的 5 0 % ,2组比较P <0 0 5 ,有显著性差异 ;A组后囊膜破裂6眼占 7 3% ;B组后囊膜破裂 4眼占 5 4 % ,2组比较P >0 0 5 ,无显著性差异。A组人工晶状体固定于囊袋内 5 9眼 ,占A组的72 % ,B组人工晶状体囊袋内固定 6 5眼 ,占B组的 88% ,2组囊袋内固定率比较P <0 0 5 ,有显著性差异。两组术后 1周视力无显著性差异 ;术后 12~ 2 4个月视力 :≥ 0 5者A组 5 1 2 2 % ;B组 85 14 % ,2组术后远期视力比较P <0 0 5 ,有显著性差异。结论 信封式截囊囊袋内植入人工晶体优于开罐式截囊后房型人工晶状体植入。 相似文献