利用SELDI技术检测大鼠肝纤维化组织的实验研究

目的初步建立表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF/MS)技术检测大鼠肝纤维化组织样本的方法。方法采用SELDI技术及弱阳离子交换表面蛋白芯片(CM10)对组织样本进行分析,从组织样本制备、组织裂解液选择、上样浓度控制、重复性验证等方面进行实验条件的优化,并对大鼠肝纤维化组和对照组肝组织各4例进行差异蛋白分析。结果液氮研磨法结合含两性电解液和蛋白酶抑制剂的裂解液处理样本,以及组织蛋白样本浓度为5μg/μl时,芯片检测得到的蛋白峰强度和蛋白数量最优;对两组样本重复检测3次,蛋白丰度的平均变异系数(CV值)分别为0.105和0.155;两组样本共检测到292个蛋白峰,其中差异表达蛋白54个,在肝纤维化组中表达上调16个,表达下调38个。结论初步建立了SELDI技术检测组织样本的方法,并初步筛选出大鼠肝纤维化差异表达蛋白。     

SELDI检测结核血清蛋白指纹图谱及与同类研究比较

目的利用SELDI技术筛选肺结核患者血清差异表达蛋白并与同类研究的结果进行比较。方法采用SELDI-TOF-MS筛选30例肺结核患者和30例正常对照血清的差异表达蛋白,建立诊断模型;对105例样本进行盲法验证;与同类研究比较寻找共同差异表达蛋白。结果 SELDI筛选出86个差异有统计学意义的蛋白(P﹤0.05)。从中筛选出了6个最具有诊断价值的潜在标志蛋白建立诊断模型,该诊断模型的ROC曲线下面积为0.983;盲法验证ROC曲线下面积为0.837。与同类研究比较发现,11个差异有统计学意义(P﹤0.001)的差异表达蛋白在本研究中重现。结论肺结核病人与对照的血清蛋白图谱存在差异,两个独立实验共同得到的11个差异表达蛋白与结核病的关系值得深入研究。     

2型糖尿病用瑞格列奈联合甘精胰岛素治疗的疗效观察

目的观察瑞格列奈联合甘精胰岛素治疗对比预混胰岛素治疗2型糖尿病疗效和不良反应。方法 60例应用口服降糖药(OAD)血糖控制不理想的T2DM患者随机分为甘精胰岛素组(n=30)和预混胰岛素组(n=30)。甘精胰岛素组采用三餐前15min各服0.5～1.5mg瑞格列奈,每晚10点注射甘精胰岛素。预混胰岛素组采用早、晚餐前30min皮下注射。结果治疗后两组HbA1c及FBG、早PPG均较前明显下降,两组下降度比较无统计学意义,午餐PPG比较有统计学意义,甘精组低血糖事件明显少于预混组。结论甘精胰岛素联合口服瑞格列奈治疗能良好地控制高血糖,且低血糖发生率偏低,控制午餐后血糖效果更优越。     

STR基因多态性与巴马地区老人长寿的关系

目的 探讨广西巴马长寿老人TH01等15个STR多态位点与长寿的关系.方法 调查巴马长寿区长寿老人167例(长寿组),非长寿区的长寿老人22例(对照1组),非长寿区无长寿家族史的健康对照者134例(对照2组).采用多色荧光标记的聚合酶链反应-短串联重复序列(PCR-STR)技术及自动测序法,检测各组人群TH01等15个STR位点等位基因分型.比较长寿组和各对照组等位基因及基因型频率的差异.结果 长寿组分别与各对照组相比频率有差异(P<0.05)的等位基因或基因型如下: TH01-A10、CSF1PO-A9、TH01A9-10频率低于对照1组;D19S433-A17、D7S820-A10、D7S820-A11频率高于对照2组, D7S820-A12/A13/A14三个等位基因、vWA-A17、D8S1179-A15、D5S818 A10-12低于对照2组.结论 巴马长寿群体有着自己特有的、异于其他地区长寿群体的STR等位基因分布.在巴马长寿人群中发现了TH01、CSF1PO、vWA、D19S433、D7S820、D5S818、D8S1179等位点等位基因的置换或突变可能与长寿或衰老的进程相关.     

多西他赛+顺铂治疗晚期胃癌的临床疗效和毒副反应观察

目的 研究多西他赛(DTX)与顺铂(DDP)联合治疗晚期胃癌的临床疗效以及Ⅲ-Ⅳ度毒副反应.方法 入选病例均为ⅢB/Ⅳ期胃癌,共18例,所有患者均接受两次以上的化疗周期.结果 CR 2例、PR 7例、SD 5例、PD 2例、未能评估2例,临床有效率(PR+CR)为50%,主要副作用为胃肠道反应、中性粒细胞减少,Ⅲ-Ⅳ度中性粒细胞减少占55.5%,Ⅲ-Ⅳ度脱发发生率44%,无治疗相关死亡病例.结论 多西他赛加顺铂方案治疗晚期胃癌疗效较好,患者耐受性良好.     

利用亲和层析法检测乙酰化蛋白的研究

目的 建立一种快速、相对定量检测乙酰化蛋白方法,并初步应用其检测药物作用后Jurkat细胞乙酰化总蛋白水平.方法 用不同浓度的曲古菌素A(TSA)诱导Jurkat细胞蛋白高乙酰化后,利用抗乙酰化赖氨酸抗体亲和层析柱富集纯化乙酰化总蛋白,经酸洗脱后固定于酶标板,ELISA法检测乙酰化蛋白相对总量,并用基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF/TOF)分析验证其成分;同法检测不同浓度的没食子酸、大黄素、单乙酰化大黄素A三种药物作用Jurkat细胞后乙酰化总蛋白水平的变化,筛查诱导Jurkat细胞蛋白乙酰化药物.结果 1μmol/L TSA作用于4×105Jurkat细胞24 h,乙酰化总蛋白相对水平最高.MALDI-TOF/TOF分析显示,TSA诱导Jurkat细胞产生的乙酰化蛋白共有22种,其中15种为乙酰化组蛋白.没食子酸、大黄素、单乙酰化大黄素A作用Jurkat细胞后所导致的乙酰化程度不同,以1μmol/L浓度TSA为阳性对照组,无药物为空白对照组,35.09 μmol/L和17.54 μmol/L大黄素处理的Jurkat细胞乙酰化蛋白相对水平分别为4.3％和14.2％;1.47 μmol/L和2.94 μmol/L没食子酸处理组乙酰化蛋白相对水平分别为28.7％和11.5％;152.91 μmol/L和30.58 μmoL/L单乙酰化大黄素组分别为22.0％和3.6％;其中1.47 μmol/L没食子酸所诱导的乙酰化蛋白水平最高.结论 初步建立了活细胞基础上纯化富集并检测乙酰化总蛋白水平的方法,该法可快速、简便的筛选以组蛋白去乙酰化酶为靶点的抗癌药物.     

猪源生物型人工骨进行胸壁重建的可行性及疗效分析

目的探讨用猪源生物材料骨进行骨性胸壁修复重建的方法及疗效。方法对6只中国杂种犬进行右侧开胸,切除第5～7肋及肋间肌,胸壁缺损9 cm×8 cm,用人工骨替移植替代第5、6肋。术后1周及1、3、6、12个月分别行X线照片检查,观察人工骨有无发生移位、脱落、变形及植入骨溶解变薄。术后6、12个月各解剖2只动物,分别进行大体检查,观察人工骨与犬自体骨连接处有无骨痂形成,对位、对线是否良好,犬胸壁内外表面弧度与犬胸壁是否一致;进行组织学检查,观察植入骨与犬自身骨交界处组织结构及植入骨周围有无排异反应。余下2只进行长期观察,以预测人工骨长期置入体内的可能性及转归。结果 6例动物全部长期存活,X线检查人工骨无移位、脱落、变形及植入骨溶解变薄等。大体观察犬骨性胸壁内外表面塑形良好,人工骨与犬自体骨连接处有明显的骨组织及软骨组织和明显骨痂形成,移植骨对位、对线均良好;组织学观察植入骨与犬自身骨交界处由骨组织和软骨组织组成,外层为骨膜组织,有成骨细胞和破骨细胞存在,未见炎细胞浸润等排异反应,移植骨中段为纤维结缔组织包绕,内有新生血管形成。结论猪源生物型人工肋骨是一种优质骨性胸壁重建材料,置入机体后具有逐渐溶解破坏并向自体骨转化倾向。     

禽流感病毒感染小鼠前后表面蛋白编码基因变异情况分析

目的了解禽流感病毒（AIV）在感染小鼠前后表面蛋白编码基因的特点及变异情况。方法在A／Goose／Guangdong／NH／2003（H5N1）感染小鼠肺组织的第12小时和第9天各分离1株AIV病毒，通过鸡胚增殖后提取RNA，反转录合成cDNA，经PCR扩增和产物纯化构建重组质粒，用双脱氧链终止法进行核苷酸序列测定并进行基因特性分析。结果3株病毒HA基因的核苷酸序列同源性为99．6％～99．8％，推导氨基酸序列的同源性为99．3％～99．6％。3株病毒NA基因的核苷酸序列同源性为99．8％-99．9％，均为同义突变。M基因未发生任何变异。结论AIV感染小鼠后HA基因出现变异，NA和肘基因未出现有意义的突变。     

铜绿假单胞菌对左氧氟沙星耐药相关差异蛋白质组学研究北大核心CSCD

目的筛选铜绿假单胞菌野生型菌株PAO1对左氧氟沙星耐药前后的差异蛋白质,探讨这些蛋白质与铜绿假单胞菌对左氧氟沙星耐药的关系。方法采用亚抑菌浓度梯度递增法体外诱导PAO1对左氧氟沙星耐药,并设置同步对照组,应用表面增强激光解析电离飞行时间质谱(SELDI)技术和CM10蛋白质芯片检测PAO1对左氧氟沙星耐药株和同步对照菌株的菌体蛋白,采用Biomarker Wizard软件进行分析。结果左氧氟沙星耐药株与同步对照菌株间有8个差异蛋白(P<0.05),5个差异蛋白高表达,分子量分别为1 004、1 007、1 918、5 175Da和5 454Da;有3个蛋白质低表达,分子量分别为1 012、1 629、2 004Da。结论用蛋白质芯片和SELDI技术对PAO1的左氧氟沙星耐药菌株与同步对照菌株进行蛋白质组学研究,可以筛选出与PAO1对左氧氟沙星耐药可能相关的差异蛋白质。