实验小鼠肾匀浆中苹果酸酶-1和异柠檬酸脱氢酶-1实验室检测能力验证结果评价

目的 通过实验小鼠肾匀浆中苹果酸酶-1和异柠檬酸脱氢酶-1检测能力验证计划，了解实验动物检测机构检验能力，提高实验动物质量检测水平。方法 按照CNAS批准的能力验证方案，通过样品制备，经过稳定性和均匀性检验合格，作为能力验证样品。采用随机编号，发样给参加单位，并附作业指导书。在规定时限提交检验报告和原始记录复印件，其结果与样品预检结果一致的判为满意结果，不一致或未能提交结果的判为不满意结果。结果 共有10个实验室参加本次能力验证项目，其中满意结果的实验室8个，占总参加机构的80%，不满意的实验室有2个，占20%。结论 实验动物质量检测机构在实验小鼠肾匀浆中苹果酸酶-1和异柠檬酸脱氢酶-1的检测能力较高，实施能力验证计划能够反映实验室的检测水平。     

单核苷酸多态性分析在近交系大鼠遗传检测中的应用

目的 研究SNP在近交系大鼠遗传检测中的应用.方法 选取大鼠20号染色体MHC所在P12区上的9个SNP位点,应用新建立的高保真酶特异性检测SNP基因分型技术对五种常用近交系大鼠(BN、F344、WKY、LEW 、SHR)和两种新培育近交系大鼠(MIJ和HFJ)进行SNP多态性分析.结果 五种常用近交系的SNP检测结果与Rat Genome Database网站提供的基因型数据一致,并检测确立了新品系的SNP基因型.同时绘制出七种近交系大鼠在该9个SNP位点的遗传扩增图谱.结论 运用所筛选的9个SNP位点进行大鼠多态性分析,能够快速、可靠地对BN、F344、WKY、LEW、SHR及MIJ、HFJ进行遗传监测.     

实验动物质量与药品检验

目的 药品检验大量使用动物实验,其质量影响检验结果,为确保检验结果的准确性,必须保证实验动物质量.方法 从药检系统实验动物使用状况出发,结合法律法规要求,阐述实验动物质量的重要性,提出促进行业发展的建议.结果与结论 药检系统实验动物工作在管理体系、动物质量、人才队伍、动物资源建设等方面需要进一步提高,必须依法使用符合标准的动物,确保药品检验结果的准确可靠.     

逆转录酶活性检测方法在金黄仓鼠中的应用

目的应用逆转录酶活性检测方法对金黄仓鼠及其它动物血清、细胞进行检测。方法根据雀麦草花叶病毒RNA序列设计一对引物,加入样品对RNA进行逆转录PCR,电泳观察有无特异条带以确定样品中是否含有逆转录酶。结果在兔、豚鼠、大鼠以及仓鼠血清中检出逆转录酶活性阳性样本。结论该方法具有良好的敏感性和特异性,可以应用于动物血清中逆转录酶活性的检测。     

近交系小鼠过氧化氢酶-2遗传生化标记位点的研究

目的 为了进一步完善近交系小鼠遗传生化标记检测方法,对近交系小鼠过氧化氢酶-2生化标记位点进行研究.方法 将CBA/Ca与BALB/c交配得到杂交F1代动物,同时将CBA/Ca与C57BL/6交配得到杂交F1代动物,然后通过F1代动物之间的交配,以及F1代动物与母代的回交,得到F2动物,对F2代动物进行过氧化氢酶-2生化标记检测.结果 在杂交F1代不表现的过氧化氢酶-2的b型基因,在F2代出现.结论 近交系小鼠过氧化氢酶-2遗传生化标记位点的等位基因a是完全显性的.     

乙型脑炎病毒结构蛋白C＋pre M和E基因的克隆与序列分析

目的 对乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)结构蛋白基因进行扩增、克隆和序列测定.方法 根据GenBank中发表的乙脑病毒结构蛋白基因C + pre M基因和E 序列,设计合成两对引物,以JEV Nakayama-NIH株RNA为模板,反转录并扩增目的 cDNA,然后与 pGEM-T easy载体连接并转化大肠杆菌DH5α菌株,提取的重组质粒用电泳、PCR和酶切鉴定后并进行测序.将JEV Nakayama-NIH与GenBank中报道的多株JEV结构蛋白C + pre M 基因和E基因序列进行了比较.结果 Nakayama-NIH与其他参考株C + pre M和E基因的核苷酸同源性为99%,证实扩增克隆的是JEV的结构蛋白C + pre M和E基因.结论 对JEV分子生物学特征进行了分析,为JEV特异性核酸探针的研制奠定了基础.     

近交系DA大鼠遗传学质量

目的 通过鼠尾皮肤循环移植和生化标记法检测DA大鼠的生化标记基因,为动物实验的研究提供丰富的动物基因库.方法 采用鼠尾皮肤循环移植法观察自体与异体皮片成活率,采用蛋白质与同工酶醋酸纤膜电泳法,对试验DA大鼠进行碱性磷酸酶等11个生化标记基因位点进行确定.结果 DA大鼠自体与异体移植的皮片在100 d的观察期间全部成活,DA大鼠11个生化标记基因位点均为纯合的.结论 DA大鼠生化位点的确定,奠定了DA大鼠的生化位点遗传概貌的理论基础,为进一步研究DA大鼠提供遗传学资料.     

封闭群斑马鱼的STR遗传检测技术

目的建立近交系实验用鱼DNA检测方法,用于遗传质量控制。方法以RR-B、RW-H、BY-F三个近交系剑尾鱼的基因组DNA为主要研究对象,并以非选育剑尾鱼作对照,采用STR（short tandem repeat）引物扩增方法检测不同品系在DNA上的异同。设计10对STR引物,优化PCR电泳条件,使用相同的实验条件进行重复,以得到可靠的扩增条带,筛选出特异性引物。结果有4对引物可扩增出稳定条带,1对引物（AY204223）的PCR扩增条带在非选育群中表现多态性,在RR-B与BY-F系表型一致,与RW-H表型不同。这些STR位点能够区分剑尾鱼三个近交系品系。结论STR检测技术可望用于近交系剑尾鱼的遗传质量监测。     

嗜肺巴斯德菌TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测方法的建立及应用研究

目的 建立嗜肺巴斯德菌的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测方法.方法 针对嗜肺巴斯德菌16SrRNA基因设计特异性引物和探针,建立嗜肺巴斯德菌TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测方法,并验证该方法的特异度、敏感度和稳定性.对2008～2011年采集的1 680份样本进行检测.结果 嗜肺巴斯德菌TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR检测方法具有高度特异性,对多杀巴斯德菌、产气巴斯德菌、支气管鲍特杆菌、肺炎克雷伯杆菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌均无交叉反应,检测灵敏度达22拷贝.标准曲线显示备浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.488,PCR效率为100％.荧光定量PCR检测1 680份样本,检出137份嗜肺巴斯德菌阳性.该方法可直接从样本中特异性地检出嗜肺巴斯德菌.结论 TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法具有灵敏、特异、稳定的特性,适用于嗜肺巴斯德菌的快速检测.     

五种国产与进口小鼠病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较研究

目的评价国产小鼠病毒抗体ELISA检测试剂盒。方法选择国产与进口小鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、肝炎病毒(MHV)、仙台病毒(SV)、腺病毒(MAV)、细小病毒(MPV)ELISA抗体检测试剂盒,进行敏感性、特异性、精密性、稳定性、可信度试验比较。结果国产与进口试剂盒:同种试剂盒之间灵敏度相差最低为2倍,差异显著(P<0.05),最高为16倍,差异极显著(P<0.01);特异性试验显示每种试剂盒,与其他4种病毒均无交叉反应;精密性试验显示5种试剂盒批内平均变异系数均小于10%;稳定性试验显示5种试剂盒相对偏差均小于25%;分别选择已知36份小鼠血清进行检测,国产和进口LCMV、MHV、SV、MPV符合率均为100%;国产MAV符合率为86.1%,进口MAV符合率均为100%,二者之间差异极显著(P<0.01)。结论除国产MAV试剂盒敏感性、可信度低于进口外,国产LCMV、MHV、SV、MPV试剂盒与进口同种试剂盒相比,在敏感性、特异性、精密性、稳定性和可信度方面均良好。