稳定表达绿色荧光蛋白的COS7细胞系的筛选和鉴定

目的 构建稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)的COS-7细胞系,为相关实验对照提供方便. 方法 常规方法培养COS-7细胞,将含pEGFP-N3基因的质粒转染COS-7细胞,G418抗性筛选,并用荧光显微镜进行跟踪检测,挑选耐药单细胞克隆并扩大培养至稳定细胞株. 结果 G418筛选的最适浓度为500 μg/mL.筛选到的COS7 -GFP克隆荧光显微镜下发出明亮的绿色荧光,细胞的生物学性状保持稳定,通过Western blot能检测到GFP蛋白. 结论 成功筛选并建立了稳定表达的COS7 -GFP细胞系.     

钙蛋白酶在TOCP诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬中的调节作用

目的探究钙蛋白酶对三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)诱导的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞自噬的调节作用。 方法不同浓度TOCP处理未分化和分化的SH-SY5Y细胞,用荧光分光光度法检测钙蛋白酶活性。抑制钙蛋白酶活性后,通过Western blotting检测TOCP对自噬相关蛋白的影响；抑制钙通道后,用荧光分光光度法检测胞质钙离子浓度对钙蛋白酶活性的影响。 结果TOCP诱导未分化和分化的SH-SY5Y细胞钙蛋白酶活性上升；钙蛋白酶抑制剂可降低TOCP诱导的自噬相关蛋白LC3-II和Beclin1表达。维拉帕米和2-APB阻断钙通道后钙蛋白酶活性降低,维拉帕米而非2-APB可以抑制TOCP诱导的自噬相关蛋白LC3-II表达。 结论TOCP在未分化和分化的SH-SY5Y细胞中诱导的自噬受钙蛋白酶活性的调节。     

采用微团培养技术探讨双酚A的体外发育毒性

采用微团培养观察了不同浓度的双酚A(0～ 5 0mg L)对体外培养的Wistar大鼠胚胎肢芽细胞增殖和分化的影响 ,旨在了解双酚A的体外发育毒性特点及其可能的作用机制。结果显示 :双酚A对体外培养的Wistar大鼠胚胎肢芽细胞的增殖和分化均有抑制作用 ,表现为染毒组肢芽细胞集落形成数量减少 ,细胞毒性试验吸光度值下降 ,并呈现出明显的剂量 反应关系。双酚A对肢芽细胞的 5 0 %增殖抑制浓度 (IP50 )和5 0 %分化抑制浓度 (ID50 )分别为 38 74mg L和 2 7 93mg L ,IP50 ID50 =1 39。按照Renault等人推荐的体外致畸分类标准 ,双酚A属于阳性致畸物 ,对肢芽细胞的分化和增殖有特异性抑制作用     

维生素C对甲醛胚胎发育毒性抑制作用

目的 探讨维生素C(VC)对甲醛诱导胎鼠发育毒性的影响.方法 应用体外全胚胎培养模型,观察100μg/mL VC对终浓度为9,27,81 μmol/L甲醛诱导昆明种小鼠胚胎发育毒性的影响.结果 与对照组比较,9μmol/L甲醛可使胚胎头长、颅臀长、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)含量分别升高到(1.66±0.21),(3.48±0.40)mm,(47.70±2.12)me,/(g·prot),(4.27±0.62)nmol/(mg·prot),差异有统计学意义(P<0.05);27 μmol/L甲醛使胚胎脏层卵黄囊(VYS)直径、头长、颅臀长、体节数、GSH含量分别下降到(4.35±0.65),(1.48±0.30),(3.19±0.43)mm,(25.2±1.2)对,(40.25±4.38)mg/(g·prot),MDA含量升高到(6.29±0.47)nmol/(mg·prot),与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);VC能明显改善上述指标,但与对照组比较差异无统计学意义(P<0.01);VC不能明显改善81 μmol/L甲醛诱导的毒性损伤.结论 VC对一定剂量范围内的甲醛胚胎毒性具有明显抑制作用.     

PM2.5对支气管上皮细胞DNA损伤作用研究

目的：探讨大气细颗粒物（PM_2.5）染毒对人支气管上皮细胞（HBE） DNA损伤的作用。方法：分别用8、20、50 μg/mL的PM_2.5水溶液染毒HBE细胞24 h后,单细胞凝胶电泳实验（SCGE）检测DNA损伤情况。10和50 μg/L的PM_2.5水溶液染毒HBE细胞,以未染毒细胞作为阴性对照组,10 μmol/L的Cr⁶⁺水溶液为阳性对照组,实时荧光定量PCR （qPCR）检测DNA损伤修复基因hOGG1、hMTH1的mRNA表达水平的变化,Western blot检测hOGG1、hMTH1蛋白表达变化。结果：单细胞凝胶电泳检测8、20和50 μg/mL PM_2.5水溶液染毒组HBE细胞的尾部DNA含量、尾长、尾距较阴性对照组明显增加（P < 0.05或P < 0.01）。qPCR结果显示,与阴性对照组比较,HBE细胞hOGG1 mRNA表达水平在10和50 μg/mL PM_2.5水溶液染毒以及阳性对照Cr⁶⁺水溶液染毒后分别升高75.0%、132.0%、214.0%;hMTH1 mRNA分别升高61.0%、144.0%、75.0%。Western blot结果显示,与阴性对照组比较,HBE细胞hOGG1蛋白表达水平在10和50 μg/mL PM_2.5水溶液染毒以及Cr⁶⁺水溶液染毒后分别升高47.6%、64.0%、47.0%;hMTH1蛋白分别升高20.5%、49.8%、20.9%。结论：PM_2.5水溶液染毒对HBE细胞DNA具有明显的损伤作用,并引起HBE细胞DNA损伤修复基因hOGG1、hMTH1表达水平升高。     

锌对小鼠胚胎肢芽细胞分化和增殖的影响

目的观察锌缺乏与锌过量对小鼠胚胎肢芽细胞分化的影响及其毒性作用.方法取12天龄昆明种小鼠胚胎的肢芽,应用微团培养技术,观察不同剂量的锌对肢芽细胞分化和增殖的影响.结果培养基中锌缺乏时或者培养基锌浓度达42 μmol/L时,均可明显抑制细胞分化和增殖（P〈0.01）.当培养基锌浓度为21 μmol/L或28 μmol/L时,对肢芽细胞分化和增殖均具有明显的促进作用,而锌浓度达35 μmol/L时,对细胞分化的促进作用转化为抑制作用但不影响细胞的存活.结论体外实验条件下,锌对小鼠胚胎肢芽细胞的分化和增殖表现为促进和抑制双重作用;缺锌及过量锌均可抑制细胞的分化并产生毒性作用.     

甲基叔丁基醚对小鼠外周血T淋巴细胞亚群影响

目的探讨汽油添加剂甲基叔丁基醚对小鼠外周血T淋巴细胞亚群的作用。方法30只健康昆明种成年小鼠,体重(28·5±2·9)g,随机分为3组,灌胃染毒,染毒剂量分别为400,100和0mg/(kg·bw)。每天1次,共计30d。应用流式细胞仪测定外周血T淋巴细胞亚群CD3、CD4和CD8计数的变化,并计算胸腺及脾脏指数。结果甲基叔丁基醚染毒组体重轻度降低。可使外周免疫器官胸腺重及胸腺指数降低及外周血淋巴细胞亚群CD3、CD4减少,经统计学检验差异有统计学意义(P<0·05)。结论甲基叔丁醚可引起外周血淋巴细胞亚群CD3、CD4减少,免疫功能抑制。     

大鼠正常组织中的端粒酶活性及意义

为探讨大鼠正常组织中的端粒酶活性及意义 ,采用TRAP结合液闪计数法定量测定了成年SD大鼠大肠粘膜、肺脏、肝脏、睾丸及附睾组织中的端粒酶活性。结果显示 :这些组织中都有不同程度的端粒酶活性 ,其中睾丸组织中端粒酶活性水平最高。说明大鼠正常组织中有不同程度的端粒酶活性表达 ,并可能与人类正常组织中的调节机制不同。     

DEHP对3β-羟类固醇脱氢酶表达水平的影响

目的：研究邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯（DEHP）对MCF-7细胞中3β-羟类固醇脱氢酶（3β-HSD）表达的影响。方法：采用不同浓度（0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 mmol/L） DEHP对体外培养的MCF-7细胞分别染毒12、24和48 h,或同一浓度（0.8 mmol/L）染毒不同时间（3、6、12、24、48 h）后,荧光定量PCR检测各组MCF-7细胞3β-HSD mRNA表达水平,Western blot检测3β-HSD蛋白表达水平。结果：DEHP 0.1~0.8 mmol/L分别染毒细胞12~48 h,3β-HSD mRNA表达水平均较对照组升高,差异有统计学意义（P < 0.01）;DEHP 0.05 mmol/L染毒细胞48 h,3β-HSD mRNA表达水平比对照组升高,差异有统计学意义（P < 0.05）。DEHP 0.8 mmol/L染毒细胞6~48 h,3β-HSD mRNA表达水平均较对照组升高,差异有统计学意义（P < 0.01）。DEHP 0.2~0.8 mmol/L染毒细胞24 h,3β-HSD蛋白表达水平较对照组升高,差异有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。结论：DEHP可引起3β-HSD mRNA和蛋白表达水平升高,推测DEHP可能通过影响类固醇激素合成过程中3β-HSD表达水平的变化,从而产生生殖毒性作用。