如何对待自己

人们常常思考或议论的问题是如何对待别人,更深层次的想法才是如何对待自己,而后者是人生中更为中心性的问题。正确对待自己就是管理好自己的生命,尤其是管理好自己的心灵,这样生活才不失为一个大写的＂人＂。     

AKT2通过调控p27表达逆转卵巢癌顺铂耐药

目的：探讨上皮性卵巢癌中蛋白激酶B beta（v-akt murine thymoma viral oncogene homolog2，AKT2）与p27在卵巢癌多细胞球体顺铂耐药中的作用。方法：三维培养获得人卵巢癌多细胞球体（multi—cellular spheroids，MCS）；Western印迹法分析p27及AKT2表达；构建AKT2干扰载体，脂质体法转染A2780细胞后三维培养形成多细胞球体，不同浓度顺铂处理后通过FCM法检测细胞凋亡，MTT法比较细胞对顺铂的敏感性。结果：Western印迹法结果提示，MCS中AKT2及p27的表达高于单层细胞；转染AKT2干扰载体（shRNA—AKT2）的MCS中AKT2、p27表达量较未转染MCS及转染空载体的MCS明显降低。流式细胞仪分解结果表示，不同浓度顺铂作用后，MCS凋亡率明显低于单层细胞；转染shRNA—AKT2的细胞球凋亡率较未转染MCS及转染空载体的MCS升高。MTT法示瞬时转染shRNA—AKT2的细胞球顺铂对细胞抑制率较未转染MCS及转染空载体的MCS升高。结论：干扰AKT2可降低p27的表达，从而逆转卵巢癌对顺铂的化疗耐药。     

二肽基肽酶对前列腺癌细胞系1E8侵袭转移的影响

目的：探讨二肽基肽酶（DDPIV）对前列腺癌细胞IE8侵袭、转移的影响。方法：用亚克隆技术构建DDPⅣ基因反义真核表达质粒，脂质体法将其分别转入高转移潜能的人前列腺癌细胞1E8，并应用脂质体介导的基因转染技术，将重组质粒导入1E8细胞中，应用细胞增殖抑制试验（CCK-8）、蛋白印迹和体外侵袭实验等方法观察了IE8细胞转染前后，细胞生长、DDPⅣ蛋白表这以及细胞体外侵袭能力等指标的变化。结果：成功构建了反义DDPIV真核表达载体；将其转染入1E8细胞36h、48h后，反义DDPⅣ基因对前列腺癌细胞的侵袭和转移有促进作用；DDPⅣ基因表达下调能使1E8细胞的体内外侵袭能力增强。结论：DDPⅣ是前列腺癌的一个抑癌基因，在前列癌的侵袭转移过程中发挥着重要作用，下调DDPⅣ基因表达能明显促进前列腺癌细胞的侵袭和转移能力。提示DDPⅣ可作为前列腺癌抗侵袭治疗的分子靶点。     

C-Kit、PDGFRα的表达与卵巢浆液性癌顺铂耐药的临床研究

目的 分析C-Kit、PDGFRα在卵巢浆液性癌中的表达及其与铂类耐药的关系,以期为顺铂耐药的卵巢癌治疗提供实验室依据.方法 采用免疫组化SP法检测C-Kit、PDGFRα在59例卵巢浆液性癌中的表达,并分析两者的表达与卵巢浆液性癌顺铂耐药的关系.结果 C-Kit、PDGFRα在59例卵巢浆液性癌中的阳性表达率分别为57.63%和66.10%.C-Kit蛋白阳性表达与卵巢浆液性癌化疗铂类耐药有关(P<0.05),而PDGFRα蛋白阳性表达与卵巢浆液性癌化疗铂类耐药无关(P>0.05).C-Kit、PDGFRα的表达与卵巢浆液性癌组织学分级和临床分期有关(P<0.01或P<0.05).结论 C-Kit蛋白阳性表达与卵巢浆液性癌顺铂耐药有关,而PDGFRα表达与卵巢浆液性癌顺铂耐药无关.     

人乳头状瘤病毒18型阳性肿瘤疫苗的构建及体外活性鉴定

目的: 制备人乳头状瘤病毒（human papilloma virus, HPV）18型阳性的肿瘤疫苗，并观察其体外活性。方法:利用昆虫杆状病毒(简称Bac to Bac)表达系统，将HPV18L1基因重组入穿梭质粒pFastBacHtb，构建HPV18 L1Htb，通过转座反应,将目的基因片段重组入杆状病毒基因     

smad4 shRNA 真核表达质粒的构建及鉴定

 目的 针对smad4基因的不同部位,构建不同smad4shRNA表达质粒载体,在转录后水平抑制smad4的表达,对其克隆进行鉴定并挑选出抑制效率最高的克隆。方法 用DNA重组技术将针对人smad4基因不同部位所设计的3对shRNA序列克隆到真核表达质粒pGenesil-1中,构建smad4shRNA表达载体pGenesil-smad4-shRNA1、2、3。脂质体介导转染人宫颈癌细胞株HeLa,经G418筛选抑制smad4表达的稳定细胞克隆。结果 3个smad4shRNA表达载体pGenesil-smad4-shRNA1、2、3经限制性酶切及序列分析证明基因插入正确。RT-PCR、Westernblotting均证实：3种shRNA重组质粒中pGenesil-smad4-shRNA2可明显降低细胞内smad4mRNA丰度及smad4蛋白表达。结论 成功构建了smad4shRNA表达载体pGenesil-smad4-shRNA1、2、3,并筛选出特异而高效地阻断smad4表达的克隆。此实验结果为进一步研究smad4蛋白分子的生物学功能及应用奠定了基础。     

短发卡状RNA抑制AKT2基因表达增强卵巢癌细胞对紫杉醇敏感性的研究

目的：构建AKT2基因特异性短发卡状RNA（shRNA）真核表达载体，观察RNA干扰（RNAi）技术，对人卵巢癌A2780和SKOV3细胞中AKT2蛋白激酶表达的抑制作用，并探讨其促进细胞凋亡的机制。方法：运用基因工程技术，设计合成针对AKT2mRNA的特异性shRNA，构建真核表达载体pAKT2-shRNA。将pAKT2-shRNA经脂质体（Lipofectamine^TM 2000）包裹转染人卵巢癌A2780和SKOV3细胞，荧光显微镜观察细胞内DsRed红色荧光蛋白的表达，计算转染效率，半定量RT—PCR（Semi-quantitative RT-PCR）、蛋白质免疫印迹（Western blot）检测AKT2的表达及干扰效率，流式细胞学检测法（FACS）检测细胞凋亡率，比较抑制AKT2基因前后卵巢癌细胞抵抗凋亡能力。结果：成功构建了PAKT2-ShRNA载体。A2780和SKOV3细胞转染pAKT2-shRNA后，荧光显微镜下观察转染效率约40％；Semi-quantitative RT-PCR和Western blot检测结果示，转染后AKT2 mRNA和蛋白表达均显著降低。FACS检测结果显示，转染pAKT2-shRNA后，紫杉醇25nmol／L处理细胞12h，与空白对照组和阴性对照组相比，细胞凋亡率显著增加，P〈0．05。结论：构建的pAKT2-shRNA真核表达载体能有效抑制AKT2基因表达；运用RNAi技术，降低卵巢癌细胞中AKT2基因表达水平，能增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，促进肿瘤细胞凋亡。     

宫颈癌化疗后低钠血症致神经系统症状1例

1病例介绍患者,女,46岁。因“宫颈非角化型鳞状细胞癌b期”于2006年10月19~22日在我院行TP方案辅助化疗(多西他塞 顺铂),化疗期间恶心呕吐反应较重,基本不能进食,乏力,予以镇吐、护胃、补钾及营养支持对症治疗,停止化疗第一天(2006年10月23日)18:00患者出现神志淡漠,反应迟钝,2     

GRP78在三种不同乳腺癌细胞的表达及其意义

目的：探讨葡萄糖调节蛋白78（GRP78）在高低转移对的乳腺癌细胞的表达及其意义。方法：分别采用半定量RT-PCR，蛋白免疫印迹法和细胞免疫荧光方法检测GRP78在三种不同乳腺癌细胞株（MDA-MB-231、435S和MCF-7）的mRNA蛋白表达及其亚细胞定位情况，结果：GRP78mRNA和蛋白在（MDA-MB-231细胞的表达最高，其次为（MDA-MB-435S，在MCF-7的表达最低；共聚焦显微镜下观察到GRP78蛋白主要定位在细胞浆，在细胞膜以及细胞核内也有少量的表达，，结论：GRit／8是乳腺癌的一个促癌基因，在乳腺癌的发生、发展过程中发挥着重要作用，其可作为抗乳腺腺癌治疗的一个新的分子靶点。     

RNA干扰技术沉默Smad4基因表达对ECV304细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨利用RNA干扰技术下调Smad4基因表达对人脐静脉内皮细胞增殖和迁移能力的影响，初步了解Smad4在血管生成中的作用。方法：设计并合成靶向人Smad4基因的小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）片段siRNA1和siRNA2，脂质体介导转染入人脐静脉内皮细胞株ECV304。应用实时定量RT-PCR和Western印迹法检测转染前后Smad4基因表达水平；应用细胞周期分析和羧乙基锗倍半氧化物（6-carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester，CFSE）－流式细胞仪检测ECV304细胞转染前后细胞增殖能力的变化；通过单层细胞划痕实验观察细胞转染前后迁移能力的变化。结果：从2条siRNA中成功筛选出1条siRNA，于RNA和蛋白水平可明显下调Smad4基因的表达；ECV304细胞转染Smad4的siRNA后，细胞的增殖和迂移能力明显增强。结论：利用RNA干扰技术能够筛选出高效的特异阻断Smad4基因表达的siRNA；Smad4基因表达下调能够明显促进血管内皮细胞的增殖和迁移。