β-葡萄糖醛酸酶前药对βG基因转染人胆管癌细胞的作用

目的　探讨βG基因/β-葡萄糖醛酸苷酶(β-G)前体药系统对人胆管癌细胞株QBC939的抑制作用。方法　构建真核表达的逆转录病毒载体pDOR-βG,利用阳离子脂质体将其转入人胆管癌细胞株QBC939,检测其表达及β-G前体药对转基因细胞的增殖阻断作用。结果　经G418筛选后的阳性细胞克隆,为高表达βG的胆管癌模型。免疫组织化学、免疫荧光、原位杂交等证实了pDOR-βG在转基因细胞中的表达;四唑蓝（MTT）比色试验测定β-G前体药对QBC939-pDOR-βG细胞有显著的抑制增殖作用,β-G前体药浓度为0.292g/L时,其抑制率为67.6%。QBC939-βG组与对照组比较差异有非常显著性（P＜0.01）。结论　βG基因/β-G前体药系统是一种新的自杀基因系统,可作为胆道肿瘤基因治疗的一种新方法。     

188Re-β射线诱导肝癌细胞凋亡与细胞周期阻断

目的　探讨放射性核素1 88Re β射线内照射对人肝癌细胞HCC的细胞周期阻断及诱导凋亡的作用。方法　通过MTT实验、形态学观察、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术对核素诱导的HCC细胞进行了检测和观察。结果　1 88Re导致的HCC细胞死亡具有典型的细胞凋亡形态学和生化特征。流式细胞术定量显示各期细胞数发生改变 ,且凋亡率和剂量呈依赖性。结论　1 88Re β射线低剂量和高剂量对HCC细胞周期的影响不同 ,低剂量主要使G0 G1 期阻滞 ,较高剂量则导致G1 阻滞减轻 ,S期和G2 M期细胞数增多。     

188Re-β射线诱导肝癌细胞凋亡与细胞周期阻断

目的：探讨放射性素^188Re-β射线内照射对人肝癌细胞HCC的细胞周期阻断及诱导凋亡的作用,方法：通过MTT实验,形态学观察,琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术对核素诱导的HCC细胞进行了检测和观察,结果：^188Re导致的HCC细胞死亡具有典型的细胞凋亡形态学和生化特征,流式细胞术定量显示各期细胞数发生改变,且凋亡率和剂量呈依赖性,结论：^188Re-β射线低剂量和高剂量对HCC细胞周期的影响不同,低剂量主要使C0／G1期阻滞,较高剂量则导致G1阻滞减轻,S期和G2／M期细胞数增多。     

高效表达肝癌相关抗原HAb18G的CHO细胞株的建立

目的 获得高效表达肝癌相关抗原HAb18G的CHO细胞株。方法 构建含有肝癌相关抗原HAb18G基因的真核表达载体并经限制性酶切及部分序列分析证明插入是否正确。用阳离子脂质体介导转染CHO细胞经G418筛选,稳定表达,间接免疫荧光染色证实蛋白表达情况。用有限稀释法将筛选的细胞进行单克隆化,通过流式细胞仪筛选高效表达株。结果 成功构建了真核表达载体pcDNA-3/HAb18G并经限制性酶切及部分序列分析证明基因插入正确。间接免疫荧光染色证实：HAb18G高效表达于转染细胞的胞膜上。流式细胞仪筛选获得了1株高效表达的CHO细胞。结论 实验结果为HAb18G蛋白分子的生物学功能研究奠定了基础。     

肝癌相关抗原基因的筛选和阳性克隆的序列分析

克隆肿瘤相关抗原基因,从分子水平上研究其结构与功能,对于深入了解肿瘤的发生机制很有帮助。本研究利用自制的肝癌特异性单克隆抗体（ｍＡｂ） Ｆ１１,筛选肝癌细胞ｃＤＮＡ表达文库,获得１个阳性克隆,并对其进行了序列测定及同源性比较分析。１材料和方法１． １材料抗肝癌ｍＡｂ Ｆ１１［１］为本室制备、纯化。肝癌细胞ｃＤＮＡ表达文库（载体为 λｇｔ１１）由本室构建。测序用试剂ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ ＢｉｇＤｙｅＴＭ Ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ为ＰＥ公司产品。测序仪为ＡＢＩ ＰＲＩＳＭＴＭ ３３７ＸＬ型。１．２方法克隆的筛选按…     

βig-h3在肝癌细胞系中差异表达的筛选和鉴定

目的:筛选并鉴定TGFβ诱导分子βig-h3基因在肝癌细胞系T7721和7721中的差异表达. 方法:培养肝癌细胞系T7721(转染并稳定高表达HAb18G/CD147), 7721(未转染HAb18G/CD147),提取总RNA,荧光交换标记(Cy5和Cy3) 筛选信号转导相关基因芯片;RT-PCR检测基因芯片初步筛选出的差异分子(βig-h3)在肝癌细胞T7721和7721中的差异表达. 结果:①经基因芯片差异分析,在高表达HAb18G/CD147的T7721细胞中TGFβ诱导分子βig-h3的mRNA表达明显上调,为7721细胞的4.4倍;而TGFβ1的mRNA表达无明显差别. ② RT-PCR显示βig-h3mRNA在T7721中的表达水平明显高于7721(t=14.42, P<0.01). 结论:经基因芯片筛选分析,发现HAb18G/CD147分子与TGFβ诱导分子βig-h3的表达成正相关, HAb18G/CD147的高表达诱导了βig-h3的表达增高,为进一步探讨在细胞内信号转导通路中HAb18G/CD147分子促进肝癌细胞侵袭和转移的作用机制奠定了基础.     

双特异性单克隆抗体介导的单核—巨噬细胞抗肝癌作用

研究双特异性单克隆抗体介导的单核－巨噬细胞抗肝癌作用。方法采用化学交联法，用异型化学交联剂Ｎ－琥珀酰亚氨基－３－，将具有高亲和性的抗肝癌单抗ＨＡｂ１８Ｆ２与抗单核－巨噬细胞的单抗ＭＡｂ７Ｆ２联结双特异性单抗ＨＡｂ１８Ｆ２－Ｍａｂ７Ｆ２，经ＦＰＬＣ Ｓｅｐｈａｃｒｙ１ Ｓ－２００纯化。     

~(99m)Tc标记抗人肝癌单抗Fab片段修饰物在荷人肝癌裸鼠模型中的放射免疫显像

研究抗人肝细胞癌单克隆抗体Ｆａｂ片段修饰物的９９ｍＴｃ标记方法。用２亚氨基噻吩盐酸盐（ＩＴ）修饰ＨＡｂ１８Ｆａｂ片段。用９９ｍＴｃＧＨ转络合法标记ＩＴＦａｂ，测定标记物的放化纯度及生物活性，进行荷人肝癌裸鼠模型的放射免疫显像。结果：纸层析法测得标记率为５０％～８０％，体外细胞结合法测定免疫活性为３０％～４０％。荷人肝癌裸鼠模型尾静脉注入９９ｍＴｃＩＴＦａｂ后４～８小时，肿瘤区放射性有浓聚，１２～２２小时浓聚最多，Ｔ／ＮＴ值为５１８～７４８。因此，９９ｍＴｃＩＴＦａｂ可特异性浓聚于荷人肝癌裸鼠模型中，可能成为肝癌放射免疫显像的有效显像剂。     

HAb18G/CD147拮抗肽对肝癌细胞表面抗原HAb18G的亲和性

目的：研究HAb18G／CDl47拮抗肽对肝癌细胞上HAb18G／CDl47抗原的亲和性。方法：利用流式细胞仪测定人肝癌细胞(HHCC，SMMC7721)上HAbl8G抗原的表达。分别在HAb18G／CDl47拮抗肽AP—1、AP—2和AP-6的N端标记生物素，用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜测定AP—1、AP—2和AP-6与HHCC或SMMC7721的结合能力。结果：HAbl8G抗原在HHCC和SMMC7721细胞上均呈高表达。AP-6对HHCC的亲和力最强，AP—2次之，AP—1最弱。AP-6对与SMMC7721的亲和力也最强，AP—1次之，AP—2末检测到。结论：HAb18G／CDl47拮抗肽对肝癌细胞表面抗原HAb18G／CDl47具有较高的亲和性。