利用GSP逆转录结合巢式PCR技术鉴定剪接变体的新方法及其在小鼠TrkC基因变体发现中的应用

目的利用基因特异性iI物（genespecificprimer,GSP）逆转录结合巢式PCR（nPCR）技术,建立鉴定剪接变体的新方法。方法以小鼠TrkC基因为例,参考其已知变体1和变体2的序列分别设计GSP和nPCR引物,以逆转录产物为模板进行nPCR反应,扩增产物采用1．5％琼脂糖凝胶分离并回收具有递减趋势的DNA片段,利用T／A克隆技术亚克隆到载体pMDl9一T进行直接测序,并与小鼠RefSeq数据库进行比对。结果利用GSP逆转录结合nPCR技术不仅可鉴定出mc基因的已知剪接变体,而且还能够筛选到TrkC基因的新剪接变体并命名为变体3,与变体1相比属于盒式外显子剪接模式,缺失了变体1的520～2188位共1669bp。结论利用GSP结合nPCR技术建立了一种鉴定剪接变体的方法,为新剪接变体的挖掘与功能研究以及理解异常剪接相关疾病的机制研究提供了重要参考。     

局灶性脑缺血再灌注损伤后大鼠血脑屏障通透性的研究

【目的】探讨局灶性缺血再灌注损伤后早期大鼠血脑屏障(blood brain barrier,BBB)功能障碍的变化和水肿形成的规律。【方法】应用伊文思蓝法(Evans-Blue,EB)观察再灌注后不同时间点BBB通透性变化,采用干湿重法计算脑含水量评估脑水肿、TTC法评估脑梗死面积。【结果】脑缺血再灌注3 h时,大鼠BBB通透性明显增加(P<0.05),24 h最高(P<0.01);缺血再灌注各组缺血侧大脑半球EB含量与对侧相比差异有显著性(P<0.05)。与假手术组相比EB含量差异均有显著性(P<0.05)。脑含水量变化与BBB通透性改变呈平行关系;但缺血再灌注后各时间点梗死面积差异无显著性。【结论】缺血再灌注损伤早期,大鼠BBB完整性受到破坏,脑水肿加重,因此应将BBB的结构和功能稳定性作为缺血再灌注损伤早期治疗的关注重点。