VEGF165和VEGF121在MC3T3-E1细胞中的表达及生物学功能

目的：构建一个能在MC3T3-E1细胞中稳定表达，并具有生物学活性的VEGF165和VEGF121基因表达载体。方法：采用RT—PCR技术从HL-60细胞中扩增人VEGF165和VEGF121基因，将获得的基因定向插入pcDNA3．1（＋）真核表达质粒中，测序正确后用脂质体将表达质粒转染入MC3T3-E1细胞。细胞经G418加压有限稀释筛选，采用ELISA法、Western blot法及免疫荧光法检测VEGF蛋白表达，并用MTT法检测表达的蛋白对血管内皮细胞株（HUECV304）的增殖活性影响。结果：通过基因测序表明获得的yEGF165和VEGF121与GeneBank登录的序列一致，构建的质粒分别为VEGF165／pcDNA3．1（＋）质粒和VEGF121／pcDNA3．1（＋）质粒，ELISA及Western blot检测结果均表明VEGF165和VEGF121基因转染MC3T3-E1后能在细胞中稳定表达，表达产物能明显促进HUECV304细胞生长。结论：基因转染的MC3T3-E1细胞能稳定、高效表达具有生物学活性的VEGF165和VEGF121重组蛋白。     

白细胞介素18重组腺病毒对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

目的 研究白细胞介素18重组腺病毒(AdmsIL-18)对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响,并对其机理作一探讨.方法重组腺病毒腹腔注射BALB/C小鼠,每周注射1次,共 2次.2周后制备腹腔巨噬细胞,经LPS刺激,采用ELISA法检测培养上清mIL-18、mIL-1β、mTNFα的水平;酶还原法检测NO的含量;LDH释放法检测巨噬细胞的杀伤活性. 结果AdmsIL-18注射后,小鼠腹腔巨噬细胞高效表达mIL-18,同时巨噬细胞分泌 mIL-1β、mTNFα、NO水平明显增加,并增强巨噬细胞的杀伤活性,与其它对照组比较均 P<0.01.结论小鼠腹腔注射AdmsIL-18,能显著增加巨噬细胞表达mIL -18、mIL-1β、mTNFα、NO,增强巨噬细胞的杀伤活性.     

鳖甲抗肝纤维化有效部位的初步筛选研究

目的:筛选鳖甲抗肝纤维化的有效部位。方法:传代培养的LX-1与鳖甲提取物的Bj1～Bj8共8个部位共同培养72h后,3H-TdR法检测对TGF-β1刺激的LX-1细胞增殖的影响,再将传代培养的HSC-T6与鳖甲的Bj61～Bj68(为Bj6的进一步的分离部位)共同培养72 h后,采用MTT比色法测定各浓度组HSC-T6的增殖情况。结果:3H-TdR法检测结果表明Bj4、Bj6、Bj7部位抑制LX-1细胞增殖,MTT比色法结果表明Bj66和Bj67部位有较强的抑制HSC-T6细胞增殖的作用。结论:Bj66和Bj67为鳖甲的有效部位。     

免疫刺激DNA序列对粉尘螨诱导的Th1和Th2细胞因子的调节作用

目的　研究免疫刺激DNA序列 (ISS)对螨性过敏性哮喘患者外周血单个核细胞 (PBMC)经粉尘螨变应原 (Df)诱导的Th1和Th2细胞因子的调节效应。方法　分离螨性过敏性哮喘患者及正常人PBMC ,加入ISS和Df刺激培养 ;以酶联免疫吸附试验检测培养上清中IFN γ、IL 12及IL 5含量 ;用荧光免疫酶标法检测患者血清中Df特异性IgE ,并作统计相关性分析。 结果　无论正常人还是患者PBMC加入ISS和Df刺激培养后 ,其上清中IL 12、IFN γ的含量较Df和对照序列刺激组明显增高 ,而IL 5却明显降低。正常对照组PBMC经ISS及Df刺激后产生的IFN γ、IL 12水平明显高于患者组 ,而IL 5则相反。患者组PBMC经ISS及Df刺激后产生的IL 12与IFN γ呈明显正相关。结论　ISS对正常人及螨性变态反应患者PBMC具有显著增强尘螨变应原诱导的Th1细胞因子表达 ,并抑制Th2细胞因子产生的作用 ,在尘螨变态反应疾病的治疗中具有潜在的临床价值。     

RON及其变异体在肺癌中的表达

目的研究RON及其变异体在肺腺癌中的表达及意义。方法应用免疫组化方法检测106例肺腺癌及35例肺鳞癌中RON的表达情况,并结合临床资料进行统计学分析;通过Western-Blot技术检测31例新鲜肺腺癌组织及9例肺鳞癌组织中RON及其变异体的表达情况,并对RON在不同组织学分级和不同组织学类型中的表达进行统计学分析。结果RON在肺腺癌及鳞癌中都有不同程度的表达,两组比较RON的表达差异具有统计学意义（P〈0.05）;不同分化程度的肺腺癌比较,RON的表达也有差异,低分化的肺腺癌明显高于中分化的腺癌和高分化的腺癌（P〈0.05）;Western-Blot结果显示在肺腺癌和肺鳞癌中均有RON表达;在肺腺癌中观察到RON的变异体,而肺鳞癌中则没有。结论肺癌组织中有RON的过表达,并且肺腺癌中RON的表达明显高于鳞癌（P〈0.05）。肺腺癌中RON的表达与肿瘤分级相关,并存在变异体,而鳞癌则无变异体的表达。     

γ-干扰素基因修饰肝细胞对感染日本血吸虫小鼠TGF-β_1及其受体的影响

目的： 探讨γ－干扰素 （ＩＦＮ－γ） 基因治疗对感染日本血吸虫小鼠转化生长因子－β１ （ＴＧＦ－β１） 及其受体的影响与抗肝纤维化作用的关系。方法： 将小鼠ＩＦＮ－γ基因重组腺病毒载体转染的肝细胞经脾移植到感染日本血吸虫尾蚴１６ ｗｋ 的小鼠, 采用ＥＬＩＳＡ、免疫组化和斑点杂交方法分析小鼠血清ＩＦＮ－γ与ＴＧＦ－β１ 表达的关系, 小鼠肝内ＩＦＮ－γ、ＴＧＦ－β１、ＴＧＦ－βＲＩＩ与Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的关系。结果： ＩＦＮ－γ基因修饰的肝细胞经脾移植后能有效地表达, 显著地降低ＴＧＦ－β１ 、ＴＧＦ－βＲＩＩ的表达和Ⅰ、Ⅲ型胶原的含量。结论： ＩＦＮ－γ基因治疗能有效地发挥抗血吸虫病肝纤维化作用, 可能与降低ＴＧＦ－β１及其受体有关。     

尖锐湿疣患者可溶性肿瘤坏死因子受体和白介素-8水平的检测

近年来研究发现可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFR)在机体的免疫调节和与TNF相关疾病的病理过程中发挥着重要作用^[1],而白介素8(IL-8)在炎症和免疫反应中具有重要的作用.为了解sTNFR和IL8在尖锐湿疣(CA)中的作用,我们对CA患者血清中sTNFR和IL8水平进行了检测.     

小白菊内酯对结肠癌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的观察小白菊内酯（PN）对结肠癌HT-29细胞凋亡的影响并分析其可能机制。方法不同浓度PN作用于结肠癌HT-29细胞,以流式细胞仪（FCM）检测细胞凋亡;Western Blot法检测核转录因子（NF）-B亚单位pso、环氧化酶（cox-2）蛋白表达的改变;ELISA法测定前列腺素E2（PGE2）浓度。结果PN能诱导结肠癌细胞的凋亡,且随PN浓度的增加,结肠癌HT-29细胞的凋亡率增加;而NF-κB亚单位p50、COX-2蛋白表达减少,同时PGE2浓度降低。结论PN可诱导结肠癌HT-29细胞凋亡,其机制可能与其能下调NF-κB、COX-2蛋白表达并减少PGE2生成有关。     

小白菊内酯对结肠癌细胞凋亡的影响及其机制研究

Objective To investigate the effect of parthenolide (PN) on human colon cancer cells in vitro and its mechanism. Methods Human colon cancer cell line HT-29 was cultured and treated with PN at the concentra-tions of 10 ,50 ,100 ,200,500 ,1 000 μmol/L for 48 hours. Then the apoptosis was detected by flow cytometry. The ex-pression of NF-Κb p50 and COX-2 proteins were analyzed by Western blot and the concentration of PGE2 was meas-ured with ELISA kits. Results PN significantly induced cell apoptosis after 48 h in a dose-dependent manner. The expression of NF-Κb p50 and COX-2 proteins were down-regulated by the PN, and the concentrations of PGE2 were al-so declined. Conclusion PN can induce apoptosis of the human colon cancer cells. And the process may be carried out through the way of "NF-Κb→COX-2→PGE2".     

麻风治愈者血清中SIL—2R的研究

对浙江兰溪地区58例麻风治愈者及其27名直系亲属血清中的可溶性白细胞介素—2受体(SIL—2R)水平进行了研究,并以当地正常人作对照。发现PB治愈者的SIL—2R与对照者无差异(P>0.005),MB治愈者的则明显降低(P<0.002),以LL治愈者最显著(P<0.005),且与病程和治愈时间无关,提示MB病人治愈后仍有细胞因子异常和T细胞激活方面的障碍。麻风病人直系亲属的血清中SIL—2R明显高于MB治愈者(P<0.001),与PB治愈者和对照者无差异(P>0.05)。