河北省猪场伪狂犬病病毒感染情况调查及gE基因遗传变异分析

采用ELISA检测方法对2018年1月至2019年5月从河北省11个地市195个不同规模猪场采集的10479份血清进行gE抗体的检测,采用PCR方法对流产胎儿进行猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)的抗原检测,并将部分阳性样本进行gE全基因的扩增和遗传变异分析。血清学检测结果显示,所检测的河北省11个地市均存在不同程度的PRV感染,血清样本gE抗体平均阳性率为50.05%;检测的195个猪场中,161个gE抗体为阳性,场群阳性率为82.56%,且存栏50~300头母猪的规模化猪场阳性率最高;不同阶段的猪群中,种猪群空怀母猪的阳性率最高,为73.75%。病原检测结果显示,204个流产胎儿中有54个为PRV阳性,阳性率为26.47%;对扩增的8株PRV进行遗传进化分析,结果显示河北省流行的毒株与2011年后的流行毒株亲缘关系较近,且均在第48位和第492位各存在1个天冬氨酸的插入,为变异毒株。以上结果提示,河北省猪场PRV的感染较为普遍。     

牛病毒性腹泻/黏膜病病毒河北分离株的生物学特性

【目的】了解牛病毒性腹泻病毒河北分离株HB株的特性,阐明牛病毒性腹泻/黏膜病致病机理,更好的控制BVDV感染、流行提供理论依据特进行此项试验;【方法】用理化学及生物学方法对BVDV河北分离毒株HB的特性进行检测,与BVDV准毒株OregonC24V株进行比较,分析了其理化性及生物学特性。电镜负染检查可见直径为40￣60nm有突起的圆形或近圆形的病毒颗粒,病毒在蔗糖中的浮密度为1.13￣1.14g/cm3。与牛病毒性腹泻-粘膜病病毒颗粒相似。毒力测定TCID50为10-4.5。理化学研究表明,该病毒对氯仿、乙醚、胰酶敏感;不耐酸、对碱具有较强的耐受性。牛病毒性腹泻/黏膜病病毒对56℃30min较敏感,56℃70min可使其完全灭活。血凝试验表明,该病毒对鸡、兔、猪和绵羊的红细胞均无血凝性;5-碘脱氧尿核苷(5,-IUDR)不能抑制病毒的增殖,核酸分型试验表明该病毒株基因组为RNA;病毒纯化后经SDS—PAGE电泳出现了5条主要结构蛋白带,与BVDV国际标准毒株OregonC24V株结果一致;【结论】河北分离株HB株为牛病毒性腹泻病毒。     

牛病毒性腹泻病毒E2基因在毕赤酵母GS115中的表达与鉴定

将牛病毒性腹泻病毒(BVDV)河北分离株HB-bd毒株E2基因去除跨膜区获得sE2基因,将sE2基因克隆入巴斯德毕赤酵母(P.Pastoris)分泌型表达载体pPIC9K中,筛选培养后提取阳性重组质粒,经酶切和PCR鉴定,命名为pPIC9K-sE2.重组质粒pPIC9K-sE2经Sal Ⅰ酶切线性化,电穿孔导入P.Pastoris GS115基因进行整合,使外源基因sE2稳定地整合到P.Pastoris染色体中,G418筛选得到阳性高拷贝转化子GS115-pPIC9K-sE2.经甲醇诱导表达后,sE2融合蛋白获得了表达,表达产物经SDS-PAGE、Western-blot和Dot-ELISA分析,确定其表达的sE2融合蛋白相对分子质量大小为37 000,且具有天然蛋白的抗原特异性.免疫原性研究证明P.Pastoris表达的sE2蛋白能刺激动物产生特异抗体.     

表达CSFV E2线性表位的PCV2病毒样颗粒的制备及免疫原性研究

为制备携带猪瘟病毒(CSFV) E2蛋白的猪圆环病毒2型(PCV2)病毒样颗粒(VLP),并在小鼠体内评价其免疫原性,本研究采用PCR扩增PCV2 Cap基因,利用重叠延伸PCR将PCV2 Cap蛋白的诱饵表位(aa169～aa180)替换成编码两个连续的CSFV E2蛋白线性表位(aa829～aa837)的融合基因(PCV2-Cap^169～180-E2^829～837)经测序鉴定正确后克隆至载体pET-32a(+)中,构建重组质粒p-Cap-E2并采用PCR方法鉴定正确后转化大肠杆菌BL21 (DE3),经IPTG诱导表达重组蛋白(PCV2-Cap-E2),采用改良的镍亲和层析法纯化重组蛋白,并利用SDS-PAGE与western blot对重组蛋白的表达形式及反应原性鉴定;利用透射电镜观察纯化的重组蛋白能否形成VLP;利用本研究制备的VLP、PCV2及CSFV商品化疫苗分别免疫小鼠,采用ELISA方法检测免疫后不同时间小鼠体内的抗体水平及细胞因子含量。SDS-PAGE结果显示,在49 ku处出现目的条带,且重组蛋白主要以可溶性形式表达,纯化...     

规模化猪场生物安全措施调查与分析

近年来，我国生猪养殖模式发生了巨大变化，由农户散养模式正逐步向规模化养殖模式转变，养殖模式的转变给养殖场带来经济利益的同时，也带来了巨大的生物安全隐患。     

猪场常见消毒药对非洲猪瘟病毒的消毒效果

为做好非洲猪瘟（ASF）防控，保障猪场生物安全措施的有效实施，通过查阅文献分析了多种猪场常见消毒药（火碱、酸、过硫酸氢钾、卤素类和醛类）的特点及使用方法，综述了其对非洲猪瘟病毒（ASFV）的杀灭效果。结果显示：在22℃时，1.0%和0.5%的火碱溶液可将ASFV杀灭；800倍稀释的二氯异氰尿酸钠溶液可在0.5 h杀灭ASFV;1.0%的柠檬酸能够将ASFV减少4个对数单位以上；3.0%的醋酸以及0.1%、0.5%和1.0%的戊二醛溶液均对ASFV有杀灭效果。综上，推荐火碱（0.5%）或二氯异氰尿酸钠（稀释度1:800）用于环境消毒，戊二醛（0.1%～1.0%）用于带猪消毒。本文通过综述猪场常用消毒药对ASFV的消杀效果，为猪场消毒药的选择和使用提供指导，以助于猪场的ASF防控。     

枣粉饲料的营养价值及其在动物生产中的应用北大核心

红枣口味甘甜,营养价值丰富,可作为非常规饲料在动物生产中应用。但是红枣鲜果的含水量较高,需要进行一定处理才可作为饲粮使用。制作成枣粉饲料是提高红枣利用效果的方式之一。文章主要综述了我国红枣资源现状、红枣的营养成分、枣粉饲料的种类及其在动物生产中的应用和问题,为枣粉作为非常规饲料在动物生产中的应用提供参考。     

携带BCoV抗原表位的乙型肝炎病毒核心抗原病毒样颗粒的制备及免疫效果评价

为了制备可用于牛冠状病毒(BCoV)亚单位疫苗的含BCoV S蛋白抗原表位的病毒样颗粒(VLP)，本研究将BCoV S1和S2蛋白中含B细胞表位的aa351～aa403 (159 bp)和aa771～aa784 (42 bp)对应的密码子按大肠杆菌偏好性原则优化后插入乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)主要免疫显性区域(MIR)，合成该重组基因后克隆至pET-32a(+)，经酶切鉴定显示正确构建了重组质粒pET-32a(+)-HBcAg-BCoV S1+S2。将该重组质粒分别转化E.coli BL21(DE3)和伴侣感受态细胞BL21(DE3)(含pG-KJE8分子伴侣质粒)，经诱导表达后采用镍柱亲和层析法纯化两种不同表达形式的重组蛋白，SDS-PAGE检测重组蛋白的表达及纯化效果，结果显示两种表达系统均正确表达了重组蛋白，分别命名为VLP-A、VLP-B，前者为包涵体表达，后者为可溶性表达。纯化后浓度分别为0.9 mg/mL、1.4 mg/m L。利用透射电镜观察纯化后的两种重组蛋白是否形成VLP，结果显示二者均形成VLP，且可溶性表达的重组蛋白形成的VLP产量略高。将两种VLP乳化后...     

一种防控奶牛产后酮病的中草药饲料添加剂的研究应用

为探讨发酵中草药饲料添加剂在防控奶牛产后酮病方面的应用效果及适宜添加剂量，采用完全随机区组设计，依据胎次、体况评分、上一泌乳周期单产相近的原则，选20头新产牛随机分为4组，每组5头牛。I组为对照组，II组、Ⅲ组、IV组为试验组。对照组饲喂常规日粮，试验组于产后4 ~ 30天在常规日粮中每天每头牛按低、中、高三个水平（80、100、120 g）添加发酵中草药饲料添加剂。每头牛早上饲喂的时候人工饲喂添加剂，保证每头牛每天按规定添加量完全饲喂。每头牛试验期27 d，每9 d为一个采样周期。其他饲养管理按牛场原有程序常规进行。试验结果显示：由于奶牛个体差异较大，虽然添加不同水平对产奶量影响不显著，但Ⅲ组产奶量提高水平最大，比I组提高51.34%。乳指标中Ⅲ组到第30天体细胞数显著低于其他组（P < 0.05），比I组降低56.60%，其他乳指标差异均不显著。血清葡萄糖、β-羟丁酸、游离脂肪酸水平随着时间的推移基本上各组均呈逐渐增加的趋势，β-羟丁酸到第30天Ⅱ组和Ⅲ组显著低于Ⅰ组（P < 0.05），均降低20.65%，与Ⅳ组差异不显著（P > 0.05），其他指标差异不显著。Ⅲ组比I组酮病发病率、产后首次配种时间、妊娠配种次数分别降低100%、3.84%、8.57%，首次情期受胎率提高60%，乳房炎降低100%。综合考虑，该发酵中草药饲料添加剂对奶牛产奶量、乳品质、血液葡萄糖、β-羟丁酸、游离脂肪酸、产后酮病、繁殖性能及其他疾病死淘情况均具有改善作用，整体Ⅲ组表现较优，建议该发酵中草药饲料添加剂在新产牛中的推荐用量为100 g/（头·d）。 [关键词] 奶牛|产后酮病|中草药|饲料添加剂     

基于 ASFV EP402R 编码蛋白 CD2v 的生物信息学分析

为深入了解非洲猪瘟病毒（ASFV）的EP402R编码蛋白CD2v结构与功能的关系和病毒-宿主作用机制，本研究通过在线工具对Pig/HLJ/2018中国分离株CD2v蛋白进行了遗传进化和生物信息学分析。结果显示：Pig/HLJ/2018株与格鲁吉亚Georgia 2007、Georgia 2008以及其他中国毒株处于同一分支，基因型同为Ⅱ型；同一基因型CD2v蛋白氨基酸序列一致性高达100%，不同基因型间蛋白氨基酸序列表现出差异，氨基酸一致性在76.8%～81.7%之间；该CD2v蛋白表达的蛋白大小为41.008 89 kD；蛋白结构主要以无规卷曲为主；存在信号肽和跨膜区；存在4个优势B细胞表位和5个T细胞表位。结果表明：当前中国流行株为基因Ⅱ型；CD2v蛋白在ASFV入侵机体、免疫逃逸等过程中扮演重要角色，为ASFV的深入研究和ASF的防治奠定了基础。