排序方式: 共有101条查询结果,搜索用时 875 毫秒
81.
蛙虹彩病毒巢式 PCR检测方法的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
蛙虹彩病毒属(Ranavirus)病毒宿主广泛,可以感染爬行类、鱼类和两栖类,大部分病毒对宿主都有较强的致病性和致死性.为建立一种快速高效的蛙虹彩病毒的检测方法,本研究利用中华鳖虹彩病毒(soft-shelled Turtle Iridovirus,STIV)核衣壳蛋白(Major Capsid Protein,MCP)基因保守区设计内引物和外引物,建立了特异性检测流行性造血器官坏死病毒(Epizootic Haematopoietic Necrosis Virus,EHNV)、中华鳖虹彩病毒和虎纹蛙虹彩病毒(Tiger Frog Virus,TFV)的巢式PCR(巢式PCR)检测方法,并制备了重组质粒pGem-T-S作为阳性对照标准品.检测限试验结果显示,该方法可以检测102拷贝的病毒粒子.而且与传染性造血器官坏死病毒、鲤春病毒、病毒性出血性败血症病毒、斑点叉尾(鱼回)病毒、传染性胰脏坏死病毒、真鲷虹彩病毒、牙鲆弹状病毒以及锦鲤疱疹病毒等其他非蛙虹彩病毒无交叉反应.该体系具有简便、快速、敏感、特异性高、低成本等特点,为诊断与预防蛙虹彩病毒提供了一项重要的技术手段. 相似文献
82.
基于E184L基因的非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
非洲猪瘟(ASF)是由非洲猪瘟病毒(ASFV)感染引起的一种高度接触性传染病。由于ASFV的感染机制极为复杂,基因型多,至今尚无有效疫苗用于防控,防止该病暴发主要依赖于早期快速诊断和控制。为建立一种高效快速、特异的ASFV检测方法,根据ASFV的E184L基因序列,设计了TaqMan荧光定量PCR引物及探针,建立了检测ASFV的TaqMan荧光定量PCR方法。结果表明,该方法设计的引物具有高度特异性,以构建的重组质粒为标准品建立的TaqMan荧光定量PCR方法的标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数为0.992,对ASFV核酸最低检测限为1.51拷贝,且与伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型等不存在交叉反应。建立的基于ASFV E184L基因实时荧光定量PCR检测方法能够快速、准确、特异地对ASFV核酸进行定量分析,丰富了ASFV的检测方法。 相似文献
83.
A型塞内卡病毒VP2蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备 总被引:1,自引:1,他引:0
本研究旨在表达A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)的衣壳蛋白VP2,并制备其多克隆抗体。以SVA GD01/2017分离株RNA为模板,RT-PCR扩增VP2基因序列,并克隆至原核表达载体pET-30a(+)中构建重组质粒pET-30a-SVA-VP2。经测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达。在非变性条件下,利用Ni-NTA琼脂糖树脂从菌体裂解液上清中纯化重组SVA VP2蛋白,并免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用Protein A Sepharose CL-4B树脂从兔血清中亲和层析纯化多克隆抗体,并对其进行间接免疫荧光分析。结果显示,重组SVA VP2蛋白以可溶性和包涵体两种形式在大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞内进行表达,分子质量约为47ku;制备的兔抗VP2蛋白多克隆抗体效价高达1∶64 000,该多克隆抗体仅识别SVA,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、脑心肌炎病毒、猪瘟病毒和猪伪狂犬病病毒等常见猪病原无交叉反应,表明制备的多克隆抗体具有良好的特异性。重组SVA VP2蛋白及其多克隆抗体的成功制备为猪塞内卡病毒病血清学检测方法的建立提供了良好的生物材料。 相似文献
84.
鸭源流感病毒人工感染鸡后诱导的细胞凋亡 总被引:4,自引:0,他引:4
本文利用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记 (简称TUNEL)法对鸡感染鸭源流感病毒A/duck/Nanjing/ 2 1/ 95/ (H9N?)后的细胞凋亡情况进行了研究 结果发现 ,鸡在接种AIV后第 3d ,肾脏、肺、心、肝、脾、胸腺、法氏囊等组织发生了明显的细胞凋亡 ,其细胞凋亡率显著高于未接毒对照鸡 其中 ,肾脏的细胞凋亡率最高 ,为 8 9% ,其次是淋巴器官脾(2 6 % )、胸腺 (2 2 % )和法氏囊 (2 3% ) 这些结果表明A/duck/Nanjing/ 2 1/ 95(H9N?)毒株在活体内诱导了细胞凋亡 相似文献
85.
86.
根据口蹄疫病毒基因组的5’非翻译区序列比较保守的特点,采用软件设计亚欧型(A、O、C及Asia-1型)FMDV通用的引物和探针,经对反应条件和反应体系进行优化,建立了亚欧型FMDV的实时荧光RT—PCR检测方法。研究表明,该方法检测阳性质粒模板的线性范围为1.9×10^7-1.9×10拷贝,最低可检测19个拷贝。通过对FMDV各血清型(A、O、C、Asia-1及SAT-1,2,3型)的检测,证实该方法对亚欧型FMDV具有良好的特异性,能有效区分亚欧型和南非型FMDV感染。本研究为亚欧型口蹄疫的快速诊断和流行病学调查提供了新的方法。 相似文献
87.
88.
89.
诺如病毒是严重危害人类健康的重要食源性病原。作者应用3’RACE(rapid amplification of cDNA 3’ends) 技术对一株诺如病毒分离株的基因组3’末端进行扩增,并对其核苷酸序列进行比较分析,从而可为该病的分子生物学检测提供阳性物质,并从分子水平上推测该病的来源。经过提取病毒总RNA、以3’RACE锚定引物进行反转录、用特异引物进行3’RACE,琼脂糖凝胶电泳检测结果表明成功扩增了诺如病毒基因组约3282 bp的基因片段,测序及序列BLAST分析证实该分离株属GⅡ 4型,与日本分离株同源。3’RACE扩增序列为诺如病毒的实验室检测及深入研究奠定了基础。 相似文献
90.
醋酸甲羟孕酮(MPA)人工抗原的合成与单克隆抗体的制备 总被引:1,自引:0,他引:1
为研制检测醋酸甲羟孕酮(MPA)的免疫学检测技术进行MPA单克隆抗体的制备与鉴定,研究分别采用碳二亚胺法、混合酸酐法将MPA偶联到牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)上制备免疫原(MPA—BSA)与包被原聊PA—OVA),通过BALB/c小鼠免疫、细胞融合、间接ELISA和阻断ELISA筛选、有限稀释法克隆亚克隆获得分泌MPA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并通过ELISA方法对其抗体效价、特异性、敏感性、亚类及稳定性进行鉴定。结果表明:成功合成2种人工抗原,MPA与BSA、OVA的偶联比分别为8:1、12:1;获得1株稳定分泌MPA单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株2G4H9,McAb腹水的间接ELISA效价为1:8×10^4,IgG1亚类,K型轻链,腹水抗体IC50为5.0ng·mL^-1,与甲地孕酮、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和己烯雌酚交叉反应率为12.5%、〈0.01%、〈0.01%和〈0.01%。作者认为:MPA单克隆抗体特异性和敏感性良好,杂交瘤细胞株性能稳定,为进一步研究MPA相关免疫学分析技术奠定了基础。 相似文献