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利用DNA重组技术,将绵羊朊病毒正常成熟蛋白基因OvPrP~C插入表达载体pET30a,在大肠杆菌BL21 (DE3)中高效表达,获得的表达产物为绵羊朊蛋白OvPrP(23~256)。经SDS-PAGE分析,表达产物以包涵体形式存在。将包涵体蛋白用8mol/L尿素溶解,在变性条件下经Ni-NTA柱亲和层析纯化,而镍柱能竞争性结合含有6×His标签的pET30a表达的目的蛋白。由于目的蛋白是在变性条件下纯化的,需要将其复性后才能恢复天然构象。采用梯度尿素透析复性后,复性率为25%左右。为了进行重组朊蛋白的结构分析,将重组蛋白进行超滤浓缩,至蛋白浓度为0.4mg/mL时,采用远紫外线圆二色谱(CD)分析其二级结构,并对其高级结构进行了预测。结果表明:通过Western-blotting鉴定,表达的绵羊朊病毒正常成熟蛋白OvPrP(23~256)的分子量为25172.80u左右。经过Jascow32软件分析后,测得OvPrP(23~256)的二级结构含量为:α螺旋为39.4%,β折叠为0%,转角为0%,无规卷曲为60.6%。绵羊重组朊蛋白高级结构的分析为朊病毒疾病的发生机理的探讨提供科学依据。 相似文献
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通过对子牙河流域水资源、土地资源、人口、开发利用、社会经济以及植被状况等资料分析,从宏观和微观2个层次,形成了流域和县市2级分辨率的评价单元,并分别构建子牙河流域生态系统的评价指标体系,采用Bossel评分标准,综合评价流域层面的生态系统演变格局,以及县市层面的生态系统。评价结果显示:近几十年来,子牙河流域生态环境子系统和水资源子系统的评价值呈明显下降趋势,而社会经济子系统的评价值则呈明显上升趋势,生态系统综合评价指标值减小;现状年子牙河流域生态系统格局西北部山区较西南部平原区好,位于流域西北部的五台县生态系统格局最好,位于流域东部的冀州市最差。评价结果基本与实际相符,该研究结论将为流域生态环境的综合治理提供科学依据。 相似文献
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