大骨节病患者血清微小病毒B19DNA的检测研究

大骨节病是一种原因不明慢性、变形性、地方性骨关节病。本研究用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）对大骨节病患者血清进行检测，结果５５例大骨节病患者血清中１６例检出微小病毒Ｂ１９ＤＮＡ，检出率（２９．０９％）明显高于相邻非病区对照组和绝对非病区对照组（分别为１１．５４％，１１．４２％）。提示微小病毒Ｂ１９感染与大骨节病有重要关系。     

大骨节病病儿血浆致培养兔软骨细胞损伤实验的形态学观察

目的：为探查外周血有白细胞坏死的大骨节病（KBD）病儿其血浆内有无KBD的致病因子,特进行本实验。方法：选干骺端损害X线阳性征且有外周血细胞坏死的KBD病儿血浆作用于培养（兔）软骨细胞以判定血浆内有无引起软骨细胞病变效应的致病因子。结果：实验组部分细胞的核染色质颗粒间出现淡紫红色小点动物,伴点状物周围染色质溶解,直至整个胞核转化为青灰均质的大团块;更后,团块内出现嗜酸性斑块、团块外出现环状体。电镜下见实验组细胞内众多染色溶解小灶、各小灶内有直径75－83nm的病毒核衣壳,呈外形六角,核心中空。结论：以KBD病儿血浆诱发出的培养软骨细胞的光镜下病变与KBD尸骨软骨细胞的B型凝固性坏死安全相同,实验复制出KBD的培养软骨细胞病变模型;病变的原因是来自KBD病儿血浆、继之出现于实验组病变细胞核内的某病毒;KBD病儿血浆内的病毒可能就是KBD的致病因子。     

MON和硒对软骨Ⅱ型胶原的影响及与大骨节病的关系

目的 大骨节病是一种地方性、慢性、退行性骨关节病,主要损害关节软骨,病变呈对称性.目前,大骨节病病因并不清楚,在我国研究较多的是真菌中毒说和缺硒说.流行病学资料和以往的实验研究表明,串珠镰刀菌素是在大骨节病病区检测到的镰刀茵毒素之一,该毒素在病区、非病区间存在显著差异.因此,串珠镰刀茵素作为大骨节病的可疑致病因子可能与大骨节病的发生、发展具有一定的相关性.Ⅱ型胶原作为软骨细胞外基质主要成分,可以作为软骨损伤的检测指标,该研究的目的就是检测串珠镰刀茵素对软骨细胞和体外再建软骨组织的Ⅱ型胶原的影响,以及硒的保护性作用,为大骨节病是否为真茵毒素和环境缺硒复合因素作用的病因假说提供一些实验证据.方法 采用PT-PCR方法检测串珠镰刀菌素毒素对Ⅱ型胶原mRNA的影响;用免疫组织化学的方法检测Ⅱ型胶原、MMP1、MMP13的表达.结果 串珠镰刀茵素能够使Ⅱ型胶原mRNA的表达和原位表达均减少,同时MMP1、MMP13的表达增加;补硒能缓解上述变化.结论 串珠镰刀茵素毒素能够抑制Ⅱ型胶原mRNA的合成,同时MMP1、MMP13的表达均增加,促进其分解代谢,使Ⅱ型胶原原位表达减少;最终导致软骨细胞损伤甚至变性坏死;补硒能减轻病情严重程度,但并不能完全阻止这些变化.这些都为进一步研究提供了实验证据.     

同种异体软骨细胞移植修复兔膝关节软骨缺损的免疫反应

目的：探讨同种异体软骨细胞移植修复关节软骨缺损的免疫学变化。方法：将兔分成软骨细胞移植组及骨基质明胶移植组，用免疫学及组织学方法，研究其免疫反应。结果：软骨细胞移植组术后检到淋巴细胞增殖，植入物局部见到淋巴细胞浸润。结论：同种异体软骨细胞移植存在免疫反应。     

c-jun氨基末端激酶通路在一氧化氮诱导的软骨细胞凋亡中的作用

目的 利用一氧化氮(NO)供体硝普钠(SNP)和c-jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125,研究JNK通路对NO诱导的兔关节软骨细胞凋亡的影响.方法 采用机械-酶消化法分离3周龄新西兰兔关节软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定细胞后,SNP和JNK抑制剂SP600125作用于细胞24h,采用AnnexinV-FITC/PI流式细胞术和末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测软骨细胞凋亡,免疫印迹(Western blot)法测定核因子(NF-κB)p65和p53蛋白的表达水平.结果 SNP作用于软骨细胞后,随着其浓度的增大,细胞早期凋亡率与对照组比较呈浓度依赖性增加,差异有统计学意义(P＜0.05),NF-κB p65和p53的表达分别出现上调,差异有统计学意义(P＜0.05);加入JNK抑制剂SP600125能抑制这种增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 JNK信号转导通路在NO诱导的软骨细胞凋亡起着非常重要的作用,JNK的特异性抑制剂SP600125能以浓度依赖方式减少兔关节软骨细胞中NO诱导的凋亡和NF-κBp65及p53蛋白的表达活性.     

丁烯酸内酯对软骨细胞的毒理机制和Se、VC、VE的保护作用

目的观察丁烯酸内酯（BUT）对软骨细胞的毒理作用以及维生素C（VC）、维生素E（VE）和硒（Se）的保护作用。方法体外培养软骨细胞,加入不同浓度BUT以及VC、VE和Se。用MTT法检测细胞活性,收集培养液检测氧化相关指标丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）的表达水平,通过光镜和电镜来观察其形态变化。结果BUT可以导致软骨细胞膜系统受损甚至死亡。微量毒素可以刺激软骨细胞的活性,增强其抗氧化作用;大量毒素则表现为抑制作用。VC、VE和Se对这种损伤的保护作用很有限。结论BUT通过刺激细胞产生内源性的氧自由基来发挥其损伤作用,进而导致细胞膜系统破坏甚至细胞死亡;单一的抗氧化剂并不能完全拮抗这种损伤作用。     

GeM10体外对PHA诱发的肿瘤病人外周血单个核细胞产生IL—2 …

ＧｅＭ１０是一种抗癌生物碱－金属配位药物,动物实验发现ＧｅＭ１０对实验肿瘤Ｓ１８０肉瘤有抑制作用,能明显延长氏腹水癌荷瘤小鼠的存活时间,封闭荷瘤鼠体单核巨噬细胞系统,ＧｅＭ１０的抑癌作用解除。     

松质骨骨基质明胶复合软骨细胞构建组织工程软骨

目的 观察软骨细胞在同种异体松质骨骨基质明胶(BMG)上的生长、增殖和分化,探讨用松质骨BMG与软骨细胞体外构建组织工程软骨的效果.方法 分离1月龄兔关节软骨细胞,扩增后种植在松质骨BMG上体外构建组织工程软骨.于1、2、4、6周取材进行组织学、Ⅱ型胶原免疫组织化学及透射电镜观察.结果 软骨细胞在BMG上生长良好,分泌蛋白聚糖和胶原.随培养时间延长,细胞增殖,松质骨BMG空隙内细胞数量增多,软骨陷窝形成,基质分泌增强.培养6周时软骨细胞在BMG表面及孔隙内形成软骨样组织,免疫组织化学染色显示细胞周围基质富含Ⅱ型胶原,分布均匀:透射电镜显示软骨细胞超微结构正常,细胞周围有大量基质产生.结论 同种异体松质骨BMG可以促进软骨细胞的生长增殖,维持软骨细胞的分化表型;在体外成功构建了组织工程软骨,它是一种较好的软骨组织工程支架材料.

Abstract：

Objective To evaluate the use of cancellous bone matrix gelatin (BMG) combined with chondrocytes in constructing tissue-engineered cartilage by observing the growth, proliferation and differentiation of chondrocytes on allogeneic cancellous BMG. Methods The articular chondrocytes isolated from a 1-month-old rabbit were multiplied to a monolayer and seeded onto cancellous BMG to construct tissue-engineered cartilage in vitro during a period of 6 weeks. Samples were taken from the construct after 1, 2,4, and 6 weeks of culture and evaluated by histology, immunohistochemistry and transmission electron microscopy (TEM). Results The chondrocytes excreted matrix proteoglycan and collagen on cancellous BMG. With the prolongation of the culture time, the cells proliferated in the construct and the cells in the lacunae increased. Numerous chondrocytes were present the central region of the cancellous BMG and surrounded by extracellular matrix. By 6 weeks of culture, the BMG was covered with 15-20 layers of chondrocytes and cartilaginous tissue occurred in the pores throughout the cancellous BMG. Immunohistochemical staining showed rich and evenly distributed type Ⅱ collagen around the chondrocytes, and TEM revealed an ultrastructure of the chondrocyte similar to that of native chondroctyes, with abundant extracellular matrix produced around the cells. Conclusion Tissue-engineered cartilage can be constructed in vitro using allogeneic cancellous BMG combined with chondrocytes. Allogeneic cancellous BMG serves as a good scaffold material for tissue-engineered cartilage to promote the growth and proliferation of the seeded chondrocytes and allows maintenance of the differentiation phenotype of the cells.     

低硒条件下T-2毒素中毒与大骨节病关系

大骨节病(Kashin-Beck disease,KBD)是一种慢性、地方性、变形性骨关节病,在我国主要分布在从东北到西南的斜长地带.大骨节病致残率很高、严重危害人民健康[1],中国西部地区患病最严重.