人组织型激肽释放酶6在卵巢上皮性肿瘤中的表达及其与临床病理特征和预后的关系

Objective To approach the relationship between the expression of hK6 in ovarian neoplasm and clinicopathological variables and prognosis in ovarian cancer patients for finding a new tumor marker of the ovarian cancer. Methods The expression of hK6 was detected by immunohistochemistry in 19 cases of benign, 11 cases of borderline and 45 cases of malignant ovarian neoplasms and statistically analyzed whether its expression correlate with clinicopathological variables and prognosis in patients with ovarian cancer. Results The expression of hK6 in ovarian cancer tissues (60.0%) was significantly higher than that in the benign (15.8%) and borderline (27.3%) ovarian neoplasm tissues (P < 0.01). The expression of hK6 in higher-grade ovarian cancer tissues (68.4%) was higher than that in low-grade ones (14.3%, P<0.05). The expression of hK6 in late-stage (stage Ⅲ ,76.7%) was significantly higher than that in early-stage (stage Ⅰ or Ⅱ ,26.7%, P < 0.01). The expression of hK6 was significantly higher in patients with lymph node metastasis (77.8%) than that in patients without (33.3% ,P<0.01). The expression of hK6 in the cancer tissues in the patients died, or with reeeurence or metastasis within 3 years after surgery was higher (75.0%) than that in the patients with stable disease (42.9%, P < 0. 05). Conclusion The expression of hK6 in ovarian cancer was higher than that in benign and borderline ovarian neoplasms. The expression of hK6 is higher in the ovarian cancer of late stage, higher-grade, with lymph node metastasis and is associated with a poorer prognosis, hK6 may become a new markers in prediction of prognosis of the patients with ovarian tumors.     

雌孕激素对人卵巢癌细胞KLK5 mRNA表达和增殖的影响

目的探讨雌孕激素对其受体阳性人卵巢癌HO8910细胞中组织激肽释放酶5(KLK5)基因mRNA表达的调控。方法取对数生长期的HO8910细胞,雌激素组分别加入10-10、10-9、10-8、10-7mol/L的17-β雌二醇(17-βE2),孕激素组分别加入10-7、10-6mol/L的黄体酮(P),对照组加入无水乙醇,培养72h。用实时荧光定量逆转录PCR检测各实验组和对照组中KLK5mRNA表达变化。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖。结果作用72h后,17-βE2各实验组(10-10、10-9、10-8、10-7mol/L)HO8910细胞KLK5mRNA水平均高于乙醇对照组(P<0.01);P各实验组(10-7、10-6mol/L)HO8910细胞KLK5mRNA水平均低于乙醇对照组(P<0.01)。经MTT检测17-βE2各实验组HO8910细胞光吸收度A值与乙醇对照组相比明显增加(P<0.01);P各实验组细胞光吸收度A值与乙醇对照组相比明显降低(P<0.01)。结论雌激素对KLK5mRNA的表达具有上调作用,同时能促进卵巢癌HO8910细胞的增殖;而孕激素作用正相反。     

硫化氢与胱硫醚-γ-裂解酶在变应性鼻炎豚鼠中作用机制的研究

目的:制备豚鼠变应性鼻炎(AR)动物模型,通过干预性处理研究内源性硫化氢(H2S)及其限速酶胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)在AR中的变化及意义.方法:将24只豚鼠随机分为4组,分别为卵清蛋白致敏豚鼠变应性动物模型组(致敏组)、NaHS处理组及CSE抑制剂炔丙基甘氨(PPG)干预组(PPG组),同时以生理盐水处理豚鼠作为对照组,分别测定各组动物鼻腔灌洗液eotaxin、血浆H2S浓度,采用实时荧光定量RT-PCR法测定鼻黏膜中CSE的表达.结果:豚鼠致敏后eotaxin含量明显增加,而血浆H2S浓度及鼻黏膜CSE的表达明显低于对照组(P<0.05),而干预处理的NaHS组与致敏组相比,eotaxin相应减少(P<0.05),而H2S浓度及CSE的表达量增加(P<0.05),2组间差异有统计学意义,而经PGG干预处理后,eotaxin含量则增加,而H2S浓度及CSE的表达量降低,2组间差异有统计学意义(P<0.05),其中H2S含量与CSE的表达呈线相关.结论:内源性H2S参与AR的炎症过程,其含量主要受限速酶CSE的调控.     

结直肠癌及淋巴结组织CEA mRNA表达的实时荧光定量检测

目的:建立检测CEA mRNA表达水平的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-PCR)方法,并探讨结直肠癌及淋巴结组织中CEA mRNA表达的应用价值。方法:应用SYBR Green Ⅰ作为荧光染料,以GAPDH作为内对照,建立检测CEA mRNA的FQ-PCR方法,并对56例结直肠癌组织、淋巴结组织CEA mRNA的表达水平进行检测。结果:CEA mRNA在结直肠癌组织中均表达,但表达水平在不同病理分化程度(P=0.8661)及不同Duke分期(P=0.2986)中无明显变化;在检测的231个淋巴结中,共有137个淋巴结CEA mRNA表达为阳性,表达水平为18.31±36.85,其阳性表达率为59.3%(137/231),明显高于常规病理检测[29.4%(68/231)],χ2=41.7497,P=0.0001;CEA mRNA在Duke C D期淋巴结中表达水平(32.85±53.49)显著高于Duke A B期(6.54±14.57),P=0.0001。结论:FQ-PCR方法简便、特异和可靠;比常规病理检查更加敏感,可有效补充常规病理检查的不足,在预测肿瘤微转移方面具有重要的临床应用价值。     

乙型肝炎e抗原与HBV-DNA定量及肝功能的相关性分析

目的探讨乙型肝炎e抗原(HBe Ag)、乙型肝炎DNA(HBV-DNA)含量与乙型肝炎患者肝功能损害的关系。方法采用电化学发光法检测HBe Ag的光放射强度,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测HBV-DNA含量,用速率法检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平。结果 HBe Ag阳性患者HBV-DNA阳性率明显高于HBe Ag阴性患者(P<0.01);随着HBe Ag光放射强度的升高,患者HBV-DNA拷贝数也明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);且随着HBV-DNA增多,ALT、AST也明显升高(P<0.05或<0.01)。结论血清中HBV-DNA与HBe Ag及肝细胞损害程度三者之间存在密切关系,在临床工作中,应联合检测HBe Ag、HBV-DNA及肝功能,才能更准确的判断患者病情、预后及指导抗病毒药物的应用。     

SYBR Green Ⅰ实时荧光定量方法检测结直肠癌患者外周血CEA-mRNA表达研究

目的建立检测CEA mRNA表达水平的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（VQ-PCR）方法，探讨外周血CEA mRNA表达在结直肠癌患者中的应用价值。方法应用SYBR Green J作为荧光染料，以GAPDH作为内对照，建立检测CEA mRNA的FQ-PCR方法，并对56例结直肠癌患者外周血中CEA mRNA的表达水平进行了检测。结果56例结直肠癌患者中有33例外周血CEA mRNA表达为阳性，表达水平为1．07±2．99，阳性表达率为66．1％（37／56），30例结直肠良性疾病患者中有2例外周血CEA mRNA表达为阳性，表达水平为0．13±0．07，阳性表达率为6．7％（2／30），30例健康成人外周血CEA mRNA表达均为阴性；结直肠癌患者外周血CEA mRNA在不同病理分化程度中表达水平无明显变化（P〉0．05），但在Dukes C＋D期表达水平（1．73±2．15）及表达阳性率82．8％（24／29）均显著高于Dukes A＋B期表达水平（0．39±0．87）及表达阳性率48．1％（13／27）（P〈0．01）。结论该VQ-PCR方法简便、特异、可靠；检测外周血CEA mRNA表达水平，对诊断结直肠肿瘤病变比血清CEA蛋白具有更高的敏感性，可提高早期结直肠癌诊断符合率；在发生转移的Dukes C＋D期其表达水平及表达阳性率均显著高于未发生转移的Dukes A＋B期，可作为鉴别结直肠癌患者发生微转移的有力证据之一，动态观察其水平变化对判断结直肠癌患者的预后有重要价值。     

溶血对荧光定量PCR检测HBVDNA结果的影响

实时荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction，FQ-PCR)技术融汇了PCR技术的核酸高效扩增，探针技术的高特异性，光谱技术的高敏感性和高精确定量的优点，直接探测PCR过程中荧光信号的变化以获得定量的结果。由于此方法具有简便、快速、敏感、特异、无PCR后处理步骤等特点，目前HBVDNA荧光定量已成为监测治疗效果的常规手段，应用越来越广泛。在制订HBVDNA标本留取标准时，许多医院都规定溶血标本为不合格标本。因为血红素及其代谢产物为DNA     

创伤弧菌溶细胞素特定氨基酸序列分析及其人源化单链抗体筛选

本研究利用生物信息学方法分析创伤弧菌(vibrio vulnificus, V.vulnificus)溶细胞素的蓖麻毒素结构域内氨基酸序列并合成多肽,筛选人工合成的单链抗体噬菌体文库Tomlinson I+J,为创伤弧菌感染的抗体阻断治疗研究奠定基础。通过对未经处理的大容量Tomlinson I+J噬菌体文库进行3轮特异性亲和筛选,从中筛到特异性结合溶细胞素多肽的克隆,命名为scFv-D2,经氨基酸序列分析验证其含有完整的人源化抗体重链和轻链可变区。将scFv-D2克隆转化E.coli HB2151并诱导表达,用ELISA方法检测其可溶性scFv片段与溶细胞素毒性多肽的结合活性。结果显示从Tomlinson I+J文库成功筛选出一株具有结合活性的人源化噬菌体单链抗体,可用于创伤弧菌感染抗体阻断治疗策略的研究。     

标本扩增效率的计算及其对HBV DNA定量结果的影响

目的建立分析标本扩增效率的方法，分析其对HBV DNA定量结果的影响。方法应用分析软件提供的样点拟合法及对数荧光一循环数坐标图，计算得到Ct，HBV DNA拷贝数以及每一标本的扩增效率。分析40个HBV DNA拷贝数在10^4-10^8／ml的标本的扩增效率，井用得到的标本实际扩增效率加以校正。结果4个标准的扩增效率分别为0．80，0．80，0．84和0．85。标本的扩增效率在0．59—0．85之问，其中30份（75％）在0．7—0．85之间，8份（20％）在0．65，0．70之问，其余2份在0．65以下。部分校正后的HBV DNA定量结果比校正前高一个数量级。结论标本与标准的扩增效率不一定相同，标本扩增效率的降低导致标准曲线定量结果偏低，有必要用标本的实际扩增效率对结果进行校正。     

流式细胞技术检测肾移植后外周血白细胞介素18受体的表达

背景：细胞因子常常在肾移植后排斥反应早期即被释放,因此可以作为排斥反应的早期诊断指标。目的：观察尿毒症患者肾移植前后外周血白细胞介素18受体（IL-18R）表达的变化。方法：将2004-09/2005-09在解放军济南军区总医院进行的肾移植尿毒症32例患者分为肾功能稳定组24例,急性排斥组8例。另选择以往手术后移植肾功能正常,平均存活时间4年的肾移植患者12例为长期存活组。同期查体未发现异常健康自愿者7例为健康对照组。提取受试者的外周血淋巴细胞,加入双荧光标记的鼠抗人CD4/IL-18Rα及CD8/IL-18Rα单克隆抗体,利用流式细胞仪进行测定。结果与结论：流式细胞技术检测CD4/IL-18Rα及CD8/IL-18Rα在尿毒症组的阳性率明显高于健康对照组（P=0.02,P=0.04）。肾功能稳定组及长期存活组外周血CD4/IL-18Rα及CD8/IL-18Rα的表达明显低于急性排斥组（P〈0.05）。急性排斥反应组激素冲击治疗后其阳性率明显低于激素冲击治疗前（P〈0.05）。3例耐激素排斥反应者IL-18R表达值高于5例激素治疗有效者。结果显示外周血CD4/IL-18Rα及CD8/IL-18Rα的变化可以较早预测肾移植后急性排斥反应,预测肾移植后恢复情况,评估排斥反应对激素治疗的效果。