缺氧预处理间充质干细胞对兔颈动脉球囊损伤后血管内皮生长因子水平及再内皮化的影响

目的探讨外周血间充质干细胞(MSCs)移植对动脉粥样硬化模型兔颈动脉球囊损伤后外周血血管内皮生长因子(VEGF)水平及再内皮化的影响。方法新西兰雄性大白兔72只,随机分为缺氧预处理MSCs移植组(处理组)、非处理MSCs移植组(非处理组)及对照组,每组24只。术后1、2、4周采集外周血检测VEGF水平;术后1、4周留取血管标本免疫组织化学染色,进行归巢MSCs分析、再内皮化程度分析。结果与对照组比较,处理组和非处理组兔1、2、4周VEGF水平明显升高;与非处理组比较,处理组兔1、2周VEGF水平明显升高。与移植后1周时比较,处理组和非处理组兔2周时VEGF水平明显降低。移植后4周时内皮化程度分析显示,处理组和非处理组均明显优于对照组,其中处理组又明显优于非处理组(P<0.05)。结论 MSCs移植能够显著提高兔外周血VEGF水平,加速损伤血管再内皮化;移植经缺氧预处理的MSCs可增强上述作用,可能与缺氧应激诱导MSCs分泌VEGF等细胞因子功能增强有关。     

腺病毒介导hRAMP1基因转染血管平滑肌细胞的增殖和凋亡

背景：外源性受体活性修饰蛋白1基因转染可能对血管平滑肌细胞增殖调控具有重要的作用。目的：探讨腺病毒载体介导人受体活性修饰蛋白1基因对体外培养的兔血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法：分离培养获得兔主动脉血管平滑肌细胞,分别以携带人受体活性修饰蛋白1基因的腺病毒和空腺病毒转染后,分成人受体活性修饰蛋白1组、空病毒组和对照组。结果与结论：腺病毒转染细胞后随时间延长,报告基因绿色荧光蛋白表达逐渐增加,72h表达最强,感染率达80%,96h时仍有绿色荧光蛋白表达。人受体活性修饰蛋白1组的受体活性修饰蛋白1蛋白表达增加,血管平滑肌细胞凋亡率增加,细胞增殖明显抑制,与空病毒组和对照组比较差异有显著性意义（P〈0.05）。提示人受体活性修饰蛋白1基因感染血管平滑肌细胞后明显抑制血管平滑肌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

腺病毒介导hRAMP1基因转染血管平滑肌细胞的增殖和凋亡

背景:外源性受体活性修饰蛋白1基因转染可能对血管平滑肌细胞增殖调控具有重要的作用。目的:探讨腺病毒载体介导人受体活性修饰蛋白1基因对体外培养的兔血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法:分离培养获得兔主动脉血管平滑肌细胞,分别以携带人受体活性修饰蛋白1基因的腺病毒和空腺病毒转染后,分成人受体活性修饰蛋白1组、空病毒组和对照组。结果与结论:腺病毒转染细胞后随时间延长,报告基因绿色荧光蛋白表达逐渐增加,72h表达最强,感染率达80%,96h时仍有绿色荧光蛋白表达。人受体活性修饰蛋白1组的受体活性修饰蛋白1蛋白表达增加,血管平滑肌细胞凋亡率增加,细胞增殖明显抑制,与空病毒组和对照组比较差异有显著性意义(P<0.05)。提示人受体活性修饰蛋白1基因感染血管平滑肌细胞后明显抑制血管平滑肌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

外周血间充质干细胞移植心肌梗死兔新生血管及心功能的变化

背景:药物治疗和支架置入治疗尚不能修复心肌梗死后已坏死的心肌。目的:观察外周血间充质干细胞移植治疗对心肌梗死兔新生血管及心功能的影响。方法:随机抽签法将36只大白兔分为假手术组,间充质干细胞移植组和对照组,结扎兔冠状动脉左室支建立心肌梗死模型。结果与结论:移植后4周,流式细胞仪分析显示绝大部分间充质干细胞表达CD44,极少量细胞表达CD34和CD45。间充质干细胞移植组梗死心肌组织有移植的间充质干细胞存活,超声心动仪示间充质干细胞移植组左心室射血分数及短轴缩短率明显高于对照组(P<0.01);左心室收缩末内径和舒张末内径明显小于对照组(P<0.01)。间充质干细胞移植组心肌纤维化程度、心肌梗死面积均明显小于对照组(P<0.01)。免疫组织化学染色显示间充质干细胞移植组新生毛细血管密度明显高于对照组(P<0.01)。提示外周血间充质干细胞移植增加了梗死心肌新生血管密度,改善心脏的功能。     

骨髓间充质干细胞移植后颈动脉损伤球囊核转录因子κBp65和增殖细胞核抗原的表达

背景:炎症反应在经皮腔内冠状动脉支架置入后再狭窄的发生中起了重要作用。近年的研究发现,骨髓间充质干细胞具有较强的免疫调节特性。然而骨髓间充质干细胞对损伤血管炎症反应影响的报道较少。目的:观察骨髓间充质干细胞移植对兔颈动脉球囊损伤后核转录因子κBp65和增殖细胞核抗原表达的影响,分析其与内膜增殖作用的相关性。方法:制作颈动脉粥样硬化狭窄兔模型36只,随机分成2组,骨髓间充质干细胞移植组球囊损伤后接受4’,6-二脒基-2-苯基吲哚标记的骨髓间充质干细胞移植,对照组球囊损伤后接受等量的PBS液注射。造模前和细胞移植后7,14,28d分别抽取外周血,ELIAS法检测血清肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的质量浓度;细胞移植后14d取血管组织,采用免疫组织化学分析法测定局部组织核转录因子κBp65和增殖细胞核抗原的表达,细胞移植后28d对血管组织行苏木精-伊红染色检测血管形态学变化。结果与结论:细胞移植后14d骨髓间充质干细胞移植组损伤血管局部核转录因子κBp65和增殖细胞核抗原的表达均较对照组明显减少(P<0.05)。细胞移植后7,14,28d骨髓间充质干细胞移植组血清肿瘤坏死因子α和白细胞介素6质量浓度均较对照组显著降低(P<0.05)。细胞移植后28d骨髓间充质干细胞移植组新生内膜面积、新生内膜/中膜面积及血管狭窄率均较对照组显著降低(P<0.05)。提示骨髓间充质干细胞可能通过抑制损伤血管核转录因子κBp65活性,减轻炎症反应进而下调增殖细胞核抗原的表达,对抑制损伤血管新生内膜的增殖可能发挥有益作用。     

外周血间充质干细胞移植心肌梗死兔新生血管及心功能的变化

背景：药物治疗和支架置入治疗尚不能修复心肌梗死后已坏死的心肌。 目的：观察外周血间充质干细胞移植治疗对心肌梗死兔新生血管及心功能的影响。 方法：随机抽签法将36只大白兔分为假手术组,间充质干细胞移植组和对照组,结扎兔冠状动脉左室支建立心肌梗死模型。 结果与结论：移植后4周,流式细胞仪分析显示绝大部分间充质干细胞表达CD44,极少量细胞表达CD34和CD45。间充质干细胞移植组梗死心肌组织有移植的间充质干细胞存活,超声心动仪示间充质干细胞移植组左心室射血分数及短轴缩短率明显高于对照组(P < 0.01);左心室收缩末内径和舒张末内径明显小于对照组(P < 0.01)。间充质干细胞移植组心肌纤维化程度、心肌梗死面积均明显小于对照组(P < 0.01)。免疫组织化学染色显示间充质干细胞移植组新生毛细血管密度明显高于对照组(P < 0.01)。提示外周血间充质干细胞移植增加了梗死心肌新生血管密度,改善心脏的功能。     

药物洗脱支架置入术后晚期、极晚期支架内血栓形成的光学相干断层成像分析

目的:应用光学相关断层成像(OCT)分析药物洗脱支架置入术后晚期、极晚期支架内血栓形成的可能机制。方法:入选2011-01-2017-12经遵义医学院附属医院行冠状动脉(冠脉)造影明确诊断晚期、极晚期支架内血栓形成患者8例。8例患者在PCI术中均行OCT检查。回顾性分析8例患者的临床资料、PCI过程及OCT图像特征。结果:7例伴有多个心血管危险因素,2例合并轻度左心功能不全。首次支架置入至发生支架血栓的平均时间(818±651) d;双联抗血小板服用平均时间(312.8±76.3) d;低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)平均水平为(3.44±1.35) mmol/L,均未达到目标值;1例在术后停用双联抗血小板3个月、2例在服用双联抗血小板期间、5例在单用阿司匹林期间发生支架内血栓;6例置入依维莫司药物支架,1例行支架内非顺应性高压球囊扩张,1例行紫杉醇药物球囊治疗。OCT图像特征:7例患者支架内异质性新生内膜形成,5例为支架内新生动脉粥样硬化伴斑块破裂,2例为支架内新生动脉粥样硬化伴斑块侵蚀;1例出现严重支架贴壁不良,贴壁不良比例达66.2%;6例患者出现不同程度的支架小梁无内膜覆盖,平均为(10.4±6.2)%;5例支架内见红血栓,3例支架内见白血栓。结论:晚期、极晚期支架内血栓患者首次及再次住院多表现为急性冠脉综合征与高LDL-C水平。支架内新生动脉粥样硬化、支架贴壁不良是导致晚期、极晚期支架内血栓形成的主要原因之一。OCT的应用有助于明确晚期和极晚期支架内血栓形成的机制。     

骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死后心脏功能及损伤血管再狭窄的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞(MSC)移植改善心肌梗死后心功能的变化,及其治疗的安全性.方法 建立兔右侧颈动脉粥样硬化狭窄和心肌梗死早期再灌注模型并行右侧颈动脉球囊损伤,建模后分为MSC移植组和对照组,经耳缘静脉注射MSC或等体积的磷酸盐缓冲液.移植后1周观察MSC的归巢;2周时免疫组织化学染色检测血管和心肌组织中血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)的表达;移植后4周颈动脉造影检测血管狭窄程度,HE染色测定新生内膜面积及血管狭窄率,并同步测定心脏功能和心肌梗死面积、计数梗死心肌周围毛细血管密度.以及移植后对球囊损伤血管再狭窄产生的影响.结果 细胞移植后1周在梗死的心肌组织和损伤血管内膜均有4′,6-联脒-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)标记的MSC归巢.移植后2周MSC移植组的损伤血管内膜见CD31连续性表达,而对照组无表达.与对照组比较(50.5±3.6)%,MSC移植组血管组织增殖细胞核抗原的表达明显降低[(23.4±2.8)%,P＜0.05].4周时损伤血管的新生内膜面积(0.092±0.009比0.189±0.007,P＜0.05)及血管再狭窄率在MSC移植组[(41.7±3.7)%]明显小于对照组[(61.3±1.6)%,P＜0.05].与对照组比较,4周时MSC移植组的心功能有所改善,心肌梗死面积缩小[(21.7±2.2)%比(34.3±1.8)%,P＜0.05],梗死心肌周围新生毛细血管密度明显增加[(33.6±2.0)%比(20.8±2.6)%,P＜0.05].结论 MSC移植在改善梗死心脏功能的同时,对促进损伤血管的再内皮化和减轻新生内膜的增殖可能产生有益作用,从而有助于减轻损伤血管的再狭窄.

Abstract：

Objective Although earlier studies have shown that the transplantation of mesenchymal stem cells (MSCs) might improve cardiac functions after myocardial infraction, its role on vascular restenosis after percutaneous coronary intervention (PCI) remains controversial.The aim of this study was to investigate the effects of MSCs on the restenosis of injured artery following balloon angioplasty in a rabbit model with both myocardial infarction reperfusion and atherosclerotic stenosis cardotid artery by balloon injury.Methods After the animal model was established for myocardial infraction reperfusion and atherosclerotic stenosis cardotid artery by balloon injury, the rabbits received an intravenous transplantation of MSCs.And an equal volume of phosphate buffered solution was administered for the control group.The animal vascular tissue and myocardium tissue were excised at different time points post-transplantation and used to detect the homing of MSCs and the expressions of playlet-endothelial cell adhesion molecule-1 (CD31) and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) by immunohistochemical staining.Four weeks later, vascular restenosis was analyzed by angiography of bilateral carotid arteries and the vascular tissues were used for histological studies.Results At one week post-transplantation, the 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)-labeled MSCs could be detected in myocardial infarction and injured intima.And the intimal expression of CD31 was observed at 2 weeks in the MSCs transplantation group.Yet the expression of PCNA was significantly lower in the MSCs transplantation group than that in the control group (50.5% ± 3.6% vs 23.4% ±2.8%, P ＜0.05).At 4 week post-transplantation, the neointimal area of injured vessels and the vascular restenosis were significantly lower in the MSCs transplantation group than those in the control group (0.092±0.009 vs0.189 ±0.007, P＜0.05;41.7 ±3.7 vs 61.3 ±1.6, P＜0.05).Furthermore the MSCs transplantation group demonstrated improved cardiac functions, reduced myocardial infarct size (21.7% ±2.2% vs 34.3% ± 1.8%, P ＜ 0.05) and significantly increased capillary density around infarction foci (33.6% ±2.1% vs 20.8% ±2.6%, P ＜0.05 ) versus the control group.Conclusion The transplantation of MSCs plays significant roles in cardiac repairing in terms of improved cardiac functions, accelerated repair of injured vessels, suppression of neointimal hyperplasia and reduced restenosis of injured vessels.     

转染hRAMP1的间充质干细胞对心肌梗死后局部血管再生的作用

目的探讨腺病毒介导hRAMP1基因转染间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植对心肌梗死后新生血管生成及其可能机制。方法密度梯度离心并贴壁培养获得兔骨髓MSCs,并分别转染pAd2-hRAMP1或pAd2-EGFP后给予CGRP刺激,ELISA法测定细胞培养上清液中VEGF和HGF水平。建立心肌梗死再灌注兔模型,采用随机数字表法分为MSChRAMP1组(pAd2-hRAMP1转染MSCs移植)、MSCnull组(pAd2-EGFP转染MSCs移植)组和对照组(等量生理盐水注射)(n=10)。2周时Western blot检测心肌梗死组织促血管生长因子VEGF和HGF蛋白表达;4周时TTC染色测定心肌梗死面积比;抗CD31免疫组化染色检测心肌梗死区及梗死周边区新生毛细血管密度。结果 CGRP诱导72 h后MSChRAMP1培养上清液中VEGF和HGF水平显著高于MSCnull组[VEGF:(1 859.4±267.4)vs(1 344.4±137.2);(1 052.2±239.3)vs(683.8±150.5)pg/ml,P<0.05]。细胞移植后4周TTC染色检测显示MSChRAMP1组心肌梗死面积显著降低对照组和MSCnull组[(10.1±2.9)%vs(30.6±2.7)%和(22.5±3.2)%,P<0.05];抗CD31免疫组化染色显示,MSChRAMP1组的梗死区和梗死交界区新生毛细血管计数明显高于对照组和MSCnull组(P<0.05);Western blot检测显示细胞移植后2周MSChRAMP1组心肌梗死区促血管生长因子VEGF和HGF蛋白表达显著高于对照组和MSCnull组(P<0.05)。结论MSChRAMP1能通过提高梗死区心肌组织中促血管生长因子VEGF和HGF的表达,促进心肌梗死区和梗死交界区新生毛细血管生成,降低心肌梗死面积。     

腺病毒介导人受体活性修饰蛋白-1修饰骨髓间充质干细胞移植对兔心肌梗死后心肌新生血管形成的影响

目的应用人受体活性修饰蛋白-1(hRAMP1)修饰骨髓间充质干细胞(MSCs)移植治疗急性心肌梗死(AMI)兔模型,观察基因修饰干细胞移植对AMI后兔新生血管及心功能的影响。方法采用密度梯度离心结合贴壁法培养兔MSCs,取第3～5代MSCs用于实验。应用带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的hRAMP1重组腺病毒载体和空病毒载体转染MSCs,建立AMI兔模型,随机分为hRAMP1转染MSCs移植组(hRAMP1-MSCs组)、空病毒转染MSCs移植组(MSCs组)和等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)注射组(对照组),每组12只。模型建立后40 min,经局部注射等体积MSCs悬液或PBS至梗死交界区。MSCs移植后7、14、28 d,应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清血管内皮生长因子(VEGF)水平;MSCs移植后28 d,应用超声心动仪检测兔的心脏功能,采用苏木精-伊红(H-E)染色评估心肌病理学改变、2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定心肌梗死面积,采用免疫组织化学染色检测梗死交界区CD31的表达,并计数新生毛细血管密度。结果流式细胞术测定结果显示,CD29阳性率为95.8%,CD90为98.6%,CD45为12.5%。MSCs移植后7、14、28 d,hRAMP1-MSCs组的血清VEGF水平均又显著高于MSCs组和对照组(P值均<0.05),MSCs组又显著高于对照组(P值均<0.05)。MSCs移植后28 d,hRAMP1-MSCs组的心肌纤维化程度、心肌梗死面积均显著小于MSCs组和对照组(P值均<0.05),MSCs组又显著小于对照组(P值均<0.05)。MSCs移植后28 d,3组梗死交界区均有CD31表达,hRAMP1 MSCs组新生毛细血管密度显著高于MSCs组和对照组(P值均<0.05),MSCs组又显著高于对照组(P<0.05)。结论 hRAMP1基因修饰MSCs移植较MSCs移植更能增加梗死交界区心肌新生血管密度,改善梗死后心脏的功能。