大鼠心肌细胞分离方法的改进

目的介绍一种易于判断酶解终点的分离大鼠心肌细胞的方法。方法成年SD大鼠麻醉后开胸取出心脏,分别采用传统的Langendorff灌流装置和本实验室改进的Langen-dorff灌流装置,于恒温37℃灌流消化液(含0.6%胶原酶B,0.6%BSA,30μmol.L-1Ca2+的台氏液)分离细胞,并采用IonOptix单细胞动缘检测系统检测细胞功能。结果传统的Langendorff灌流装置分离细胞,酶解时间约13～16min,但此法终点难以判断,每次分离的细胞质量差别较大,且不耐钙,收缩的稳定性较差。而以改进的Langendorff灌流装置分离细胞易于确定消化终点,细胞成活率大于80%,在含1.8mmol.L-1Ca2+的台氏液中存活率也高达50%。给予电压15V、频率1Hz、波宽4ms的持续电刺激时,其在1000s内收缩舒张功能稳定。结论经改造的Langendorff灌流装置分离的心肌细胞成活率高,可控性强,结果稳定,能够更好地用于检测细胞收缩舒张功能的实验。     

致腹泻奇异变形杆菌病原学及其分子特征研究

目的 研究致腹泻奇异变形杆菌病原学特征及毒力基因和质粒携带情况,探讨其与耐药性/致病性的关系。方法 对6 株不同来源（食物中毒、外环境及健康人群）的奇异变形杆菌进行生化、药敏和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分析;PCR检测常见的毒力基因;提取质粒后电泳并切胶回收质粒进行测序分析。结果 不同来源的奇异变形杆菌生化特征基本相同,且均具有常见的毒力基因ureC、rsmA、hpmA 和zapA。但各菌株PFGE分型和药敏结果不同,其携带质粒情况也各异。对其中2 株菌存在的小质粒测序后发现,该质粒长2 683 bp,主要编码qnrD 基因,与耐喹诺酮类药物相关。结论 采用传统的生化分析及常见的毒力基因鉴定方法,无法区分不同来源的奇异变形杆菌,可利用PFGE和质粒分析。耐药菌株中普遍存在的质粒与菌株的耐药性相关,存在多个质粒的菌株其耐药性更强。     

2001～2003年深圳市学校食堂餐具消毒监测结果分析

目的全面了解深圳市学校食堂餐具的卫生质量情况，为今后学校师生食堂餐饮卫生监督提供科学依据。方法大肠菌群按GB14934—94纸片法，致病菌按GB4789．4．5—2003进行。结果深圳市学校2001～2003年餐具大肠菌群整体合格率分别为87．3％、92．5％、96．8％，致病菌均未检出。结论深圳市大中小学校使用的餐具卫生状况整体情况比较好，多数学校餐具卫生3a保持良好状态，只有个别学校稍差。建议卫生监督机构除继续保持监测外，应着重加大对卫生状况和消毒效果稍差的学校的监督，指导学校做好消毒工作，以保护学校师生的饮食安全，避免引起食物中毒。     

深圳市腹泻人群致泻性大肠埃希菌流行及病原特征研究

目的 了解深圳地区腹泻患者中致泻性大肠埃希菌(DEC)的流行状况及病原特征。方法 对2014年深圳市4家哨点医院门诊急性腹泻患者粪便标本进行DEC的分离、分子鉴定、血清分群及PFGE分型。结果 1 823份粪便标本中分离到74株DEC,阳性分离率为4.06%;感染病例年龄分布以 <3岁的婴幼儿及20～39岁中青年为主,病例集中在5-9月夏秋季。以肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)和肠致病性大肠埃希菌(EPEC)为主,分别占45.9%和31.1%。ETEC以O159最多,2株及以上PFGE带型一致的菌株有5簇;其他型别DEC血清型和PFGE带型均较分散。结论 2014年深圳地区腹泻病患者DEC的感染类型以ETEC和EPEC为主,存在年龄及季节分布特征,菌株的血清型及PFGE分子带型较分散,应警惕ETEC的暴发风险。     

一起肠产毒性大肠杆菌腹泻爆发的流行病学调查

目的对深圳市近期发生的一起不明原因群体性腹泻进行现场流行病学调查和实验室检测,探讨该次群体性腹泻的原因,提出应对类似爆发流行的防制策略。方法描述性流行病学分析爆发过程的三间分布,对采集的18份肛拭子以细菌学培养、分子生物学分析和脉冲场凝胶电泳分型(PFGE)分析等方法进行实验室检测。结果18份肛拭子中检出4株肠产毒性大肠杆菌,证实为同一血清型O78:K80,菌株同源性达到96.3%。结论本次在居民小区发生的爆发的群体性腹泻致病菌为产毒性大肠杆菌(ETEC),小区二次供水系统的渗露和连续的暴雨可能是污染的来源,居民个人卫生习惯不良是导致爆发的重要因素。建议对二次供水系统开展季节性检修,并对居民实施有针对性的健康教育,将有利于预防此类疫情的发生。     

深圳市食品病原微生物污染的调查

目的了解深圳市食品污染卫生状况,为卫生主管行政部门发布食品安全预警系统提供及时、客观的科学依据。方法用传统国家标准法和快速荧光PCR检测方法对抽检的食品进行细菌总数、大肠菌群及常见的一些致病苗等微生物指标检测鉴定。结果从随机抽检的324份食品中,分别检出不合格的大肠菌群18份；金黄色葡萄球菌4份；沙门菌2份；志贺菌2份；致泻性大肠杆菌8份,空肠弯曲菌2份,副溶血性弧菌1份。结论深圳市食品在微生物卫生指标总体是安全的,食品被污染程度较轻；但少数卫生指标不合格,需要引起有关部门的重视,特别是夏季,要加强监管监测,以防出现大规模的食物中毒事件发生。     

改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O157：H7

目的建立改良分子信标实时PCR快速检测大肠杆菌O157：H7的快速方法。方法根据GenBank公布O157：H7的rfbE保守序列，设计一对引物和改良分子信标探针，用FAM荧光剂标记探针的5’端，建立改良分子信标实时PCR检测O157：H7的反应体系，应用于食物中毒快速诊断和食品微生物检测。结果共检测11种细菌。只有大肠杆菌O157：H7有荧光信号，其余10种全无荧光信号，且与其他细菌无交叉反应，DNA灵敏度为64fg，菌液灵敏度为59cfu／ml或2cfu／PCR反应体系。应用改良分子信标实时PCR反应体系检测10株O157：H7均出现特异的荧光信号，无干扰。对89份食品样品进行检测，5份O157：H7实时PCR阳性，其余样品为阴性，检测仅需2h。5份阳性样本，经传统方法培养，有3份检出大肠杆菌O157：H7。结论改良分子信标实时PCR检测体系快速、灵敏度高，特异性强，可用于大肠杆菌O157：H7食物中毒的快速诊断和食品微生物检测，为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

抽检与送检桶装纯净水微生物污染的调查研究

目的研究分析抽检与送检桶装纯净水微生物污染的结果差别和卫生质量。方法对深圳市桶装纯净水的各种产品随机抽检280份；商场、超市和企业等主动送检桶装纯净水各种产品121份，采用国标标准进行微生物指标的各种检测，按国家微生物卫生标准评价。对二组结果进行比对分析研究。结果抽检的280份桶装纯净水合格率为74．3％；送检的桶装纯净水合格率为90．1％，经统计学处理两者有统计学意义（x^2=12．73，P〈0．001）。结论抽检桶装纯净水合格率明显低于送检桶装纯净水的合格率，且两者的差别有统计学意义，说明桶装纯净水存在潜在的安全隐患，并威胁着市民的饮水安全。     

腹泻病病原学研究临床价值

目的:探讨引起腹泻的病原微生物种类和构成特点及其流行情况.方法:采集腹泻患者粪便,进行致泻性大肠埃希菌、沙门菌、志贺菌、空肠弯曲菌和弧菌培养鉴定和血清定型检测;对其中水样便且病原菌检测阴性的标本进行轮状病毒、诺沃克病毒、肠道腺病毒和星状病毒荧光PCR检测.结果:在2 627份粪便标本中,共检出肠道病原菌257株,其中致泻性大肠埃希菌142株(55.3%),副溶血弧菌97株(37.7%),沙门菌17株(6.6%),志贺菌1株(0.4%);未检出霍乱弧菌和空场弯曲菌;5份标本同时检出2种病原菌.在668份病原菌检测阴性的水样便标本中,有274份检出肠道病毒,其中诺沃克病毒180份(65.7%),轮状病毒77份(28.1%),星状病毒15份(5.5%)和肠道腺病毒2份(0.7%);4份同时检出轮状病毒和诺沃克病毒.结论:腹泻病原微生物类型复杂多样,以致泻性大肠埃希菌和诺沃克病毒感染居多,加强腹泻病原微生物的常规检验对腹泻病的病因诊断和治疗有重要临床价值.     

一起食物中毒事件的快速诊断与病原分析

目的：同时应用传统细菌培养方法和改良分子信标方法检测食物中毒致病菌,为突发事件现场的调查处理及患者的治疗提供信息。方法：依据中华人民共和国国家标准《食品卫生微生物学检验》、广东卫生防疫《病原微生物学检验常规》和改良分子信标方法进行检测。结果：15份食品工人肛拭子及3份患者呕吐物均未检出致病菌。在111份患者肛拭子中,66份检出肠炎沙门菌,检出率为59.46%。37份可疑食品和剩余食品中5份检出肠炎沙门菌,18份生产加工环境样品中1份检出肠炎沙门菌。结论：此起食物中毒是面包厂在生产加工过程中糕点食品污染肠炎沙门菌而引起。改良分子信标方法能够快速准确的为传统方法提供检测方向信息,以及为现场疫情处理提供实验室依据。需要进一步加强食品卫生监督管理,定期对食品从业人员进行培训及健康体检,以提高食品安全意识。