食品中产气荚膜梭菌α毒素基因快速检测方法的研究

目的建立分子信标荧光PCR体系检测产气荚膜梭菌的快速检测方法,应用于食物中毒快速诊断和食品微生物检验。方法根据GenBank公布的保守序列,针对α毒素基因设计一对引物和分子信标探针,用FAM荧光剂标记探针的5’端,并进行特异性和灵敏度分析,同时以10种细菌作对照。结果分子信标荧光PCR反应体系检测10种细菌,只有产气荚膜梭菌出现特异荧光信号,其他均无荧光信号,而且与其他细菌无交叉反应。对40份食品样品进行检测,3份产气荚膜梭菌PCR阳性,其余样品为阴性,检测仅需2 h。3份阳性样本经传统方法培养,2份有检出产气荚膜梭菌。结论分子信标荧光PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于产气荚膜梭菌食物中毒的快速诊断和食品污染物及感染性腹泻等监测工作中,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。     

多柔比星对大鼠心肌Na+-K+泵活性及α亚基的影响

 目的 探讨心衰后大鼠心肌的Na+-K+泵活性及其α亚基的变化。方法 建立大鼠多柔比星（adriamycin,ADM心衰模型。以酶解法急性分离大鼠左室心肌细胞,以膜片钳技术记录Na+-K+泵电流,并以Western blot技术检测Na+-K+泵α亚基的表达。结果 ADM致大鼠心衰后Na+-K+泵电流密度显著下降,由（0.507 0 ±0.062 97 pA/pF降到（0.210 6±0.048 90 pA/pF,且拟合曲线显示主要为高亲和力泵发生了改变,其K值由6.74×10-8 mol·L-1升至2.97×10-7 mol·L-1;Western blot检测结果也进一步表明低亲和力α1亚基蛋白表达无明显改变,而高亲和力α2亚基蛋白表达则明显下降。结论 心衰可通过减少Na+-K+泵高亲和力α2亚基表达而降低大鼠心肌Na+-K+泵活性。     

哇巴因对心肌细胞钙瞬变及收缩力的作用

目的检测哇巴因对正常大鼠和阿霉素所致心衰大鼠左心室肌细胞的收缩力、钙瞬变和舒张期钙影响。方法腹腔注射阿霉素制备大鼠心衰模型,以改良的Langendorff装置分离心肌细胞,负载Fluo-4钙荧光染料后采用IonOptix可视化细胞动缘探测系统检测哇巴因对大鼠心肌细胞收缩功能、舒张期钙及钙瞬变的变化。结果哇巴因可浓度依赖性增加正常大鼠心肌细胞收缩力和钙瞬变,3×10-7 mol·L-1哇巴因即明显增加收缩力和钙瞬变,但对心衰大鼠心肌细胞,1×10-5 mol·L-1哇巴因才明显增加心肌细胞收缩力和钙瞬变;哇巴因也可增加正常大鼠和心衰大鼠心肌细胞舒张期钙。结论哇巴因能够增加心肌细胞收缩力、钙瞬变和舒张期钙,阿霉素所致心衰大鼠心肌细胞较正常细胞不敏感。     

伤寒、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌多重荧光PCR方法的评估及临床应用

目的建立和评估多重荧光PCR方法快速鉴定伤寒、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌的方法,并应用于临床血培养样品的检测。方法收集留取医院的可疑伤寒患者的血培养标本,用多重实时荧光PCR法和传统分离培养法同时进行分离鉴定,分析比较双盲实验结果,评价多重实时荧光PCR方法的灵敏度、特异度等检测性能指标。结果共检测临床样本538例,多重荧光PCR法检出阳性218例,比传统培养法多检出6例;阴性320例,与传统培养法一致。以传统检测方法为金标准,多重荧光PCR方法的灵敏度为100%,特异度为98.2%。结论建立的多重荧光PCR检测方法操作简便,可快速、特异、灵敏地检测出伤寒、甲、乙、丙型副伤寒沙门菌,可以应用于临床标本的早期快速分型诊断,提升重大传染病的应急处置能力和监测能力。     

实时荧光PCR同时检测丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌方法的建立和应用

目的建立丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的实时荧光PCR快速检测方法,用于沙门菌属内的分型鉴定。方法根据GenBank公布的丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立实时PCR检测方法。结果检测体系灵敏度高,纯DNA和菌液的最低检出限分别可达10fg和20CFU/反应体系;特异性好,对71株细菌的检测符合率达100%。20株沙门菌采取盲号模拟血培养标本进行血培养检测及鉴定,检出5株丙型副伤寒沙门菌和4株猪霍乱沙门菌,与试验的菌株相符。70份食品中用实时荧光PCR同时检测丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌均为阴性,而用传统方法分离培养未检出。结论建立的实时PCR检测方法可以快速、特异、灵敏地检测出丙型副伤寒沙门菌和猪霍乱沙门菌。     

深圳地区致泻性大肠埃希菌多位点可变数目串联重复序列分析分型方法的研究

目的通过比较多位点可变数目串联重复序列分析（MLVA）和脉冲场凝胶电泳（PFGE）分型方法,探索更优的致泻性大肠埃希菌（DEC）的快速溯源方法。方法本研究采用筛选的可变数目串联重复序列（VNTR）位点,对DEC菌株进行MLVA分型,并将该方法与金标准PFGE进行比较评估。结果PFGE分型方法将58株DEC分为43种带型,其中3种带型成簇,多样性指数（DI）值为0.965。 MLVA分型方法将58株菌分为42种带型,4种型别成簇,DI值为0.955。 此外,2种方法对2起暴发菌株的分型结果一致。结论MLVA方法与PFGE方法对深圳地区的58株DEC菌株的分型能力差异无统计学意义,但MLVA具有快速、简便、通量高的特点,使得MLVA优于PFGE分型方法,在疾病监测、疾病暴发调查中将会发挥重要的应用价值。     

M肉汤法在沙门菌血清分型中的应用

目的建立一种简便快捷的沙门菌H抗原诱导方法,用于沙门菌的血清分型。方法将沙门菌接种于M肉汤过夜培养进行鞭毛诱导,吸取少量再次进行M肉汤2次诱导,取诱导后的肉汤进行沙门菌血清型鉴定,同时用血平板-滤纸条搭桥法和软琼脂法比对。结果 30株沙门菌同时用3种不同的方法诱导,应用M肉汤法一般1~2次都能鉴定出来,效果比搭桥法和软琼脂法好。应用M肉汤法对369株沙门菌进行血清分型,诱导1次的分型率为81.30%,诱导两次的分型率为97.02%。结论 M肉汤法操作简单、方便、成本低,诱导效果好,适合用于沙门菌血清分型鉴定。     

2007—2010年深圳市细菌性食物中毒检测结果分析

目的调查分析深圳市细菌性食物中毒的发生情况和规律,为细菌性食物中毒的预防控制提供科学依据。方法对2007—2010年深圳市疾控系统采集的可疑食物中毒样本进行致病菌检测并进行描述性统计分析。结果共分析892份可疑食物中毒样本（包括可疑食品、患者肛拭子、手拭子、呕吐物以及食品操作间物品涂抹样等）,其中致病菌的检出率为17.04%;152份阳性样品中,菌种分布依次为副溶血弧菌（52.63%）、沙门菌（32.24%）、金黄色葡萄球菌（9.21%）、蜡样芽孢杆菌（5.23%）、致泻性大肠埃希菌（0.66%）;在各种不同类型的样品中,肛拭子致病菌的检出率最高（38.5%,121/314）。结论深圳市细菌性食物中毒致病菌的检出率稳定且低于国内其他城市,主要致病菌为副溶血弧菌。     

深圳市食源性疾病监测中沙门菌的耐药性分析

目的:了解深圳市食源性沙门菌耐药状况及耐药谱情况。方法:用纸片扩散法(K-B)检测抗生素耐药性,结果根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)相关文件标准判断。结果:69株沙门菌受试,九类药物23种抗生素药敏显示,抗生素最敏感(100%)为美罗培南、亚胺培南、头孢西丁、头孢他啶、头孢噻吩、头孢噻肟/克拉维酸、头孢吡肟、阿米卡星等。最耐药前五种抗生素依次为奈啶酸(56.52%)、复方新诺明(47.83%)、四环素(47.83%)、甲氧苄啶(43.48%)、链霉素(43.48%)。结论:食物中沙门菌对碳青霉烯类和头孢菌素类抗生素敏感;对喹诺酮类磺胺类四环素类和氨基苷类等抗生素耐药性较高。因此应限制抗生素在食源性动物饲养过程中的应用,保障食品的安全。     

深圳市熟肉制品致病菌监测结果分析

目的:了解深圳市熟肉制品受致病菌污染的状况,为食源性疾病的预防和控制提供科学依据。方法:对酒店、超市和市场禽类熟肉制品随机采集360份样品,依据国标方法、荧光PCR方法及全自动微生物分析仪,对上述样品进行致病菌检测。结果:360份样品共检出致病菌38株,检出率10.56%,其中沙门菌4株、金黄色葡萄球菌32株、单增李斯特菌2株。酱卤类、烧烤类、白切类熟肉制品检出率分别为11.66%、3.33%、16.67%。结论:深圳市熟肉制品受致病菌污染严重,以金黄色葡萄球菌、沙门菌和单核李斯特菌污染为主;白切类熟肉制品受致病菌污染最为严重为16.67%;其次是酱卤类为11.66%;最后是烧烤类为3.33%。说明酒店、超市熟肉制品存在很大问题,应加大对熟肉制品监管力度,保证食品质量,确保消费者健康。