香港海鸥形菌分型方法建立与病原学分布调查

目的通过对深圳市感染性腹泻患者标本与外环境水产品标本的检测,掌握深圳市香港海鸥形菌病原学特征及分子分型。方法用传统方法和荧光PCR法同时检测香港海鸥形菌,阳性菌株用K-B法做药敏试验和PFGE分子分型。结果在329份淡水鱼中共检出7份阳性标本,579份腹泻病人标本未检出。该菌对临床常用的24种抗生素耐药性检测结果显示,对氨苄西林、头孢他啶、头孢噻吩、头孢噻腭、头孢哌酮、头孢曲松耐药,头孢西丁为中介,其余均为敏感。7株香港海鸥形菌生化反应阳性的,荧光PCR结果均为阳性。PFGE分子分型表明7株菌不具有同源性。结论本文建立一套完整的对该菌的分离鉴定、基因诊断和PFGE分子分型方法;了解深圳地区主要流行菌型,预测深圳地区该菌的流行趋势,为应对食源性疾病突发事件和水产品安全问题做好技术储备。     

深圳市酒店三文鱼和北极贝生食中致病菌污染状况调查

目的了解酒店、日韩料理餐厅冰鲜海产品（三文鱼、北极贝）的微生物污染状况,为预防病原微生物食物中毒提供科学依据。方法抽取酒店、日韩料理餐厅、超市商场等冰鲜海产品共168份．依照国家标准方法和荧光PCR方法对样品进行检测。结果168份样品中共检出不合格大肠菌群101份,阳性率为60．12％：菌落总数29份,阳性率为17．26％;致病菌：检出副溶血性弧菌5份,阳性率为2．98％;金黄色葡萄菌38份,阳性率为22．62％。沙门氏菌和志贺氏菌致病菌未检出。结论冰鲜海产品三文鱼和北极贝受到病原微生物的污染相当严重,各部门要加强监管监测,积极做好预防控制工作,减少食原性食物中毒发生的危险。     

1例罕见的新生儿B群流脑死亡病例的实验室结果分析

目的 明确诊断并分析l例新生儿疑似流行性脑膜炎死亡病例可能的传染来源和传播途径.方法 收集死亡病例的血液标本及其密切接触者的咽试子标本并进行菌株的分离培养和分型及药敏试验.结果 死亡病例的血标本及其密切接触者患儿父亲咽试子标本均分离到B群脑膜炎奈瑟菌菌株,2株菌株对氨苄西林、环丙沙星、利福平、氯霉素、头孢噻吩、红霉素及四环素均敏感,对磺胺类药耐药.结论 根据该病例的特点和实验室检测结果,判断该病例为B群脑膜炎奈瑟菌引起的死亡病例.     

深圳市甲型副伤寒PulseNet数据库的建立与应用

目的建立深圳市甲型副伤寒PulseNet数据库,用于甲型副伤寒的实时监测和分子流行病学调查。方法采用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术,对深圳市2002-2007年散发和爆发的243株甲型副伤寒沙门菌的染色体DNA进行酶切电泳,用BioNumerics软件对PFGE分型图谱电子化数据分析,建立分子分型数据库。结果深圳市甲型副伤寒菌株各年间差异较小,用Xba酶切仅呈现6种PFGE图谱。同一起甲副暴发的临床分离株具有相同的PFGE图谱。各区和各年代的分离株都存在有相同的PFGE带型。结论深圳市甲型副伤寒沙门菌变异较小,呈长期流行趋势,甲型副伤寒PulseNet数据库的初步建立,对直观地分析各起疫情之间的相互关系,对疫情的控制和传染来源的追踪具有重要意义。     

一起蜡样芽孢杆菌10型引起食物中毒的快速诊断与分子分型研究

目的对引起一起食物中毒的蜡样芽孢杆菌进行快速诊断和分子分型。方法对中毒人员的呕吐物、肛拭子、可疑食品等样品用国标方法进行实验室检测,同时采用自主建立的荧光PCR方法进行快速检测。所分离的菌株PCR扩增vrrA基因多态性位点,产物进行基因双向测序和比较分析。结果在10份呕吐物、肛拭子、可疑食品中用传统方法和荧光PCR方法同时检出8份蜡样芽孢杆菌阳性,生物分型为10型。PCR测序结果显示它们有99%的同源性。结论这是一起食用了由蜡样芽孢杆菌10型污染的食品引起的呕吐型食物中毒,用蜡样芽孢杆菌呕吐毒素基因cesB为检测靶标的荧光PCR方法可以快速灵敏地对此类食物中毒进行初步诊断。以vrrA基因为多态性位点的PCR基因测序方法可用于蜡样芽孢杆菌的分子分型和食品污染源的准确追踪。     

深圳市部分酒店的空调系统微生物污染情况监测

目的 了解深圳市部分酒店的空调系统微生物污染情况，以便对空调系统采取消毒和卫生管理措施。保障空调环境卫生。方法 采用对酒店各部不同类型空调进行抽样调查，检测空调系统过滤网、冷却水、空气中的细菌总数、霉菌总数以及军团菌、溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、芽孢杆菌等项目。结果 中央空调冷却水军团菌污染严重，阳性率为65．66％。不同类型空调系统集尘过滤网的细菌总数、霉菌总数超标率达33.8％，金黄色葡萄球菌，溶血性链球菌未检出阳性，而芽胞杆菌检出率较高为70.87％；在空气积尘中细菌、霉菌总数超标率较低，金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、芽胞杆菌检出率较低。结论部分酒店空调系统污染较为严重，必须引起注意，加强卫生消毒措施及管理。     

蜡样芽胞杆菌DNA分子分型研究

目的 建立蜡样芽胞杆菌分子分型方法，用于蜡样芽胞杆菌食物中毒的快速溯源。方法15株蜡样芽胞杆菌进行生化分型，同时进行vrrA基因PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染检测PCR扩增产物，所有PCR扩增产物进行序列分析，并用ClustalW(ebi．ac．uk)分析软件对DNA序列进行同源性比较。结果传统生化分型：15株蜡样芽胞杆菌中12株可分为3个型，3株不能分型；主要生化型为1型、2型和4型。分子分型：15株蜡样芽胞杆菌都可分为7个型。结论、vrrA基因可作为蜡样芽胞杆菌分子分型的一个多态性遗传标记。蜡样芽胞杆菌分子分型方法与传统生化分型方法相比，将传统生化分型所需的48h甚至更长时间缩短到5h，具有简便快速准确的优点，可做到快速溯源。     

高通量荧光PCR组合方法鉴定16种金黄色葡萄球菌肠毒素的方法建立及评估

目的 建立一种高效、特异的荧光探针熔解曲线方法，用于鉴定16种金黄色葡萄球菌肠毒素。 方法 根据金黄色葡萄球菌肠毒素SEA ~ SEQ特异基因序列设计不同杂交连接探针，建立金黄色葡萄球菌肠毒素检测体系，评估其最低检出限、特异度、可重复性等指标。 与普通PCR方法比较，采用荧光探针熔解曲线方法对本实验室的158株食物中毒金黄色葡萄球菌进行检测，评估新方法的灵敏度和特异度。 结果 荧光探针熔解曲线方法最低检出限为0.80 ~ 2.15 ng/μl，特异度为100.0%，无交叉荧光信号产生，变异系数＜1%。 与普通PCR方法比较，新方法的灵敏度为95.4%，特异度为100.0%，Kappa值为0.88。 结论 荧光探针熔解曲线技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素的方法可覆盖金黄色葡萄球菌16种肠毒素，具有快速、准确、特异性高的特点。      

应用实时荧光PCR法快速检测从业体检人群肠道致病菌结果分析

目的分析与评价实时荧光PCR法快速筛查从业人员沙门菌、志贺菌的带菌情况。方法收集从业人员肛拭样本,用实时荧光PCR法进行快速筛查,采用常规细菌培养法作为标准方法进行验证和血清分型,分析其灵敏度及特异性。结果在24598份样品中,实时荧光PCR法检出沙门菌阳性18份,志贺菌阳性11份．阳性率分别为0．732‰和0．447‰。通过细菌培养法验证及分型,14份标本确认为沙门菌阳性,阳性率为0．569‰,分布于A、B、C、D、E、F6个群11个血清型;6份标本确认为志贺菌阳性,阳性率为0．244‰,分布于B、C、D3个群5个血清型。实时荧光PCR法筛查沙门菌、志贺菌的灵敏度均为100．00％。特异性均为99．98％。结论与传统细菌培养法相比．实时荧光PCR法简便、快速,可提高检测的灵敏度和特异性,减少工作量,适用于肠道致病菌的快速筛查。     

非结核分枝杆菌耐药性特征及聚合酶链式反应检测方法的建立

目的建立一种快速鉴别非结核分枝杆菌的聚合酶链式反应方法,并与直接测序法比较,探讨该方法的可行性。方法根据分枝杆菌16~23srDNA间隔区序列设计引物,建立检测分枝杆菌的PCR分型方法,并利用该技术对5例临床分离株进行PCR扩增,借助凝胶电泳分析和直接测序分析进行临床分离株的分子分型。结果 5例分离株均耐利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、丁胺卡那、环丙沙星、左氧氟沙星、硫异烟胺、力克肺座和比嗪酰胺,为多重耐药菌株。PCR扩增结果和直接测序结果相吻合,均为脓肿分枝杆菌。结论分枝杆菌高度保守的16~23srDNA间隔区序列可做为分枝杆菌鉴定的靶基因,建立快速、特异、敏感的PCR扩增体系,且从基因水平上可对分枝杆菌进行分子分型,为临床治疗提供快速、准确的实验数据。