DIFA检测非放射性斑点印迹技术的探讨

为提高分子生物学的实验效率和节省昂贵的试剂，将核酸分子或蛋白质分子预先结合于硝酸纤维素膜（ＮＣＭ）上，应用自制的ＤＩＦＡ装置检测非放射性斑点印迹。结果表明：此技术可快速检测生物活性试剂的效价及工作浓度；选择研究样本及试验条件；鉴定探针灵敏度等。     

维生素C和烟酰胺对原代培养人角质形成细胞的影响

目的 探讨维生素C和烟酰胺对原代培养人表皮细胞的增殖和分化的影响，为临床应用提供实验基础。方法 取正常人手术切除的包皮，应用热溶素分离表皮与真皮，以胰蛋白酶及EDTA分离表皮细胞为单个细胞。以NIH-3T3作为饲养细胞，单个表皮细胞培养于表皮完全培养基内。将培养的人表皮细胞等分为三份；一份加维生素C，一份加烟酰胺，另一份为完全培养液对照组。应用免疫组化和蛋白质免疫斑点印迹阵列技术检测C-myc、细胞周期蛋白D1、丝聚合蛋白及内披蛋白的表达情况。结果 各组集落数不同，维生素C组 > 对照组 > 烟酰胺组，维生素C组的集落形态与对照组近似，而与烟酰胺组差异较大。与对照组相比，维生素C组C-myc、细胞周期蛋白D1、丝聚合蛋白及内披蛋白的表达均上调（P 值均 < 0.05）；烟酰胺组丝聚合蛋白表达显著上调（P < 0.01），内披蛋白表达变动不明显（P > 0.05），而C-myc表达下调（P < 0.05）。结论 维生素C对人角质形成细胞的增殖和分化均有促进作用。烟酰胺对人角质形成细胞的分化有促进作用，但对其增殖却有抑制作用。     

槲皮素对小鼠体内和体外NIH-3T3细胞的抗氧化作用及其机理

目的 比较槲皮素对小鼠体内和体外H2O2处理前/后的NIH-3T3细胞抗氧化效应的差异并探讨其作用机理。方法 将NIH-3T3细胞分为4组,槲皮素前保护组（Qb）：槲皮素后保护组(Qa)：H2O2组 (H2O2)和对照组(C)。 用试剂盒检测细胞内T-AOC、SOD、GSH-Px、GSH、MDA、NOS和NO2-/NO3-的水平;MTT和TUNEL法检测细胞凋亡率和生存率;免疫印迹和免疫组化技术检测细胞的cyclin D1、PTEN、NF-kB、HSP-70、Bcl-2、Bax、 及caspase-3的表达。另将20只Wistar大鼠等分为对照组和实验组,检测槲皮素灌胃前、后1、2及24h血浆内T-AOC、SOD、GSH-Px、GSH、MDA、NOS和NO2-/NO3-的水平。结果H2O2组细胞凋亡率增高,cyclin D1、PTEN及Bcl-2的表达下调;Bax、HSP-70、NF-kB及caspase-3的表达上调;T-AOC,SOD,GSH-Px及GSH水平降低,NOS、NO2-/NO3-及MDA增高。动物灌胃后1h/2h血浆中T-AOC、SOD、GSH-Px、GSH,NOS及NO2-/NO3-的水平增高,MDA降低;24h后基本恢复。结论 槲皮素在体内外皆可通过调节抗氧化酶体系发挥抗氧化作用,其效应依据H2O2处理与否和处理前/后等细胞的异质性而呈现一定差异。     

人胎儿胸腺内CD80和癌胚抗原的表达及定位

目的 探讨人胎儿胸腺内CD80和癌胚抗原(CEA)的表达水平及定位与胎儿发育的关系. 方法自附属医院妇产科收集流产死亡的胎儿12例,其中,小于4个月的4例列为早期,5个月的8例列为晚期.早晚期标本各分为两等份,一份制备冷冻切片进行HE染色、α-醋酸萘酯酶(ANAE)组织化学染色、CD80及CEA免疫组织化学染色,另一份以Trizol提取蛋白后进行CD80的免疫印迹和CEA的酶联免疫吸附测定(ELISA)检测. 结果 早期胎儿胸腺髓质发育差,晚期胎儿胸腺CD80阳性网状上皮细胞可分为6型:Ⅰ型扁平细胞分布于被膜内面和小梁表面;Ⅱ型呈小星形分布于皮质内;Ⅲ型及Ⅳ型呈扁平状,位于皮髓质交界处;Ⅴ型呈大星形状,突起多而细长相连成网状;Ⅵ型位于哈氏小体.在胎儿胸腺髓质网孔处可见ANAE点型(CD+CD8-)和散粒型(CD4-CD8+)细胞各呈丛状分布.早期组CEA阳性分布于髓质上皮细胞和哈氏小体,晚期组CEA阳性更集中于哈氏小体.CD80的免疫印迹和CEA的ELISA检测皆显示晚期组表达高于早期组. 结论 研究结果提示,人胎儿胸腺内CD80和CEA的表达及定位与胎儿胸腺细胞的发育及功能密切相关.     

冰冻切片抗体在石蜡切片免疫组化中的应用

目的：探讨经抗原系列修复后冰冻切片抗体应用于石蜡切片的免疫组化技术。方法：在常规免疫组化的基础上,于Triton X-100处理后,用0．1mol／L的甘氨酸4℃过夜或0．2mol／L的甘氨酸室温2h。0．01mol／L枸橼酸缓冲液pH6．095--98℃微波10min进行组织抗原修复。观察比较GDNF,Caspase-3和：XRCC1冰冻切片抗体在石蜡切片中的免疫反应性(IR)。结果：经过上述条件处理后,石蜡切片中均出现3种冰冻抗体的IR阳性。其中GDNF IR反应性优于Caspase-3和XRCC1-IR,但3种冰冻抗体在冰冻切片或滴片中的IR均高于石蜡切片。结论：石蜡切片经系列抗原修复后免疫反应有一定改善,但与应用的抗体类型有关。     

ACUPUNCTURE EFFECTS ON INDUCIBLE NITRIC OXIDE SYNTHASE mRNA, iNOS PRODUCT AND HEAT SHOCK PROTEIN IN PERITONEAL MACROPHAGES OF THE MOUSE

Inourpreviousexperimentsitwasfoundthatacupuncturecouldcontributetoimmunoreg-ulationandimmunefunctionin.i..[l].Nitricoxide(NO)actingasanubiquitousmessengermoleculeandneurotransmitterplayedandessen-tialroleinrelaxingvesselsandcytotoxicitya-gainstinvadingmic…     

野生型DNA聚合酶β转染Eca-109细胞后增变基因表型变化

目的:探讨野生型DNA聚合酶β(polbeta)转染人食管癌Eca-109细胞后对其增变基因表型的效应.方法:将经过鉴定的重组pcDNA 3.1质粒(插入野生型, wt)-polbeta转染培养的人食管癌Eca-109细胞.将Eca-109细胞分为3组:转染实验组(E)、空质粒转染对照组(C1)和未转染对照组(C2).应用原位杂交技术显示wt-polbeta和wt-p53的杂交信号,免疫细胞化学染色显示POLB-免疫反应性(IR)和多药耐受(MDR1)-IR,免疫印迹显示wt-polbeta和突变(mt)-polbeta的带型,细胞化学技术检测各组细胞的增殖与分化细胞的比率.结果:polbeta免疫印迹结果显示E组呈现增强的wt-polbeta主带, C1、C2 组呈现很弱wt-polbeta主带和显著突变的(mt)-polbeta主带(P<0.01);polbeta免疫细胞化学结果显示E组的强信号定位于细胞核内,C1、C2 组信号皆很弱(P<0.01).E组的wt-polbeta及 wt-p53原位杂交的信号强于C1、C2 组(P<0.01).E组MDR1的免疫反应性和增殖与分化细胞的比率低于C1、C2 组(P<0.01).结论:wt-polbeta转染的Eca-109细胞呈现wt-polbeta及wt-p53表达上调而mt-polbeta及MDR1表达下调的增变基因表型减弱.     

RELATIONSHIP BETWEEN ACUPUNCTURE ANALGESIA AND MET- ENKEPHALIN OR DYNORPHIN

subjective: The effect of 4～5 Hz electroacupuncture (EA) on alterations of both met-enkephalin (MEK) and dynorphin (Dyn) in the patient plasma or mouse spinal cord and its relation with analgesic effect were studied. Methods: In acupuncture clinic 10 patients with acute pain were treated with 4 Hz EA at Zusanli(ST 36) and/or Hegu(LI 4) acupoints for 30 min. 20 BALB/C mice were randomly divided into 2 groups: a. EA group(n=10), treated with 4～5 Hz EA at bilateral “Zusanli“(ST 36) for 15 min; b. control group(n=10) treated with no EA, but also restrained for 15 min. Before and after EA or restraining acupoints, the pain threshold of the patients or mice was detected. 10 μI of the patient plasma before and after EA and each mouse spinal cord suspension, of the 2 groups were blotted onto nitrocellulose membrane (NCM) respectively. The protein dot blot signals were detected by immunoreactivity (IR) and using Shimadu TLC Scanner and analyzed statistically. Results: The results showed that an increase in patient plasma MEK-IR or Dyn-IR and a decrease in mouse spinal MEK-IR or Dyn-IR could be detected, and the alteration of plasma or spinal MEK-IR was more significant than that of plasma or spinal Dyn-IR. There was a positive correlation in alteration between plasma or spinal MEK-IR and plasma or spinal Dyn-IR with respective parallel levels in individuals. The increased plasma MEK-IR or the decreased spinal MEK-IR was positively or negatively correlated with the analgesic effect, while the correlation between plasma or spinal Dyn-IR and analgesic effect was insignificant. Conclusion: The results suggest that under lower frequency EA the met-enkephalin may play an important role in analgesia.     

8-Br-cAMP对Eca-109细胞凋亡的影响

目的：探讨8—Br—cAMP对人食管癌Eca—109细胞凋亡的影响及其相关基因表达的变化。方法：采用TUNEL法检测细胞凋亡,应用原位杂交、组织化学、免疫组织化学以及RNA和蛋白质斑点印迹技术相对定量,观察8—Br—cAMP对Eca—109细胞凋亡相关基因及凋亡效应分子表达的影响。结果：8—Br—cAMP作用48h后可显著诱导Eca—109细胞凋亡,并见到野生型(wt)p53及iNOS基因表达上调,bcl—2、c—myc基因表达下调,iNOS活性增强,Fas—IR减弱。结论：8—Br—cAMP通过调控凋亡相关基因及凋亡效应分子的表达,使之相互作用、相互协同,诱导人食管癌Eca—109细胞的凋亡。其中,wtp53在该凋亡的诸多因素中起着关键作用。     

电针对大鼠“足三里”穴区皮肤及胃幽门部APUD系的影响

电针对大鼠“足三里”穴区皮肤及胃幽门部ＡＰＵＤ系的影响丰艳，吴景兰，王一菱河南医科大学组织学胚胎学教研室郑州４５００５２关键词电针；穴区皮肤；胃幽门部；ＡＰＵＤ系应用免疫组化技术观察了电针对大鼠“足三里”穴区皮肤及胃幽门部ＡＰＵＤ细胞（包括肥大细胞）...