逆转录病毒携带白细胞介素-12转染树突状细胞体外诱导特异免疫杀伤肝癌细胞

目的探讨逆转录病毒携带白细胞介素(IL)12转染树突状细胞(DC)体外诱导免疫杀伤肝癌细胞的效能及其机制。方法感染指数(MOI)为100,含IL12的重组逆转录病毒修饰肝癌患者外周血DC(DCIL12),酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测DCIL12(5×103个/ml)培养上清中IL12和γ干扰素(IFNγ)水平,以冻融肝癌细胞株HepG2(1×107个/ml)所获得的肿瘤相关抗原(TAA)刺激DCIL12,MTT法检测TAA负载的DCIL12刺激同源T淋巴细胞(1×105个/ml)增殖分化能力,细胞毒试验检测DCIL12诱导的细胞毒T淋巴细胞(CTL)及其上清液对HepG2肝癌细胞株杀伤作用,ELISA法检测CTL上清液IFNγ水平。结果DC经IL12基因修饰后48h分泌高水平IL12(24.35±5.40)ng/L及IFNγ(725±30)ng/L,均显著高于未转染DC组(P<0.01及P<0.05)。DCIL12诱导的CTL及其上清液对HepG2均有显著杀伤作用,杀伤率显著高于未转染DC组,分别为(82.43±8.70)%vs(57.4±4.3)%(P<0.01)和(76.45±8.50)%vs(18.23±5.30)%(P<0.01),DCIL12诱导的CTL上清液IFNγ水平显著高于未转染DC组,分别为(1125.0±32.7)ng/Lvs(281.3±14.7)ng/L(P<0.01)。结论IL12基因修饰增强DC体外诱导自体T淋巴细胞产生特异性抗肝癌免疫,其机制与IL12基因修饰促进DC分泌IL12、增强T淋巴细胞活化及分泌IFNγ密切相关。     

小干扰RNA特异性抑制淋巴细胞T-bet表达的研究

目的 探讨体外转录法合成的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人淋巴细胞T-bet基因表达及功能的影响.方法 设计并合成4条siRNA(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3及siRNA-co),脂质体法转染淋巴细胞.转染后48 h收集转染后细胞,采用RT-PCR方法检测细胞T-bet mRNA的抑制率;酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测细胞上清液中IL-4和IFN-γ水平;将淋巴细胞与人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)共培养检测淋巴细胞对ECV304增殖的抑制作用.结果 转染后48h半定量RT-PCR的检测显示siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3转染后的淋巴细胞T-bet表达抑制率分别为(72.50±1.01)%、(5.40±0.63)%和(30.90±0.90)%,以siRNA-1转染后的淋巴细胞T-bet表达抑制作用最强(P＜0.05),其细胞上清液中IL-4水平最高,而IFN-γ的水平最低(P＜0.05),siRNA-1转染淋巴细胞对人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)增殖的抑制作用低于siRNA-2及siRNA-3.结论 siRNA可特异性抑制淋巴细胞T-bet基因的表达,从而为进一步研究siRNA在移植免疫耐受中应用提供了理论和实验基础.     

窦汉卿著作篇目考辨

探讨窦汉卿著作篇目演变过程.在总结参考前人研究成果基础上,通过对书目及相关著作的篇章分析,认为朱良能未得之篇目可能为针刺补泻法内容, 朱良能刊行之书包含经络、腧穴两部分内容,窦桂芳得<指南>一书包含针刺法的内容篇目,<针灸四书·针灸指南>之<附针灸杂说>也为窦桂芳摘录自<铜人腧穴针灸图经>,而且<针灸避忌太一之图序><冬至叶蛰宫说>应归于<附针灸杂说>之内.     

透穴刺法的古代文献源流与问题探讨

金元医家窦汉卿为透穴刺法初创者已为学界共识,本文从《窦太师针经》入手梳理元明清时期多个针灸文本的透穴内容,探讨透穴刺法的体例、应用腧穴及基本要素、主治病症特点等,尝试从技术哲学角度辨析其与透刺法之关系.发现《窦太师针经》28例"透、向"体例之透穴刺法的规范和数量足以为后世模范,为元明清透穴刺法的源头文献,此后针灸文本基...     

1例索拉非尼治疗甲状腺癌致高血压亚急症的药学监护

目的探讨索拉非尼致高血压的特点、处理原则及药学监护。方法临床药师通过回顾国内外关于索拉非尼致高血压的文献,就此例患者的不良反应进行关联性分析,并实施药学干预和药学监护。结果此例患者在使用索拉非尼治疗近2周时出现高血压亚急症,及时停药并给予降压治疗后,患者血压可控制平稳,并继续索拉非尼治疗。结论临床药师应积极参与MDT模式下的靶向药物不良反应管理。发生索拉非尼相关性高血压时,应根据患者临床症状、高血压分级和用药史,采取合适的处理措施,最大化靶向药物的临床疗效。     

宗修英重用生白术治疗便秘的临床经验

对宗修英教授重用生白术治疗便秘的临床经验进行总结。宗老从《金匮要略》“若大便坚、小便自利者,去桂加白术汤”中受到启发,临床重用生白术（16～55g）配伍木瓜、甘草共用治疗脾虚证便秘,对脾气虚证便秘、脾气虚而致的湿阻证便秘、老年习惯性便秘有独特疗效。同时介绍了宗老临证对脾虚证望闻问切的辨证要点,如神疲倦怠、面白少华、气短声低、舌质淡苔白边有齿痕、口不渴、口渴不多饮或渴喜温饮、大便于或不于以及脉沉而虚弱或濡等。     

《窦太师针经》经外奇穴的整理方法、体例及价值

梳理《窦太师针经》中32个经外奇穴文献来源、整理方法与体例、价值与影响,其文献来源广泛,整理方法可以概括为传承有据、整合修齐;冠实以名、辨穴同异;据经奇穴、阐发新穴;排列有方、三法并用;文图互示、定位明确5个方面。《窦太师针经》依照经穴穴名、定位、刺灸法、主治病症的完整体例,首次对经外奇穴进行规范统一的整理,具有经外奇穴类文献史料价值、奇穴理论研究价值、经穴理论研究价值及临床实用价值,对元以后的经外奇穴专篇或专书直至今日的国家标准制定均产生了深远影响。     

IL-12基因修饰树突状细胞体外诱导免疫杀伤肝癌细胞

目的探讨IL-12基因修饰树突状细胞(DC)体外诱导免疫杀伤肝癌细胞的效能及其机制。方法IL-12基因修饰肝癌病人外周血DC(DC-IL-12),ELISA法检测DC-IL-12培养上清中IL-12和IFN-γ水平,以冻融HepG2所获得的肿瘤相关抗原(TAA)刺激DC-IL-12,MTT法检测TAA负载的DC-IL-12刺激同源T淋巴细胞增殖分化能力,细胞毒试验检测DC-IL-12诱导的细胞毒T淋巴细胞(CTL)及其上清液对HepG2肝癌细胞株的杀伤作用,ELISA法检测CTL上清液IFN-γ水平。结果DC经IL-12基因修饰后48h分泌高水平IL-12(24·35±5·4)pg/ml及IFN-γ(725±30)pg/ml,均显著高于未转染DC组(P<0·01)。DC-IL-12诱导的CTL及其上清液对HepG2均有显著杀伤作用,杀伤率显著高于未转染DC组,分别为(82·43±8·7)%vs(57·4±4·3)%和(76·45±8·5)%vs(18·23±5·3)%(P<0·01),DC-IL-12诱导的CTL上清液IFN-γ水平显著高于未转染DC组,分别为(1125·0±32·7)pg/ml、(281·3±14·7)pg/ml(P<0·01)。结论IL-12基因修饰增强DC体外诱导自体T淋巴细胞产生特异性抗肝癌免疫,其机制与IL-12基因修饰促进DC分泌IL-12、增强T淋巴细胞活化及分泌IFN-γ密切相关。     

人共刺激分子B7-H3表达载体的构建及表达检测

目的：B7-H3作为B7家族的最新成员，其受体在活化的T细胞表面可被诱导表达，B7-H3对CD4＋和CD8＋细胞的生成均具有增加作用，并可选择性增加IFN-γ的生成。为将B7-H3基因转染入舌鳞癌细胞Tea8113中制备瘤苗。克隆人共刺激分子B7-H3基因，构建其真核表达载体，并检测B7-H3基因在Tea8113中的表达。方法：从淋巴细胞中提取RNA，用RT—PCR方法将B7-H3的编码序列cDNA扩增。然后将该基因的编码序列插入真核荧光蛋白载体pEGFP—C1中，构建成最终的表达载体pEGFP—C1-B7-H3。运用脂质体方法将pEGFP—C1-B7-H3转染Tea8113细胞．转染24h后．荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达，RT—PCR检测B7-H3在该细胞中的表达。结果：从淋巴细胞中提取的RNA质量较好，经RT—PCR扩增出目的基因B7-H3，其全长大小为951bp。测序鉴定，该序列与GenBank中序列相同。转染pEGFP—C1-B7-H3载体的靶细胞Tea8113中，荧光显微镜下可见其表达绿色荧光蛋白，RT—PCR方法检测到目的基因B7-H3的-个215bp大小的eDNA扩增产物。结论：酶切及RT—PCR证实成功构建人B7-H3的真核表达载体pEGFP—C1-B7-H3，将该载体转染到Tea8113中，RT—PCR鉴定B7-H3基因在该细胞中表达。