利用hBMSCs在生物反应器中构建小口径血管的实验研究

目的采用改进的生物反应器系统,应用人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)构建小口径的组织工程血管。方法设计一套血管生物反应器系统,采用有限元方法对组织工程小血管托架材料进行分析,从而设计一套用于构建直径为2mm的小血管托架;收集人的原代骨髓基质干细胞进行体外扩增和培养,选用第3代细胞与聚羟基乙酸酯(PGA)复合后置于血管生物反应器中动态培养;培养4周后,对材料复合物取材,进行大体观察、HE染色、扫描电镜和平滑肌免疫组化等指标检测。结果血管色泽明亮,有一定的弹性,用镊子反复压下血管能够反弹恢复原样;细胞分泌的胶原基质排列较规则,免疫组化结果表明血管含有平滑肌弹性肌动蛋白的成分。结论改进的血管生物反应器能模拟血管的力学环境,并能利用hBMSCs成功构建组织工程化小血管组织。     

组织工程人工肌腱的研究进展

本对目前组织工程肌腱的研究成果作一综述，主要从细胞支架、种子细胞、生长因子、周期性张力等各方面进行了阐述。今后，对材料进行合理改进，使之能供给肌腱细胞最适合的生存环境，解决种子细胞的来源问题，加入适当的生长因子，并施以符合生理条件的周期性张力，组织工程化肌腱将成为修复肌腱缺损的一种理想而可靠的方法。     

组织工程化软骨组织形成的最佳细胞浓度和最佳形成时间的实验研究

目的研究探讨自体组织工程化软骨在动物自体内形成的最佳细胞浓度和最佳形成时间。方法取贵州香猪部分耳廓软骨组织体外消化分离软骨细胞,与可注射性生物材料Ｐｌｕｒｏｎｉｃ混合形成复合物,浓度为１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０×１０６／ｍｌ,将细胞－生物材料复合物接种于猪自体腹外侧壁皮下。第６周取材,分别称重,并作ＨＥ、ＳａｆｒａｎｉｎＯ染色,评价软骨组织形成的最适细胞浓度。参考上述实验结果,制成最适软骨细胞－生物材料复合物,接种到猪自体腹外侧壁皮下,分别在接种后第１、３、６、９和１５周取材,大体观察,并作ＨＥ、ＳａｆｒａｎｉｎＯ染色,确定软骨组织形成的最佳时间。结果在动物自体内形成的软骨组织,与正常软骨组织有相似的组织学特性,形成软骨组织最适细胞浓度为５０×１０６／ｍｌ,最佳形成时间是第６周。结论成功地利用组织工程技术在具有免疫功能的自体动物体内形成了软骨组织,并确定了软骨组织形成的最佳细胞接种浓度和接种的软骨组织形成最佳时限。     

应用组织工程化皮肤修复皮肤全层缺损

目的本研究旨在评价组织工程技术修复皮肤缺损的可行性。方法采用Ｙｏｒｋｓｈｉｒｅ猪,在其背部脊柱两侧做６个直径４ｃｍ的圆形全厚皮肤缺损,随机分为３组。第１组为空白对照,第２组仅置无细胞的ｐｌｕｒｏｎｉｃ;第３组分别用角朊细胞－ｐｌｕｒｏｎｉｃ、成纤维细胞－ｐｌｕｒｏｎｉｃ复合物置于创面上。第４、６周时取材,进行大体,组织学和透射电镜观察。结果４－６周时表皮和真皮间界面明显被上皮嵴和真皮乳头所分隔。对     

上肢静脉淋巴管搭桥治疗乳腺癌术后淋巴水肿的最新进展

上肢静脉淋巴管搭桥是一种从生理上解决乳腺癌术后淋巴水肿的手段,其发展依赖于超显微技术以及淋巴显像技术的提高。在此对上肢静脉淋巴管搭桥的发展和理论基础进行综述,并且从淋巴水肿程度的评定、微静脉淋巴管定位及吻合,这三个制约该技术发展的关键方面介绍和展望了新取得的进展。     

成骨细胞和支架材料复合的研究进展

应用骨组织工程技术修复大的骨缺损成为近年来的研究热点。而成骨细胞和支架材料在体外的复合,是组织工程研究的重点和难点之一。通过对材料的改性处理,增强其亲水性,提高骨诱导性;改进细胞种植方法等促进细胞复合后的增殖、分泌基质;引进应力应变作用,模拟体内微环境,促进蛋白质分泌等。就此方面的研究进展作一综述。     

血液流体动力学研究与生物反应器在组织工程血管构建的应用

利用生物反应器构建组织工程化血管是近年来诞生的一项新技术。本文综述了其理论基础即血液流体动力学的研究进展,生物反应器的原理、结构、应用及评估,同时提出存在的问题并展望其应用前景。     

组织工程化软骨分泌的可溶性因子对骨髓基质干细胞诱导作用的实验研究

目的 探讨组织工程化软骨分泌的可溶性因子是否能够单独诱导骨髓基质干细胞(bone marrow stromai cells,BMSCs)软骨分化.方法 体外培养扩增猪BMSCs、猪关节软骨细胞以及皮肤成纤维细胞,以5.0×107/ml的细胞终浓度分别接种于聚羟基乙酸/聚乳酸(PGA/PLA)支架,应用隔离池进行隔离共培养.以软骨细胞-材料复合物与BMSCs-材料复合物隔离共培养为实验组,以皮肤成纤维细胞-材料复合物与BMSCs-材料复合物隔离共培养为对照组1,以单纯BMSCs-材料复合物为对照组2.各组标本均于体外培养8周后取材,通过大体观察,组织学,以及免疫组织化学,RT-PCR等方法对新生组织进行评价.结果 隔离共培养8周后,实验组软骨细胞材料-复合物诱导的BMSCs-材料复合物形成的组织略有缩小,外观类似软骨组织,组织学检测见软骨陷窝样结构,SafraninO染色可见软骨特异性基质分泌,免疫组化显示有大量Ⅱ型胶原沉积,RT-PCR检测组织表达Ⅱ型胶原、Ⅸ型胶原、COMP、Sox9等软骨特异性基因,提示形成了较成熟软骨样组织;而对照组成纤维细胞材料复合物诱导的BMSCs-材料复合物和未经任何诱导的BMSCs-材料复合物形成的组织淡黄色,明显缩小、变薄、质地较软,组织学检测均未形成软骨陷窝样结构,主要为纤维性成分,各种软骨特异性相关检测均为阴性.结论 软骨细胞分泌的可溶性因子能够单独诱导BMSCs软骨分化,可能是软骨细胞形成的微环境中发挥诱导作用的主要因素.     

下颌骨节段性缺损修复组织工程中珊瑚支架残留率的研究

目的探讨骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cell,BMSC)复合珊瑚修复犬下颌骨节段性缺损支架的残留率。方法体外扩增、成骨诱导培养犬BMSC,分别将第二代细胞复合珊瑚后植入犬自体右侧3cm的下颌骨节段性缺损,术后12周(n=6),32周(n=6)取材后分别通过Micro-CT检测和大体、组织学图像分析骨修复、支架残留率和生物力学修复强度。结果 Micro-CT检测和组织学图像分析均表明,BMSC-珊瑚组组织工程骨12周时支架残留率显著高于32周(P0.05),而新骨随材料降解逐步成熟;生物力学显示术后32周力学强度显著高于12周(P0.05)。结论自体成骨诱导BMSC复合珊瑚形成的组织工程骨可良好修复犬下颌骨节段性缺损,随时间延长材料逐步降解,组织工程下颌骨进一步成熟。     

细胞间直接接触诱导BMSC软骨分化的初步研究

目的探讨细胞间直接接触是否能够单独诱导骨髓基质干细胞(Bone Marrow Stromal Cells,BMSC)软骨分化。方法体外培养扩增猪BMSC与关节软骨细胞,将1.0×106的细胞总量以2000r/min离心8min,制成细胞团块,即Pellet培养。实验分为5组,实验组:经0.5%多聚甲醛固定的软骨细胞与BMSC以1∶1混合;对照组1:同等数量的未经多聚甲醛固定的软骨细胞与BMSC1:1共培养制成Pellet;对照组2:同等数量的单纯软骨细胞制成Pellet;对照组3:同等数量的单纯BMSC制成Pellet;对照组4:同等数量的单纯经多聚甲醛固定的软骨细胞制成Pellet。每3天换液一次,每组3例。培养4周后,以大体观察、组织学、免疫组织化学、RT-PCR等方法对Pellet进行全面评价。结果培养4周后,实验组形成的Pellet,明显缩小,形状略不规则,颜色灰暗,柔软且没有弹性,组织学检测提示主要为纤维性成分及死细胞样结构,Safranin O染色及Ⅱ型胶原免疫组化均为阴性,RT-PCR检测未表达Ⅱ型胶原。对照组1和对照组2均形成圆盘状组织块,表面光滑,触之有一定弹性,组织学检测软骨陷窝形态规则,Safranin O染色及Ⅱ型胶原免疫组化均有阳性表达,RT-PCR检测Ⅱ型胶原高表达。对照组3的组织块明显收缩,呈褐色,无弹性。对照组4,细胞松散,不能形成Pellet。对照组3和4的各种软骨特异性相关检测均为阴性。结论细胞间直接接触不能够单独诱导BMSC向软骨分化,不是软骨细胞与BMSC混合共培养中发挥诱导作用的主要因素。