免疫学进展学术讨论——蛋白质抗原表位分析和基因免疫

1998年5月26日上海市免疫学会基础组召开了一次有关蛋白质抗原表位分析和基因免疫的学术讨论会,邀请复旦大学遗传学研究所副所长王洪海教授,上海医科大学免疫学教研室主任熊思东教授联系他们自己的工作,作了中心发言,参加会议人数众多,讨论十分热烈,颇有收获.现将主要讨论内容由主持人吴厚生教授整理如下.     

急性冠脉综合症与补体激活

目的： 评价各种类型急性冠脉综合症 (ACS) 病人补体激活的情况和补体激活与心肌损伤的关系。方法： 研究对象分为ACS组110例和正常对照组18人。 ACS组包括ST段抬高型心肌梗死（STEMI）51例，非ST段抬高型心肌梗死（NSTEMI）28例和不稳定性心绞痛（UA）31人。检测病人和正常对照健康人血浆C₃和C₄，CK-MB和肌钙蛋白T (TnT)浓度。结果： STEMI和 NSTEMI病人峰值C₃ 水平［分别为（1 525±302） mg/L和（1 516±289）mg/L］ 和C₄［分别为（423±123） mg/L和（396±68） mg/L］水平高于UA病人和对照组的C₃［分别为（1 275±172） mg/L和（1 072±196） mg/L,P<0.01］ 和C₄［分别为（356±91）mg/L和（182±73） mg/L,P<0.01］。UA病人的 C₃ ［(1 275±172） mg/L］和C₄ ［（356±91） mg/L］均高于对照组（P<0.01）。 ACS病人C₃和C₄水平在住院的前7 d均有明显的变化（P<0.01）。ACS病人峰值C₃和C₄水平与峰值CK-MB（分别为r=0.51和r=0.46，P<0.01）和肌钙蛋白T（分别为r=0.48和r=0.39，P<0.01）呈正相关。结论： ACS病人血浆C₃和C₄均明显升高。C₃和C₄水平与ACS的联系提示补体激活与心肌坏死有关。     

纳米壳聚糖纤维强化型磷酸钙骨水泥的研究

目的探讨纳米壳聚糖纤维强化型磷酸钙骨水泥的机械及生物相容性能。方法使用纳米壳聚糖纤维强化CPC骨水泥,通过MTT比色法及DAPI染色观察其生物相容性情况;通过三点弯曲试验检测其力学性能。结果三点弯曲试验表明经过壳聚糖纤维强化后的骨水泥的机械性能(17.3±4.5)MPa较之普通骨水泥有明显改善(5.3±1.4)MPa;并且这样的改进对材料的生物相容性没有影响,其毒性试验显示新材料相容性比值为(97.5±3.3)%。细胞增值实验3天吸光值分别为(0.237±0.025)、(0.451±0.015)、(0.726±0.032)。结论新型纳米壳聚糖纤维强化型骨水泥无细胞毒性,具有良好的机械性能及生物相容性。     

信号转导和转录激活因子6基因多态性与湖北汉族人变应性哮喘的相关性研究

目的　探讨信号转导和转录激活因子 (STAT) 6基因 3′非翻译区G2 96 4A位点多态性和第一外显子GT串联重复序列遗传多态性与湖北汉族人变应性哮喘易感性的关系。方法　用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术检测STAT6基因G2 96 4A位点多态性 ;用聚合酶链反应 短串联重复多态性 (PCR STR)技术对STAT6基因第一外显子微卫星进行分型 ,并将PCR产物克隆及测序鉴定 ;采用病例 对照法研究了 1 35例变应性哮喘患者和 1 0 9例对照。结果　 ( 1 )湖北地区汉族人群STAT6基因G2 96 4A位点基因型以GA型最为常见 ;哮喘组与对照组STAT6基因G2 96 4A位点的等位基因频率和基因型频率GG、GA、AA之间差异无统计学意义 (P >0 .0 5)。 ( 2 )STAT6基因第一外显子微卫星多态性共检出GT串联重复次数为 1 3、1 4、1 5、1 6的 4种等位基因 ;第一外显子微卫星的多态性检测出 1 3/1 4基因型在哮喘患者组和正常对照组相比差异具有统计学意义(P =0 .0 0 1 4 )。 ( 3)STAT6基因第一外显子GT二核苷酸串联重复序列多态性中 1 3 GT重复等位基因与 2 96 4A变异体之间存在连锁不平衡 (P =0 .0 0 0 0 2 1 8)。结论　STAT6基因 3′非翻译区G2 96 4A位点多态性与湖北汉族人哮喘易感性无明显相关性 ;第一外显子GT二核苷酸串联重     

重组MHCⅠ类分子K^b-EGFP分子的构建及表达

目的 构建绿色荧光蛋白标记的MHCⅠ类分子K^b(K^b-EGFP融合蛋白)，并在哺乳动物细胞中获得功能性表达。方法 RT-PCR的方法获得小鼠MHCⅠ类分子K^b cDNA，克隆入真核表达载体pEGFP-N1中EGFP分子的上游，脂质体转染COS-7细胞，G418加压筛选获得抗性重组细胞。荧光显微镜下观测重组分子的表达及胞内定位情况。结果 分子克隆的方法获得了预期的重组质粒，质粒经DNA序列测定证实阅读框无误，转染COS-7细胞后的抗性克隆胞浆内可以观察到明亮的绿色荧光，特征性地分布于细胞质膜，及核周、膜下的囊泡结构中。结论 所构建的K^b-EGFP融合蛋白在细胞内表达后具有MHCⅠ类分子的特征性分布，提示该重组分子具有野生型MHCⅠ类分子的生物学特性和胞内分布特征，为进一步深入研究MHCⅠ类分子胞内动态分布及分子功能提供了良好的细胞和分子模型。     

高频心电图(HFECG)及其临床应用简介

The Brief Introduction Of High Frequency Electrocardiogram and lts Application 1930年Reid,Groedel,等先后报告了常规心电图(ECG)上存在高频成分。1949年Gilford用阴极射线示波器发现了ECG的高频成份,1952年Langner用宽带阴极射线示波器快速扫描,快速拍照,记录标准十二导联ECG,对冠心病患者QRS波上的高频成份——切迹、扭结、顿挫作了观察并进行了系列研究和报道。此后,Irisaw,Brody,Wilson,Reynolds,Flowers,Sapoznikov,Raunio,Abboud等人开始将HFECG应用于临床。国内于1976年由陈达光教授首先介绍了HFECG技术的临床应用。八十年代后,HFECG的研究在国内逐渐发展起来,此后朱卫平、解景田、胡文尧、徐成斌、祝惠民、高书旺等教授对HFECG的产生机理及临床应用进行了大量研究。当时应用的检测手段大多沿用示波器观察及拍照记录或紫外线感光纸记录。1985年南京大学宁新宝等首先提出采用高保真放大和计算机技术对高频心电进行检测与分析(时域分析、频域分析)。1988年首次推出一套HFECG检测研究的微机系统,为临床诊断更广泛的应用提供了有效检测手段,该系统获国家专利(专利号92106124.3)并多次获奖。     

高频彩超对浅表软组织肿物的诊断意义

目的探讨高频彩超对浅表软组织肿物的诊断意义.方法对50例经手术、活检病理证实的体表软组织肿物高频彩超声声像图及彩色血流显像进行分析.结果46例为良性肿物,4例为恶性肿瘤;46例良性肿物中探及血流信号21例;4例恶性肿瘤全部探及丰富血流信号.结论高频彩超对软组织肿块的诊断具有较高临床价值,而且有助于鉴别诊断浅表肿物的良恶性度.     

Mg^2＋对离体灌流内皮素的大鼠心脏功能的影响

本实验在离体大鼠心脏灌流模型上,观察到10~(-9)mol/L内皮素灌流引起心肌挛缩,心功能降低,冠脉灌流量减少,以及心肌Ca~(2 )聚积,Mg~(2 )丧失等表现。灌流液含低镁(0.12mmol/L)时内皮素对心脏的上述作用显著增强,而在含高镁(4.8mmol/L)时明显减弱。Mg~(2 )影响内皮素对心脏作用的机制可能与其抑制心肌Ca~(2 )内流有关。实验结果提示避免缺镁,适当补充Mg~(2 )对于防治伴有循环内皮素水平增加的疾病或病理过程中的心脏损伤可能具有临床意义。     

广西大厂锡矿区职工外周血淋巴细胞姐妹染色单体交换(SCE)频率、染色体畸变率和微核率的观察

本文分析了38例大厂矿井下矿工、40例井上工作人员和27例非矿区正常人的外周血淋巴细胞SCE频率、染色体畸变率和微核率差异情况,发现井下矿工的SCE频率和染色体畸变率显著高于井上工作人员及非矿区正常人,微核率的差异无显著意义(P>0.05)。结合矿区肺癌流行病学调查结果对比分析,认为井下矿工长期接触的生产性粉尘中可能存在一些致癌物质,导致机体细胞遗传物质受到一定程度损伤。     

大肠杆菌胞内的共表达策略

大肠杆菌表达系统因其具有系统工具成熟、表达水平高、易于操作和成本低廉等优点而成为表达外源蛋白最常用的表达系统之一。但该系统在表达外源蛋白，尤其是真核蛋白时也存在不少缺陷，其中最主要的是由于大肠杆菌胞内缺乏帮助蛋白正确折叠的机制，所以相当一部分在大肠杆菌中表达的外源蛋白都聚集成沉淀，即以包涵体的形式存在，从而丧失了生物活性。因此，获得可溶蛋白成为在大肠杆菌系统表达外源蛋白的优选方案之一。目前较常用的办法是融合表达，即将融合伴体和目标蛋白连接成为一个融合蛋白进行表达。因为融合伴体通常是来源于大肠杆菌自身的蛋白，且具有分子伴侣的功能，因此，融合表达不仅可以提高蛋白表达量，还可以帮助目标蛋白正确折叠，从而获得可溶蛋白。