非酒精性脂肪肝病小鼠模型的建立及评价

目的 运用饲料及药物进行3种不同的建模方式,造非酒精性脂肪肝病(NAFLD)小鼠模型,比较3种模型的特点,为NAFLD药物筛选提供实验基础.方法 昆明鼠35只随机分成正常对照组(8只)、高脂饲料组(9只)、高糖高脂饲料组(9只)、高糖高脂饲料加氢化可的松组(9只).实验4周后,观察各组小鼠体质量、活动情况、肝指数、血清生化指标、肝脏病理学等变化情况.结果 相比正常对照组,高脂饲料组体质量增高最显著,高糖高脂饲料组次之,高糖高脂饲料加氢化可的松组体质量低于正常对照组(P<0.05);3种模型肝指数均高于正常组(P<0.05);血糖、血三酰甘油水平增高,肝脏三酰甘油显著高于正常对照组(P<0.05).3组模型小鼠肝脏病理切片染色均出现肝脏脂肪变性,其中高糖高脂饲料加氢化可的松组肝脏脂肪变性最严重,为最优建模方法.结论 不同处理方式都可制备NAFLD模型,但肝脏损伤程度不同.     

人PD-L1胞外区基因的克隆、原核表达及抗体制备

目的 克隆人PD-L1胞外区基因并进行原核表达及相应蛋白的抗体制备,为进一步研究PD-1/PD-L1通路及针对该通路进行疾病治疗和药物筛选奠定基础.方法 用PCR方法扩增编码人PD-L1胞外区的基因序列,克隆到原核表达载体pET28a(+)中并进行表达,用His抗体为一抗进行Western blotting鉴定并验证结合活性.用纯化的hPD-L1胞外区蛋白作为抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体.通过酶联免疫吸附实验(ELISA)和流式法检测抗体滴度及其特异性.结果 原核表达质粒pET28a(+)-hPD-L1成功构建,并可在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导高效表达,得到的hPD-L1胞外区蛋白经SDS-PAGE和Western blotting鉴定正确.用纯化蛋白免疫日本大耳白兔,制备的多克隆抗体具有较强的免疫结合活性,抗体滴度可达105.结论 鉴定和纯化了原核表达的hPD-L1蛋白,制备的相应多克隆抗体能够检测真核细胞表达的hPD-L1蛋白,为进一步研究PD-1/PD-L1生物学活性奠定了实验基础.     

艾灸对感染HSV—2小鼠免疫功能的影响

本文应用单纯疱疹病毒Ⅱ型（ＨＳＶ－２）感染小鼠阴部的模型，探讨艾变对病毒感染性疾病的治疗作用及免疫调节的可能机制。结果显示艾灸可明显改善ＨＳＶ－２感染的临床表现，在免疫学检测中发现艾灸提高ＮＫ细胞杀伤率（３９．５％），ＩＬ－２的含量（ＯＤ值０．５６７）及ＴＨ细胞数，最后文章对其机制及临床应用进行了讨论。     

植物多糖对巨噬细胞免疫调控影响的研究进展

植物多糖（ polysaccharide ）有众多药理作用,主要包括加强或者活化巨噬细胞免疫应答,进而发挥免疫调控、抗肿瘤、创面愈合和其他治疗作用,主要的作用机制是其固有的免疫调节尤其是对巨噬细胞的作用。植物和微生物多糖与大多数的表面受体相关,诱导巨噬细胞发挥与其相似的免疫应答,这表明多糖的结构特点在有机体中是共有的。因此,植物多糖的研究为发现新的治疗药物提供了方向,也为找到具有强大免疫调控作用的佐剂提供了机会。本文对分离自高等植物的多糖对巨噬细胞免疫调控影响的最新研究状况作一综述。     

分子谱系地理学在药用植物基因水平的研究进展

分子谱系地理学在药用植物遗传多样性、中药道地性形成机制以及中药核心种质构建中的应用研究是目前我国中药研究的热点.近年来,我国学者在中药资源领域深入到与DNA差异相关联的功能基因筛选和基因组学,已对甘草Glycyrrhiza uralensis、青蒿Artemisia caruifolia、丹参Salvia miltiorrhiza等多种药用植物功能基因开展了深入研究.基于分子谱系地理学的药用植物功能基因筛选及中药材基因组学研究将会是今后研究应用的主流.对近年来分子谱系地理学在中药分子鉴定和中药道地性形成机制,特别是药用植物功能基因筛选及基于此的基因组学方面研究进展进行综述.     

超声介导载sPD-1和miR-206基因纳米微泡协同抑制小鼠H22肝癌皮下移植瘤

目的 探讨超声介导载可溶性程序性死亡因子1（sPD-1）联合miR-206纳米微泡对小鼠H22肝癌皮下移植瘤的干预效果。方法 自制载sPD-1和miR-206基因的纳米微泡,构建H22肝细胞癌皮下移植瘤小鼠模型,并将模型小鼠随机分为模型组、空微泡组、miR-206微泡组、sPD-1微泡组、联合组（给予miR-206微泡组及sPD-1微泡）,分别每2天经尾静脉给予生理盐水及相应的微泡,每次注射后给予超声辐照瘤体治疗1次。5次治疗后取小鼠肿瘤组织,测量肿瘤质量及体积,计算肿瘤体积及质量抑瘤率,HE染色观察肿瘤组织病理变化,免疫组织化学法检测小鼠肿瘤组织Bax、Bcl-2蛋白表达,半定量PCR检测Bax、Bcl-2、c-met、γ干扰素（IFN-γ）、程序性死亡因子-1配体（PD-L1）mRNA表达,实时荧光定量PCR检测miR-206表达。结果 制备的纳米微泡呈球形,分布均一。与模型组比较,各组肿瘤体积、肿瘤质量均降低,体积抑瘤率及质量抑瘤率均升高（P均<0.05）;上述变化以联合组为著（P均<0.05）。与模型组比较,其余各组Bax蛋白和mRNA均高表达、Bcl-2蛋白和mRNA均低表达,以联合组为著（P均<0.01）。各组小鼠肿瘤组织Bax、Bcl-2、c-met、PD-L1、IFN-γ、miR-206 mRNA表达差异均有统计学意义（P均<0.01）。结论 超声介导载sPD-1和miR-206纳米微泡可协同抑制小鼠H22肝癌皮下移植瘤生长。     

非酒精性脂肪性肝病中Toll样受体活化与microRNA调控的研究进展

小RNA(miRNA)作为细胞内一类非编码RNA参与了细胞内多种生物功能的调节。研究发现,与正常人相比,非酒精性脂肪性肝病患者体内的多种miRNA表达异常,并且发现这种异常表达会促使患者由单纯的肝脏脂肪变性向非酒精脂肪性肝炎转变。在这个转变过程中,作为启动机体免疫应答的一类模式识别受体,Toll样受体(TLR)的激活以及其介导的下游炎性因子的表达促使非酒精性肝炎的发生,而持续的炎性反应会引起肝脏发生纤维化,继而导致肝脏功能障碍,甚至发展成肝癌。本文简述了miRNA在非酒精性脂肪性肝病患者体内的差异性表达,及其与TLR信号通路的激活以及疾病恶化的关系。     

阿司匹林诱导人宫颈癌Caski细胞凋亡及其分子机制

目的探讨阿司匹林对人宫颈癌Caski细胞体外增殖抑制作用及机制,为其用于宫颈癌的临床治疗提供依据。方法体外培养Caski细胞,分别以1．0、2．5、5．0、7．5、10．0mmol／L阿司匹林干预。采用噻唑蓝（MTT）法测定细胞增殖抑制率;流式细胞仪测定细胞周期时相改变及细胞凋亡率;琼脂糖电泳法观察凋亡细胞DNA Ladder现象;Western blot法检测Bcl-2、Bax和Caspase-3等凋亡相关基因表达。结果阿司匹林干预后Caski细胞增殖明显受抑,且呈时间和剂量依赖性;Caski细胞G0／G1期和G2／M期比例明显下降,S期比例升高;细胞凋亡率明显升高;Bcl-2表达量减少,Bax表达增加,Caspase-3活化。结论阿司匹林在体外可抑制人宫颈癌Caski细胞增殖,其机制可能为抑制肿瘤细胞DNA合成,改变其细胞周期时相分布,诱导其凋亡。     

鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1高表达对小鼠黑素瘤B16-F1细胞增殖的影响

目的:研究鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制因子-1(ornithine decarboxylase antizyme inhibitor-1,OAZI-1)高表达对小鼠黑素瘤B16-F1细胞增殖的影响。方法:采用巢氏PCR法从小鼠肝癌H22细胞cDNA中克隆出小鼠OAZI-1基因,并构建重组质粒pcDNA3.1(+)/OAZI-1。采用脂质体转染法将重组质粒转染入B16-F1细胞后,Western印迹法和实时荧光定量PCR法鉴定高表达OAZI-1的B16-F1细胞株。MTT法和FCM检测OAZI-1高表达对B16-F1细胞增殖和细胞周期的影响。反相高效液相色谱检测OAZI-1高表达对细胞内多胺水平的影响。化学发光法检测细胞内精胺氧化酶(spermine oxidase,SMO)的活性。结果:成功获得高表达OAZI-1的B16-F1细胞克隆株B16/over,该细胞中OAZI-1在mRNA水平的表达量是转染空载体质粒对照组细胞B16/3.1的3.6倍。B16/over细胞中,鸟氨酸脱羧酶抗酶(ornithine decarboxylase antizyme,OAZ)的mRNA表达水平降低,鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)的mRNA表达水平升高。高表达OAZI-1能促进B16-F1细胞增殖,并影响细胞周期,G0/G1期细胞减少而S期和G2/M期细胞增加。B16/over细胞中腐胺的含量明显增加,精脒和精胺的含量减少,而且SMO活性升高。结论:OAZI-1高表达可能通过增加细胞内腐胺含量,促进黑素瘤细胞增殖,提示该抑制蛋白可能成为黑素瘤治疗的一个潜在靶点。     

mPD-1/mPD-L1体外分子结合模型的建立

目的建立小鼠PD-1/PD-L1(mPD-1/mPD-L1)体外分子结合模型,为研究PD-1/PD-L1生物学活性及建立高通量药物筛选分子模型奠定基础。方法重组质粒在原核细胞表达mPD-1和mPD-L1蛋白,利用亲和层析及切胶方法纯化相应蛋白;应用ELISA和GSTPull-down方法验证mPD-1与其配体mPD-L1蛋白的结合活性;以Alamar blue法检测纯化mPD-1和mPD-L1蛋白混合物对混合淋巴细胞增殖的影响。结果SDS-PAGE和Western印迹结果显示原核表达的重组蛋白与预期基本一致,经过亲和层析和切胶、复性等方式获得了纯化的mPD-1和mPD-L1蛋白。ELISA和GSTpull-down结果表明,mPD-1和mPD-L1蛋白具有体外结合的活性。淋巴细胞增殖试验进一步说明两蛋白的结合可一定程度上降低单独蛋白对淋巴细胞增殖的影响(P0.05)。结论利用原核细胞高效表达并纯化的mPD-1、mPD-L1蛋白成功建立体外mPD-1/mPD-L1分子结合模型,为高通量药物初筛奠定了基础。