肝细胞生长因子受体反义寡核苷酸对胶质瘤生长的抑制作用

有研究证实肝细胞生长因子受体c-Met和胶质瘤的发生、进展关系密切[1,2]我们针对c-Met的反义寡核苷酸对人胶质瘤U251细胞进行体内外抑瘤研究,探讨将c-Met作为恶性胶质瘤基因治疗靶基因的可能性.     

SLC22A18基因转染人胶质瘤U251细胞对放疗敏感性的影响

目的：探讨SLC22A18基因转染人胶质瘤U251细胞对放疗敏感性的影响。方法：用脂质体介导的转染技术将pIRES2-EGFP-SLC22A18表达重组质粒导入U251细胞,通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹（Western blot）检测SLC22A18基因和蛋白的表达。U251细胞分为4组：对照组、转染组、放疗组和转染联合放疗组。集落形成实验检测各组U251细胞集落形成数,用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）和流式细胞仪检测各组U251细胞生长抑制率和凋亡率,进一步应用裸鼠皮下荷瘤模型观察脂质体介导的pIRES2-SLC22A18表达重组质粒转染U251细胞对放疗敏感性的影响。结果：重组质粒转染组通过RT-PCR和Western blot证实了SLC22A18基因和蛋白在U251细胞中表达。集落形成实验检测发现SLC22A18基因对U251细胞的集落形成数为（60.6±5.2）个,当放射剂量为3、6和9 Gy时,U251细胞的集落形成数分别为（30.0±3.6）、（13.0±3.0）和（4.0±1.0）个。MTT检测发现SLC22A18基因对U251细胞的生长抑制率为（80.12±5.75）%。当放射剂量为3、6和9 Gy时,U251细胞的生长抑制率分别为（17.05±4.24）%、（17.34±1.62）%和（18.71±4.59）%。当SLC22A18基因与放疗（3、6和9 Gy）联合作用时,抑制率分别为（81.45±5.32）%、（90.45±1.65）%和（92.62±2.12）%。SLC22A18基因转染所产生的U251细胞凋亡率为17.68%。放疗（3、6和9 Gy）引起的细胞凋亡率分别为4.64%、4.87%和5.42%。当SLC22A18基因与放疗（3、6和9 Gy）联合作用时,凋亡率分别为18.42%、21.48%和23.92%。体内实验结果显示,SLC22A18基因对U251细胞6 Gy照射的抑瘤率比较为1.81。结论：SLC22A18基因转染增加了人胶质瘤U251细胞对放疗的敏感性。     

小型猪脑外伤急性颅内高压并失血性休克模型的建立

目的 建立小型猪脑外伤急性颅内高压并失血性休克模型,模拟多发伤失血性休克合并脑外伤急性硬膜外血肿,分析其形态学改变.方法 对16只实验用小型猪,采用简易脑皮层气击装置致伤一侧脑额叶,硬膜外球囊法致急性颅内高压,改良Wigger 氏休克模型法致失血性休克.观察模型制备前(T01)及放血完成后即刻(T0)、15 min(T15)、30 min(T30)、60 min(T60)五个时间点的平均动脉压(MAP)、颅内压(ICP)和脑灌注压(CPP);于T01和T60两个时间点测颈静脉血氧饱和度(SjvO2).随机选取2只动物,于模型制备前和制备后6 h分别行头颅冠状位CT和MRI检查.模型制备后6 h,随机选取2只动物分别行脑大体病理、HE染色观察和超微结构观察.结果 与T01时间点比较,T0时间点MAP和CPP明显下降,ICP明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05); 与T0时间点比较,T15、T30和T60时间点的MAP、ICP和CCP无明显变化(P>0.05).T60时间点SjvO2较T01时间点明显下降(P<0.05).影像学检查发现,创伤性硬膜下出血,中线偏移,对侧脑室扩张.HE染色观察发现,创伤灶及周围脑组织水肿明显,炎症细胞浸润,毛细血管周隙出血,白质区淤点性出血以及灰质挫裂伤.超微结构观察显示,创伤灶、周围和对侧脑组织表现为严重程度递减的改变,包括神经元坏死、变性,轴索脱髓鞘,线粒体肿胀,内皮细胞水肿等形态改变.结论 采用控制性脑皮层冲击、硬膜外球囊及股动脉放血方法建立的小型猪脑外伤急性颅内高压并失血性休克组合模型,可模拟临床多发伤失血性休克并脑外伤急性硬膜外血肿,并能用于CPP和脑氧供需平衡的监测.     

小鼠pLVX-Wnt3a-IRES-ZsGreenl慢病毒载体的构建及神经干细胞转染

目的 构建共表达小鼠Wnt3a(mWnt3a)与绿色荧光蛋白(GFP)慢病毒载体,感染神经干细胞(NSCs),观察mWnt3a在NSCs中的表达.方法 利用同源重组技术将mWnt3a基因插入慢病毒载体pLVX-IRES-ZsGreenl.构建pLVX-Wnt3a-IRES-Zs-Greenl慢病毒重组质粒,通过瞬时转染法包装出病毒上清,感染NSCs,设为Wnt3a-NSCs组;同时设GFP感染NSCs组(GFP-NSCs组)和未感染NSCs组(NSCs组)作为对照.免疫荧光染色法对Wnt3a-NSCs组NSCs进行nestin鉴定;Real-Time PCR检测各组细胞mWnt3a mRNA的表达;Western blotting检测各组细胞mWnt3a、β-catenin蛋白的表达.结果 经限制性内切酶检测、基因测序和绿色荧光观察证实成功构建了携带mWnt3a基因的重组慢病毒,且慢病毒滴度达3×108TU/mL.Wnt3a-NSCs组NSCs在荧光显微镜下证实有绿色荧光,且nestin表达阳性.Real-Time PCR和Western blotting结果显示感染后7d,Wnt3a-NSCs组mWnt3a mRNA和蛋白以及β-catenin蛋白均明显高于GFP-NSCs组和NSCs组(P＜0.01).结论 成功构建了表达mWnt3a基因的慢病毒载体,在体外培养条件下可以成功转染NSCs.     

基质细胞衍生因子-1诱导神经干细胞靶向性迁移的实验研究

Objective To investigate the effect ofstromal cell derived factor-1 (SDF-1) on the regulation of neural stem cells (NSCs) migration.Methods NSCs were obtained from the cerebral cortex of embryonic rats and cultured in serum-free medium,and their stem cell properties were assessed by means of induced differentiation in vitro into neurons and astrocytes.After in vitro cell culture,the purity of NSCs and the co-expression rate of CXCR4/nestin were detected by flow cytometry.Blind-well chambers were employed to detect the chemotactic effects of SDF-1 by counting the cells which had crossed a 8 μm pore membrane when confronted with varying concentrations of SDF-1 (0,1,10,50,100,500 and 1000 ng/mL),and the distribution of cells migrated out of the same neurosphere was overviewed by μ-slides in the persistent concentration gradient of SDF-1.Results Neurospheres were formed by persistent proliferation of NSCs, which were capable of differentiating into neurons (β-tubulin+) and astrocytes (GFAP+) in media without mitogens,and flow cytometry analyses showed that most of the cultured cells expressed nestin and the co-expression rate of CXCR4/nestin was nearly 80%.SDF-1 showed great chemotaxis to NSCs,and the amount of cells having migrated through the membrane in 500 ng/ml SDF-1 group was higher than that in other groups (P<0.05).When the cells were confronted with a linear concentration gradient (from 500 to 0 ng/mL),which was generated by diffusion and stable for at least 48 h,the cells migrated out ofa neruosphere could distribute irregularly with more cells locating in the region of higher concentration of SDF-1 and longer migration distance away from the center of the neurosphere than the opposite.Conclusion SDF-1 binding to its specific receptor CXCR4 was capable of inducing NSCs migrating directionally to the source of SDF-1.     

高渗盐溶液治疗颅脑外伤的研究

高渗盐溶液在脑损伤后渗透疗法中应用的可能性逐渐受到关注.有证据表明高渗盐溶液可以有效控制脑外伤后颅内压升高,增加脑血流量,并改善神经病学预后.文章就高渗盐溶液在创伤性脑损伤中应用的相关研究作一综述.     

磁共振波谱技术在弥漫性轴索损伤研究中的进展

磁共振波谱（magneticre sonance spectroscopy，MRS）技术利用核磁共振现象和化学位移作用对化合物进行定量分析，能够在活体上无创伤测量特定区域代谢变化。弥漫性轴索损伤（diffuse axonal injury，DAI）是一种严重的原发性闭合性颅脑损伤，也是导致颅脑损伤患者重度致残、植物状态生存和死亡的主要原因。DAI以白质区域广泛轴索球形成为特征，而常规CT和MRI不能显示轴索球，只能以继发的撕裂性出血变化作为间接诊断依据，     

脑胶质瘤患者生存期的相关因素分析

目的 探讨脑胶质瘤患者生存期的相关因素.方法 对资料完整的109例脑胶质瘤患者进行观察和分析,对可能影响脑胶质瘤生存期的因素采用Kaplan-Meier法和Cox回归分析进行统计学验证.结果 Kaplan-Meier法单因素分析显示年龄、部位、术前患者身体机能状况评分(KPS)、病理级别、瘤周水肿、肿瘤囊变、手术方式、术后放疗八个因素对患者生存时间产生显著影响;Cox回归多因素分析显示年龄、部位、术前KPS、病理级别、手术方式、术后放疗六个因素是决定患者生存时间的主要预后因素.结论 结合预后影响因素,注意治疗中的各环节,合理安排治疗模式,将有助于改善脑胶质瘤患者的预后.     

过程管理模式在医院科研管理中的应用

科研管理是医院管理中重要的组成部分,通过对上海交通大学医学院附属第三人民医院过程管理模式的总结,分析科研项目管理工作中存在的不足之处,为以后的工作打下良好的基础.     

新生大鼠上丘脑组织培养研究

目的探讨新生大鼠上丘脑组织培养方法,并对其在培养过程中的变化进行观察。方法取出生4 d的SD乳鼠上丘脑组织,分别在鼠尾胶原玻片、多聚赖氨酸玻片和B iocoat培养小室上进行组织培养,使用相差显微镜动态观察组织块生长情况。48 h后观察组织块贴壁率,在培养5 d时使用图像分析仪观察细胞迁移情况,测量最大迁移距离。使用乳酸脱氢酶试剂盒,测量组织培养液中乳酸脱氢酶活性的动态变化。常规HE染色形态学观察,并使用透射电镜观察组织块超微结构。结果与传统的培养载体相比,上丘脑组织在B iocoat培养小室上进行培养可以获得较高的组织贴壁率和细胞迁移距离。上丘脑组织在接种后31~5 d,其培养液中乳酸脱氢酶活性保持在较低水平。培养早期上丘脑组织块边缘出现细胞突起,胶质细胞迁移,随着培养时间延长,细胞出现凋亡,组织结构破坏。结论B iocoat培养小室是进行新生大鼠上丘脑组织培养的理想载体,接种3 d后组织生长趋于旺盛,而在2周后多数组织的生长逐渐衰退。