γ射线照射预防供者淋巴细胞输注相关移植物抗宿主病的实验研究

作者通过观察６０Ｃｏγ射线照射对小鼠脾Ｔ淋巴细胞增殖活性的影响,借助于动物模型证实了γ射线照射对供者淋巴细胞输注（ＤＬＩ）相关ＧＶＨＤ的预防作用,试图探索γ射线照射能够最大程度地去除Ｔ细胞增殖活性,避免移植物抗宿主病（ＧＶＨＤ）发生而不损害ＤＬＩ抗白血病作用的适宜剂量和方法。材料和方法：（１）动物：近交系Ｂａｌｂ／Ｃ（Ｈ２ｄ）,８～９周龄及出生４８～７２小时的６１５Ｈ２Ｋ／Ｂａｌｂ／ＣＨ－２ｄＦ１小鼠。（２）ＧＶＨＤ动物模型：参照孟玉茹等（中华血液学杂志,１９９３,１４：５６４）方法,稍作改…     

人类G6PD cDNA逆转录病毒载体构建及表达

本实验将人类正常G6PD cDNA与逆转录病毒载体pLXSN重组获得表达载体pLG6PDSN,通过脂质体介导法转染红白血病细胞系K562,G418筛选阳性克隆细胞并测G6PD表达.该表达载体的构建成功为严重G6PD缺陷症的基因治疗奠定了基础.     

巢式聚合酶链反应对231例白血病融合基因的检测

目的:探讨巢式逆转录聚合酶链反应(巢式RT-PCR)动态检测白血病bcr/abl、PML/RARa及AML/ETO融合基因在白血病诊断、治疗、预后判断的价值。方法:应用巢式PCR法对231例急慢性白血病患者bcr/abl、PML/RARa及AML/ETO融合基因作检测,同时结合患者细胞形态学及临床转归予以分析。结果:94例慢性粒细胞白血病患者中,79例bcr/abl融合基因阳性,阳性率为84.0%;55例急性淋巴细胞白血病患者中,20例bcr/abl融合基因阳性,阳性率为36.4%;50例急性早幼粒细胞白血病患者中,29例PML/RARa融合基因阳性,阳性率为58.0%;32例急性粒细胞白血病M2患者中,9例AML/ETO融合基因阳性,阳性率为28.2%。结论:巢式PCR是一种快速、敏感而准确的检测方法,可为白血病患者提供分子生物学的诊断依据,并可作为微小残留病的监测指标之一。     

急性髓系白血病预后相关因素研究进展

急性髓系白血病(AML)是一种具有显著异质性的血液系统恶性克隆性疾病.细胞遗传学改变很大程度上影响了患者的治疗和预后.随着生物学和计算机技术的不断发展,越来越多的预后相关因素被确认:如KIT、FLT3、NPM1和CEBPA等基因突变:微阵列技术也确认了一些与预后相关的独特的基因表达特征;microRNA的表达、单核苷酸多态性分析和DNA甲基化特征也发现了一些重要的AML预后亚型.这些新的预后相关因素的发现不仅对AML的危险度分层、预后判断、治疗指导具有重要作用,同时结合蛋白质图谱也确定了一些新的信号通路和治疗靶点,为实现个体化治疗提供了依据.在此本文将阐述一些新的与AML预后相关的基因改变.     

冬凌草甲素诱导人多发性骨髓瘤ARH-77细胞凋亡及其可能机制

摘 要 目的：探讨冬凌草甲素（oridonin,Ori）对人多发性骨髓瘤ARH-77细胞的致凋亡作用及其可能的机制。方法：不同浓度Ori（2.5、5、10 μmol/L）作用于ARH-77细胞,MTT法检测ARH-77细胞的增殖,相差显微镜和Hoechst 33258染色观察细胞凋亡的形态学改变,流式细胞术检测ARH-77细胞的早期凋亡及线粒体膜电位（Δψm）的变化,caspase 8凋亡试剂盒检测ARH-77细胞caspase 8的活化。结果：Ori对ARH-77细胞的生长有明显的抑制作用,且呈时间和剂量依赖性。10 μmol/L Ori作用于ARH-77细胞24 h后可见细胞变小、胞质中出现空泡,并可见凋亡小体。流式细胞术结果显示,经不同浓度Ori（2.5、5、10 μmol/L）处理后,细胞早期凋亡率分别为（15.07±0.78）%、（21.00±1.49）%和（27.45±2.47）%,均高于对照组的（5.27±1.46）%（P<0.01）。不同浓度Ori（2.5、5、10 μmol/L）处理后,反映Δψm的绿色荧光细胞百分率分别为（26.80±0.75）%、（36.81±2.27）%和（49.48±1.10）%,均高于对照组的（16.96±0.50）%（P<0.01）,提示ARH-77细胞凋亡有显著增加。同时,Ori处理可上调ARH-77细胞caspase 8的活性（P<0.01）。结论：冬凌草甲素能明显诱导多发性骨髓瘤ARH-77细胞的凋亡,其机制可能与激活内、外源凋亡通路有关。     

骨髓间充质干细胞对衰老大鼠的免疫调节作用

目的通过检测大鼠骨髓来源的间充质干细胞对D-半乳糖致衰老大鼠免疫功能的影响,探讨间充质干细胞(MSCs)延缓衰老的作用。方法选择清洁级SD大鼠,随机分为3组:正常对照组、衰老模型组、MSCs治疗组。衰老模型组和MSCs治疗组每日皮下注射D-半乳糖400 mg/kg,连续注射4个月。MSCs治疗组在衰老模型制备成功后,给予尾静脉输注3×106个MSCs,每周1次,连续4周。分别检测各组大鼠脾脏指数;MTT法检测脾脏淋巴细胞增殖活性;酶联免疫吸附(ELISA)法测定脾脏中IL-2和IL-10水平。并观察3组大鼠脾脏组织结构的差异。结果间充质干细胞可增强衰老大鼠的细胞免疫功能。与衰老模型组相比,MSCs治疗组的脾脏指数显著提高,T淋巴细胞活性增强,同时脾脏IL-2表达水平明显升高;而IL-10的表达水平显著降低。与对照组相比,衰老模型组脾脏白髓比例相对较少,且白髓和红髓界限欠清晰;而MSCs组大鼠的脾脏损伤有明显修复。结论 MSCs可能通过提高细胞免疫功能来发挥其抗衰老作用,从而减轻D-半乳糖致衰老大鼠的脾脏损伤。     

骨髓间充质干细胞移植后在胸腺内的定居

BACKGROUND: Bone marrow mesenchymal stem cells have low immunogenicity and can induce immune tolerance. At present, the mechanism of immune regulation of bone marrow mesenchymal stem cells is not completely understood. It has been rarely reported whether the bone marrow mesenchymal stem cells can migrate to the thymus after transplantation.OBJECTIVE: To observe the distribution and survival of bone marrow mesenchymal stem cells in the thymus of aging rats after transplantation.METHODS:Bone marrow mesenchymal stem cells cultured in vitro were transfected by adenovirus vectors expressing green fluorescent protein. Transfected bone marrow mesenchymal stem cells were injected into the portal vein of aging rats. At days 3, 7, 14, 21 after transplantation, the survival of bone marrow mesenchymal stem cells homing to the thymus was observed under fluorescence microscope. At day 3 after transplantation, thymus tissues were taken and stained with hematoxylin-eosin for pathological observation. RESULTS AND CONCLUSION:Green fluorescent protein-labeled bone marrow mesenchymal stem cells had a strong green fluorescence at days 3 and 7 after transplantation, and the cell contour was clear. There was no significant difference in the mean absorbance values at days 3 and 7 (P > 0.05). Expression of green fluorescent protein was weakened significantly at days 14 and 21 compared with that at day 3 (P < 0.05). At 3 days after transplantation, the transplanted bone marrow mesenchymal stem cells were clearly visible in the thymus, and acute rejection was not observed. The results show that bone marrow mesenchymal stem cells can migrate to the damaged thymus tissue through the blood circulation, and can survive at least 1 week.  中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

免疫吸附联合非清髓性CD34+细胞自身移植治疗难治性SLE三例

目的 观察免疫吸附联合非清髓性化疗结合CD34+细胞分选的自体外周血干细胞移植治疗难治性SLE的疗效。方法 难治性SLE 3例，均经肾活检确诊为狼疮性肾炎Ⅳ型，狼疮处于活动期，病情进展，常规治疗无效；应用以葡萄球菌A蛋白作为免疫吸附剂的吸附柱进行免疫吸附，一个疗程共6次，每次吸附血浆3 L；随后采用异环磷酰胺加重组人粒细胞集落刺激因子动员、Baxter CS-3000血细胞分离机采集外周血，获取单一核细胞，通过CD34+细胞分选仪分别得到2.6 × 106/kg、2.1 × 106/kg、2.4 × 106/kg CD34+细胞，采集物中分别含3 × 105/kg、2.1 × 105/kg、2.0 × 105/kg CD3+细胞，预处理为回输前6 d，每日应用氟达拉滨50 mg/d 共5 d，回输前3 d始每日应用抗胸腺细胞球蛋白90 mg/kg共5 d。 结果 ①3例患者吸附后血浆中抗dsDNA、ANA抗体、IgG均明显下降，补体C3明显上升。②3例患者均于移植后2 ~ 3 d获得造血重建。③移植后3例患者临床症状均明显缓解，SLEDAI评分均 < 3分。④移植后6个月，患者血浆中抗dsDNA、ANA抗体均转阴性，补体C3升至正常，尿蛋白转阴性，肾功能恢复正常。结论 移植治疗难治性SLE近期疗效满意。     

IL-2、IL-15增强免疫编辑后NK细胞NKG2D的表达及其对鼻咽癌CNE2细胞的杀伤活性

目的:观察IL-2、IL-15对免疫编辑后NK细胞NKG2D的表达及其对鼻咽癌CNE2细胞杀伤活性的影响.方法:抗CD56磁珠纯化NK细胞后分为4组:(1)编辑前NK细胞组:加入1130 U/ml IL-2;(2)单纯编辑组:NK细胞与CNE2细胞10:1混合,加入100U/ml IL-2;(3)IL-2再培养组:纯化编辑后的NK细胞,加入1 000 U/ml IL-2;(4)IL-15再培养组:纯化编辑后的NK细胞,加入10 ng/ml IL-15.24 h后,流式细胞仪检测各组NK细胞表面NKG2D的表达;LDH释放测定法测定效靶比20:1时各组NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性.结果:编辑前NK细胞组、单纯编辑组、IL-2再培养组、IL-15再培养组NK细胞表面NKG2D的表达率分别为(97.63±0.83)%、(53.50±1.25)%、(94.47±1.00)%、(98.07±0.21)%.IL-2、IL-15再培养组NK细胞NKG2D的表达分别比单纯编辑组有显著的增加(P＜0.01),该4组NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性分别为(35.90±3.27)%、(4.70±2.30)%、(31.70±3.56)%、(40.18±2.94)%,IL-2再培养组、IL-15再培养组明显提高编辑后NK细胞对CNE2细胞的杀伤活性(P＜0.01),IL-15的作用强于IL-2.结论:高剂量IL-2、IL-15可以上调免疫编辑后NK细胞表面NKG2D的表达,恢复编辑后NK细胞对鼻咽癌细胞CNE2的杀伤活性,IL-15的作用强于IL-2.