survivin和GRIM-19在前列腺癌组织中的表达

目的:探讨survivin和GRIM-19在前列腺癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组化、RT-PCR和Western印迹法检测survivin和GRIM-19在正常前列腺(NP)组织、良性前列腺增生(BPH)组织和前列腺癌(PCa)组织中的表达情况。结果:免疫组化结果显示survivin在NP、BPH和PCa组织中的表达率分别为6.25%、18.18%和90.62%(P<0.01);GRIM-19的表达率分别为87.50%、81.82%和9.37%(P<0.01)。半定量RT-PCR结果显示,在NP和BPH组织未检测到survivinmRNA表达,而PCa组织可检测到survivinmRNA高表达。Western印迹结果证实,在NP和BPH组织中有微量的survivin蛋白表达;而PCa组织可检测到survivin蛋白高表达;在NP和BPH组织中GRIM-19蛋白表达强阳性,而PCa组织中只有微量表达,两者比较差异均有显著性(P<0.01)。结论:survivin和GRIM-19的表达可能与PCa的发生密切相关。     

Survivin-siRNA真核重组质粒对前列腺癌移植瘤的抑制作用

 目的：探讨survivin-siRNA真核重组质粒对前列腺癌移植瘤的抑瘤效应,并分析相关机制。方法：体外培养前列腺癌DU145细胞,将细胞注射到裸鼠背部皮下,待移植瘤直径达到8 mm时将瘤无菌取出,分成直径约2 mm的瘤块,手术植入另外的裸鼠皮下,将survivin-siRNA质粒或scrambled siRNA对照质粒电转染进行治疗,描记移植瘤生长曲线,并计算抑制率;通过HE染色、免疫组化染色及TUNEL染色观察survivin-siRNA对移植瘤影响。结果：成功构建裸鼠前列腺癌移植瘤模型。与mock和scrambled siRNA组相比,survivin-siRNA抑瘤率分别为两对照组的61.81%和62.87%;免疫组织化学染色发现：survivin-siRNA质粒明显抑制细胞内survivin表达;TUNEL染色证实治疗组肿瘤细胞凋亡明显增加。结论：重组质粒survivin-siRNA明显抑制DU145细胞移植瘤的生长,抑制内源性 survivin 蛋白的表达并促进细胞凋亡,针对survivin靶点的基因治疗前景广阔。     

siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒的构建及其对前列腺癌DU145细胞生长的抑制作用

目的: 构建siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒pGRIM-19-si-survivin并鉴定,观察pGRIM-19-si-survivin质粒对人前列腺癌DU145细胞survivin和GRIM-19 mRNA表达水平及细胞增殖能力的影响。方法:根据前期工作,利用基因重组技术构建siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒,将成功构建的pGRIM-19-si-survivin质粒转染人前列腺癌DU145细胞株,应用半定量RT-PCR方法检测细胞内survivin和GRIM-19 mRNA表达水平,应用MTT法观察其对细胞增殖能力的影响。结果:(1)应用酶切及质粒测序法鉴定,证明成功构建siRNA-survivin与GRIM-19共表达质粒。(2)与mock组比较,psi-survivin、pGRIM-19及pGRIM-19-si-survivin组survivin mRNA表达水平分别为0.55±0.05、0.62±0.08和0.35±0.05,差异显著(P<0.01);与psi-survivin和pGRIM-19组比较,pGRIM-19-si-survivin的抑制survivin表达作用明显增强(P<0.05);psi-survivin、pGRIM-19和pGRIM-19-si-survivin组GRIM-19表达增强,分别为mock组的1.93±0.14、2.57±0.20 和4.12±0.21(P<0.01),与pGRIM-19组比较,pGRIM-19-si-survivin增强GRIM-19表达作用更明显(P<0.05)。(3)转染48 h后,与mock组比较,psi-survivin、pGRIM-19和pGRIM-19-si-survivin 3组细胞增殖率分别为58.0%±7.2%、62.1%±6.1%和50.2%±4.8%,差异显著(P<0.05);转染72 h后,与mock组比较,3组细胞增殖率分别为43.4%±4.3%、51.3%±6.7%和26.8%±7.1%,差异明显(P<0.05,P<0.01);与psi-survivin和pGRIM-19组比较,pGRIM-19-si-survivin抑制作用明显增强(P<0.05)。结论:成功构建siRNA-survivin和GRIM-19共表达质粒pGRIM-19-si-survivin;该质粒抑制survivin表达并增强GRIM-19表达,对前列腺癌DU145细胞具有协同增殖抑制效应。     

Survivin-siRNA真核重组质粒的构建和鉴定及其对前列腺癌DU145细胞的影响

目的 应用RNA干扰(RNAi)技术,构建针对凋亡抑制因子survivin的siRNA,并检测其对DU145细胞株内源性survivin基因和蛋白表达的影响.方法 构建重组质粒shRNA-sur1和-sur2并分别转染 DU145细胞株,通过半定量 RT-PCR和Western印迹检测survivin mRNA转录水平和蛋白表达的变化.结果 成功构建针对survivin干扰的两种真核表达质粒;两种重组质粒shRNA-sur1和-sur2均能明显抑制内源性survivin基因表达,其抑制率分别为72%±8%和77%±5%;两种质粒均能明显抑制survivin蛋白的表达,其抑制率分别为75%±8%和80%±6%.结论 重组质粒shRNA-sur1和-sur2均可明显抑制DU145细胞内源survivin 蛋白表达和mRNA转录,为survivin介导的肿瘤基因沉默提供良好的基础.     

人乳头瘤病毒16型L1基因真核表达载体的构建及表达

目的从感染人乳头瘤病毒（HPV）的新鲜宫颈癌组织中扩增HPV16型晚期蛋白L1基因全长，构建表达载体，并验证目的蛋白的表达。方法根据基因全长设计一对特异引物，用PCR的方法从宫颈癌组织DNA，中获得L1基因，以pMD18T为克隆载体，构建重组质粒进行亚克隆，再以pcDNA3．1（＋）为载体构建表达质粒，转染至人肝细胞系H7702，提取蛋白，采用Western Blot方法检测HPV16-L1蛋白的表达。结果从长春地区宫颈癌临床标本克隆到的HPV16型L1蛋白编码序列与Genebank报道序列高度同源，其真核表达产物与特异性抗体能够特异性结合。结论成功构建重组表达质粒pcDNA3．1（＋）-HPV16-L1，为进一步研制HPV预防性疫苗创造基础条件。     

前列腺偶发癌22例临床分析

目的:探讨前列腺偶发癌的临床和病理特征。方法:回顾1982年～1998年经耻骨上前列腺摘除术及经尿道电切术治疗的良性前列腺增生726例资料。结果:术后病理检出前列腺癌为22例,检出率为3.3%。其中A1期6例,A2期16例。高中分化腺癌占77.2%。病理学特征为在增生组织中存在单个或多个腺癌病灶。癌灶与增生组织分界不清,多数可见不典型增生。治疗:16例行双侧睾丸切除术。3年存活率为90%(20/22)。结论:偶发癌检出率低于国内其他报道。通过病理资料观察,提示前列腺癌发生发展变化的过程。提高早期前列腺癌的诊断,可以使其治疗达到满意的效果。     

利用siRNA技术沉默膀胱肿瘤STAT3基因及促进凋亡的机制探讨

目的沉默人膀胱移行细胞癌细胞T24的STAT3基因，并探讨其对T24细胞生长抑制及诱导凋亡的作用机制。方法利用含有STAT3 mRNA的siRNA的pSilencer 3．1-siRNA-STAT3重组质粒转染T24细胞；采用Western印迹、RT-PCR等技术观察重组质粒对STAT3基因表达的影响；用WTT法观察重组质粒对T24细胞的体外生长抑制作用；用流式细胞术（FCM）及吖啶橙染色检测重组质粒的诱导凋亡作用。结果重组质粒成功转染T24细胞；Western印迹、RT-PCR证实重组质粒在蛋白及mRNA水平都显著抑制STAT3基因的表达水平，抑制率为59％～72％；MTT及FCM证实重组质粒可显著抑制T24细胞的体外生长并诱导细胞凋亡，抑制率及凋亡率分别为53％和17．3％。结论pSilencer 3．1-siRNA-STAT3重组质粒可抑制STAT3在人膀胱肿瘤细胞的表达，抑制肿瘤细胞的生长，促进其凋亡。     

经直肠超声前列腺癌声像特征及前列腺内腺PSA密度在前列腺癌诊断中的作用

目的通过经直肠超声分析前列腺癌声像特征并测量前列腺内腺、外腺与总体积，参考PSA探讨前列腺内腺PSA密度(IPSAD)在前列腺癌与前列腺增生鉴别诊断中的意义。方法回顾分析经直肠超声前列腺癌声像特征及经超声引导下6点活检病理诊断的49例前列腺癌、96例前列腺增生的临床资料。结果(1)前列腺癌声像特征以低回声为主，晚期可见被膜浸润及不规则。(2)前列腺内腺体积增生与癌有显著性差别。(3)PSA、PSA密度(PSAD)、IPSAD在增生与前列腺癌中的比较，均有显著性差异。(4)IPSAD在前列腺癌诊断的特异度为75．5％，敏感度为93．3％，优于PSAD。结论前列腺癌声像特征及IPSAD是鉴别前列腺癌与增生的重要指标。     

Survivin-siRNA对裸鼠前列腺癌生长的影响

目的研究survivin-siRNA对前列腺癌裸鼠移植瘤生长的作用，探讨survivin与前列腺癌发生、发展的关系。方法人前列腺癌细胞PC-3M荷瘤裸鼠18只随机分为3组：mock组（n=6），psi-scrambled组（n=6）和pSi-sur2组（n=6）。通过电子穿孔仪将质粒转入裸鼠移植瘤内，20d后处死动物，计算抑瘤率。利用Western blot检测survivin蛋白表达水平，免疫组化SP法检测增殖指数变化；TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡的变化。结果体内实验表明，pSi-sur2组与其他两对照组比较裸鼠移植瘤生长速度明显减慢（P〈0．01），肿瘤组织survivin蛋白表达及肿瘤增殖指数显著降低（P〈0．01），而肿瘤凋亡显著增加（P〈0．01）。结论通过RNA干扰技术抑制survivin的表达，在裸鼠体内可显著抑制前列腺癌生长。     

保留尿道括约肌功能及减少尿道狭窄的前列腺癌根治术(附28例报告)

目的　探讨减少前列腺癌根治术后尿失禁及尿道狭窄的术式。方法　采用保留尿道外扩约肌、膀胱颈环状肌纤维及单侧血管神经束 ,吻合时将膀胱颈黏膜外翻固定再与尿道对端吻合的手术方式对 2 8例病人进行前列腺癌根治术。结果　尿道外括约肌保留尿失禁发生 1例 ,占3.5% ,尿道狭窄仅发生 1例 ,随访 6～ 40个月 ,最大尿流率 2 3.2～ 32 .4 ml/ s。结论　手术方式和外科技术是影响根治性前列腺切除术后尿失禁及尿道狭窄的重要因素 ,保留尿道外括约肌可以减少术后尿失禁的发生率 ,将膀胱颈黏膜外翻再与尿道对端吻合可以减少尿道狭窄的发生。