基于CRISPR-Cas13a技术的乙型肝炎病毒ccDNA检测方法临床应用评价

摘要:目的评价基于CRISPR-Cas13a技术的乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(ceDNA)检测方法的应用价值。方法收集25例HBV感染患者和5例非HBV感染患者的肝组织标本,提取肝组织的总DNA,依次使用HindII内切酶和质粒安全 性ATP依赖DNA酶(PSAD)消化;设计HBV cceDNA的特异性引物,扩增消化后的产物;利用CRISPR/Cas13a技术建立CRISPR-HBV cceDNA检测方法,通过HBV cceDNA质粒和临床样本对该方法进行评价,并利用数字PCR和荧光定量PCR方 法进行比较。结果本研究建 立的方法检测HBV cccDNA质粒的灵敏度为1 copies/μL,显著高于数字PCR( 10 opies/μL,P<0.01)和荧光定量PCR( 10'' copies/uL,P<0.01);建立的方法检测HBV cceDNA阳性样本的灵敏度为1 copies/uL,与数字PCR 相同,高于荧光定量PCR( 10 copies/ μL,P<0.01);建立的方法对25例HBV感染的临床肝组织样本的检出阳性率为80%,均高于数字PCR(64%)和荧光定量PCR(48%)。结论本研究 建立的CRISPR-HBV cceDNA检测方法在乙肝患者肝组织标本 HBVcccDNA检测中具有较高的灵敏度,为评价乙肝患者的临床治疗效果和监测停药复发等情况提供了有效帮助。     

盐酸小檗碱对亚硝酸盐中毒小鼠脑急性缺氧的保护作用

目的观察盐酸小檗碱对小鼠脑急性缺氧的保护作用。方法利用亚硝酸钠（NaNO2）中毒和断头实验复制缺氧模型，用盐酸小檗碱3个剂量组即2．0mg／kg、4．0mg／kg、8．0mg／kg连续灌胃6d，观察小鼠存活时间、断头张口次数和喘息时间；用试剂盒测量脑组织超氧化物岐化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）和乳酸脱氢酶（LDH）含量。HE染色观察脑组织形态学变化。结果盐酸小檗碱能明显延长急性缺氧条件下小鼠的存活时间（P〈0．05，P〈0．01）、断头喘息时间（P〈0．05，P〈0．01），提高缺氧小鼠脑组织SOD和LDH的活性，减少MDA和NO的含量；镜下可见模型组小鼠脑膜出血，皮质细胞坏死，脑水肿；盐酸小檗碱治疗组小鼠除脑膜血管扩张外未见明显异常。结论盐酸小檗碱对亚硝酸盐中毒小鼠脑急性缺氧具有一定的保护作用。     

越橘花青素对人胚胎巩膜成纤维细胞MMP2和collagen I表达的影响

 目的：探讨越橘花青素对人胚胎巩膜成纤维细胞（HFSF）基质金属蛋白酶2（MMP2）和I型胶原蛋白（collagen I）表达的影响,为越橘花青素防治近视提供实验依据。方法：取不同浓度（0、10^-6、10^-5、10^-4、10^-3、10^-2、10^-1和1 g/L）越橘花青素作用于HFSF,应用MTT法检测越橘花青素作用不同时间（6 h、8 h、12 h、24 h和48 h）对HFSF活力的影响;流式细胞术检测HFSF活力最高时（10^-1 g/L越橘花青素作用12 h）的细胞周期和凋亡情况;RT-qPCR检测HFSF中MMP2、COL1A1和COL1A2的mRNA表达;Western blot检测其MMP2和collagen I的蛋白表达。结果：MTT法结果显示HFSF在10^-1 g/L的越橘花青素作用12 h时活力最高;与空白对照组比较,流式细胞术显示10^-1 g/L越橘花青素组S和G₂期的细胞比例增加（P<0.05）,凋亡率差异无统计学意义;RT-qPCR显示MMP2的mRNA表达量下降（P<0.05）,COL1A1的mRNA表达量增加（P<0.05）,COL1A2的mRNA表达量差异无统计学意义;Western blot显示MMP2蛋白表达下降（P<0.05）,collagen I蛋白表达增加（P<0.05）。结论：越橘花青素对HFSF和具有抑制MMP2和增加collagen I表达的作用。     

大豆油、水分和铁对大豆磷脂酸值和碘值的影响

目的寻求克服大豆磷脂酸败变质的措施。方法将数量不等的大豆油、水、铁 (三氧化二铁 )加到大豆磷脂中放置一年 ,观察大豆磷脂的酸值、碘值变化。结果当大豆磷脂中含大豆油超过 10 %时 ,酸值增加明显变缓 ;水分和铁促进大豆磷脂酸值上升。结论大豆磷脂在含大豆油 10 %以上 ,含水 1%以下 ,不含铁时比较稳定。     

小孩流鼻血 止血方法有讲究

小孩流鼻血一般多是由于鼻中膈的前部受伤所致，这个区域有数条血管交会于此，且又是动脉，所以出血量很多。容易流鼻血的小孩大概可分为下列几种：     

坚持“四个结合”是军队防疫队做好高原震区卫生防病的关键

为提高高原抗震救灾卫生防病效率。坚持＂军地专业技术队伍结合、群专结合、军民结合、军队专业技术队伍与其它非专业部队的结合,组织实施灾区抗震救灾卫生防疫工作。不仅提高了卫生防疫效率,而且使卫生防病社会化。只要坚持‘四个结合’＂,就可以极大提高灾区卫生防疫效率,确保实现大灾之后无大疫。     

国医大师张震运用消疹止痛煎分期治疗带状疱疹经验

总结国医大师张震运用消疹止痛煎分期治疗带状疱疹的经验。带状疱疹发作时疼痛剧烈,常影响人们的日常生活,治疗不当易转化为带状疱疹后神经痛。张师在临床及科研实践中形成“拟定专方、分期论治、内外合用”的治疗特点。拟定消疹止痛煎作为本病的专用方,方有清热泻火、解毒祛湿之效,可化裁运用于各期治疗。结合疾病进展各期皮损及病机特点将本病分为出疹初期、出疹期、出疹后期、后神经痛4期,出疹初期多为风热外犯,治以祛风清热解毒;出疹期为火毒凝聚,治以清热泻火、解毒祛湿,辅以行气活血;出疹后期多属正虚邪恋,治以扶正祛邪,以散尽余毒;后神经痛期多为气滞血瘀,治以行气活血兼以泻火解毒。并配合外治法的运用,每每治疗屡获良效。     

低氧复合氰化钠中毒对大鼠肺的损伤效应

目的探讨低氧复合氰化钠(NaCN)中毒对大鼠的肺损伤效应。方法以低压氧舱模拟4 000m低氧环境。72只大鼠随机分为海拔308m中毒组和海拔4 000m中毒组。皮下注射3.6mg/kg NaCN,分别于0、0.5、1、2、4、6h取肺组织和支气管肺泡灌洗液(BALF),测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)活力,丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、伊文思蓝(EB)含量,酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脱氢酶(LDH)及碱性磷酸酶(AKP)的活性。结果NaCN中毒后BALF中LDH、ACP及AKP活性明显增高,0.5h最高。低氧(海拔4 000m)复合NaCN中毒大鼠BALF中LDH、ACP及AKP活性明显高于同一时相点单纯(海拔308m)NaCN中毒大鼠。低氧复合NaCN中毒能引起肺组织和BALF中的GSH含量、SOD和GSH-PX活力下降,并引起MDA含量增加,各指标的变化幅度远大于单纯NaCN中毒的效应。结论在低氧条件下NaCN的细胞毒性作用增强,肺损伤程度加重,严重影响大鼠肺的氧化应激水平和肺血管通透性。