慢性尿毒症患者蛋白C、蛋白S、血栓烷B_2、P-选择素水平的观察

目的:探讨慢性尿毒症患者蛋白C系统和血小板活化状态的变化。方法:采用酶联免疫吸附双抗体夹心法测定30例慢性尿毒症患者血液透析前血浆蛋白C、蛋白S、血栓烷B_2、P-选择素含量,并对其中9例血液透析前后的相关指标进行了比较。结果:30倒尿毒症患者66.7％发现蛋白C水平低下,未发现蛋白S水平低下,平均蛋白C水平降低而蛋白S水平增高。血液透析后两者均较透析前显著增高。血液透析前TXB_2水平增高,P-选择素水平降低,血液透析后两者改变与透析前比较差异无显著性。结论:尿毒症高凝状态与蛋白C水平低下血小板活化异常有关。血液透析可纠正蛋白C异常,对血小板活化状态的改善不明显。     

Antitumor effect of betulinic acid on human acute leukemia K562 cells <Emphasis Type="Italic">in vitro</Emphasis>

The effects of betulinic acid (BA), a pentacyclic lupane-type triterpene, on the cell viability, cell cycle and apoptosis in human leukemia K562 cells were investigated. The effects of BA on the growth of K562 cells were studied by MTT assay. Apoptosis was assayed through Annexin V/propidium iodide (PI) double-labeled cytometry. The effects of BA on the cell cycle of K562 cells were studied by a PI method. The expression of Bax and capase-3 was detected by using Western blot. The results showed that BA was ...     

组织因子表达下调影响阿霉素诱导人胶质母细胞瘤细胞凋亡的研究

目的研究组织因子（TF）对阿霉素诱导人胶质母细胞瘤细胞凋亡的影响。方法以免疫印迹法检测TF表达。分子生物学方法构建TFsiRNA-pSUPER表达载体,以脂质体介导进行基因转染。以水溶性四唑盐法检测阿霉素的细胞毒性。以印迹法检测阿霉素诱导的Caspase-3、PARP的裂解。以Hochest33342染色荧光显微镜检测凋亡细胞。结果人胶质母细胞瘤细胞系U373MG高表达TF。转染TFsiRNA-pSUPER表达载体的U373MG细胞及对照细胞分别以阿霉素处理,可见转染细胞较对照细胞Caspase-3、PARP的裂解增强。以不同浓度阿霉素处理48h后,可见转染后的U373MG细胞的存活数较对照细胞明显减少（P〈0.05）。以Hochest33342染色检测到转染后的U373MG细胞经阿霉素处理后的凋亡细胞数显著增多（P〈0.05）。结论人胶质母细胞瘤U373MG中TF异常高表达的下调,可增强阿霉素诱导的细胞凋亡。肿瘤细胞中TF的异常高表达可能影响肿瘤细胞对化疗药物的耐受性。     

非血缘外周血干细胞移植后cGVHD中枢神经系统受累

目的:提高对外周血干细胞移植后发生以中枢神经系统受累为主要表现的慢性移植物抗宿主病(cGVHD)的认识,早期诊断、及时治疗.方法:报告一例非血缘外周血干细胞移植术(MUD-PBSCT)后发生以中枢神经系统受累为主要表现的慢性移植物抗宿主病病例及诊治经过,并对相关文献进行复习.结果:患者于移植后9个月出现发热和皮疹,伴渐进性智力障碍、口齿不清、认知力下降、肾病综合征等临床表现,头颅MRI显示给予MMF 2 g/d、FK506 2.5 mg/d及甲强龙治疗后,病情明显改善.结论:非血缘异基因造血干细胞移植MUD-PBSCT后,慢性GVHD以中枢神经系统受累为主要表现者国内少有报道,及时诊断并给予有效治疗十分重要.     

血液循环中白细胞组织因子活性的测定方法及临床意义

目的:建立一种用于辅助临床诊断血栓性疾病的白细胞组织因子促凝活性(TF-PCA)测定方法。方法:利用动态监测法测定脂多糖(LPS)刺激后单个核白细胞(MLC)的TF-PCA的变化,利用流式细胞技术检测其TF抗原的表达,以鉴定检测方法的特异性,并进行临床验证。结果:凝血动力学指标变化与细胞数、LPS浓度、反应时间等有不同程度的相关性,TF-PCA在内源性乏凝血因子Ⅷ、Ⅸ血浆凝固中显示明显的促凝活性,而外源性乏凝血因子Ⅶ、Ⅹ则未显示TF-PCA;TF-PCA与凝血动力学的凝固延迟时间和纤维蛋白单体聚合速率呈良好的负、正相关(r=-0.986、r=0.928);LPS对MLC刺激上调TF表达具有较高的特异性,由此印证了本检测方法的可行性。结论:凝血动力学检测能较简单、快捷的检测MLC的TF-PCA,并有较高的特异性和敏感性,对血栓性疾病的诊断及防治有应用价值。     

大鼠凝血因子Ⅶ EGF1片段结合功能的体外研究

目的探讨大鼠凝血因子ⅦEGF1片段与脂多糖（LPS）刺激后的大鼠血管内皮细胞（RAOEC）结合能力。方法将0．1mg／LLPS作用RAOEC2h、4h、6h、18h，应用免疫荧光法检测TF蛋白在RAOEC的表达，通过荧光显微镜和流式细胞仪检测4μmol／L、8μmol／L、16μmol／L的大鼠凝血因子ⅦEGF1多肽与LPS作用后的RAOEC的结合能力。结果0．1mg／L LPS能刺激RAOEC表达组织因子（TF），4h最为明显，4μmol／L、8μmol／L、16μmol／L大鼠凝血因子ⅦEGF1能结合LPS刺激后的RAOEC。结论大鼠凝血因子ⅦEGFl片段能结合LPS刺激后RAOEC。     

非亲缘异基因造血干细胞移植治疗白血病的临床研究

目的探讨非血缘关系异基因造血干细胞移植(URD-SCT)的疗效和相关并发症。方法22例白血病患者接受URD-SCT治疗。预处理方案:所有患者均采用马利兰联合环磷酰胺(BUCY2)或改良BUCY2预处理方案。移植物抗宿主病(GVHD)预防:22例均采用酶酚酸酯(MMF) 环孢素A(CsA) 短程甲氨蝶呤(MTX)方案,其中,4例用猪抗淋巴细胞球蛋白(ALG),16例于移植0 d和移植后4 d使用赛尼哌(CD25单抗),2例同时用ALG和CD25单抗。供者细胞回输:输注有核细胞中位数为4.5×108/kg,CD34 细胞中位数为4.3×106/kg。结果1例早期死亡不能评估,1例未植活,20例经血型、染色体及DNA多态性检测证实植活。急性Ⅱ~Ⅳ度GVHD 8例;慢性GVHD 8例:局限性3例,广泛性5例。感染:移植后100 d内感染者17例,病原学确诊为细菌感染3例,真菌感染2例,巨细胞病毒(CMV)感染6例。存活情况:100 d内死亡5例,100 d后死亡5例,其余患者无病存活。结论进一步降低移植相关并发症已成为URD-SCT需解决的首要问题。对无血缘供者的高危白血病患者,在严格控制移植适应证情况下,URD-SCT仍是治疗的重要手段之一。     

人参皂苷Rb1逆转白消安干预人脐静脉内皮细胞NO生成作用及其信号转导机制

目的:研究人参皂苷Rb1对白消安(BU)干预人脐静脉内皮细胞(HUVEC)一氧化氮(NO)合成作用的影响,并进一步探讨此影响的信号转导机制.方法:体外培养HUVEC,以硝酸还原酶法检测各组细胞培养上清液中NO的含量,实时荧光定量OCR(Real Time-PCR)法检测HUVEC中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表达;以特异性抑制剂LY294002阻断P13K/AKT信号转导通路.Western blot印迹法检测细胞内磷酸化丝/苏氨酸蛋白激酶AKT(P-AKT)表达.结果:①BU明显降低HUVEC中的eNOSmRNA表达及细胞培养上清中的NO水平;预先用人参皂苷Rb1干预可以拮抗BU对HUVEC的这种影响.提高eNOSmRNA表达及NO合成;②BU明显抑制HUVEC表达p-AKT,Rb1则可增强p-AKT表达,拮抗白消安对P-AKT的抑制作用;③人参皂苷Rb1拮抗白消安抑制内皮细胞NO合成的作用能被LY294002拮抗;40 μMol·L-1的I.Y294002即可明显抑制磷酸化AKT的表达和N0的合成.结论:BU可抑制HUVEC合成NO,人参皂苷Rb1可逆转此作用.其机制与激活P13K/AKT信号转导通路密切相关.人参皂苷可能籍此机制保护血管内皮细胞免受化疗药物损伤.     

ALG/ATG为主的免疫抑制剂治疗重型再生障碍性贫血的临床研究

目的探讨重型再生障碍性贫血(SAA)以抗淋巴细胞球蛋白/抗胸腺细胞球蛋白(ALG/ATG)为主的免疫抑制治疗(IST)疗效、疗效相关因素及相关并发症。方法应用ALG/ATG对41例SAA患者进行治疗,辅以环孢菌素A、雄激素、造血生长因子等。结果随访的33例中基本治愈7例(21.21%),达到缓解6例(18.18%),明显进步7例(21.21%),总有效率60.61%。单项资料对比分析显示,治疗有效率与年龄、性别、病程长短、SAA类型、治疗前骨髓增生程度及全身骨髓代谢程度等无明显相关性,但治疗前外周血中性粒细胞计数(ANC)≥0.2×109/L者有效率显著增高(P<0.05),IST治疗后发生严重感染者预后不佳,且治疗过程中发生严重感染者治疗初期输注血小板依赖时间较长(P<0.05)。所有患者治疗过程中出现不同程度发热15例(36.59%),皮疹2例(4.88%),血清病5例(12.20%)。随访患者出现远期并发症者2例:骨髓增生异常综合征(MDS)样病态造血1例,阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)1例。结论ALG/ATG作为重要免疫抑制剂治疗SAA疗效肯定,其相关不良反应可获得较好控制,而治疗前患者外周血ANC可能对疗效判断有提示意义。IST后出现重度感染多为预后不良的重要因素之一。     

组织因子表达影响阿霉素对人神经母细胞瘤细胞毒性的研究

目的：研究组织因子（TF）表达对阿霉素在人神经母细胞瘤细胞系中细胞毒性的影响。方法：以Western Blotting检测TF表达。分子生物学方法构建TFsiRNA—pSUPER表达载体，以脂质体介导进行基因转染。以WST法检测阿霉素细胞毒性。结果：①人神经母细胞瘤细胞系SK—N—MC高表达TF；②所构建的TFsiRNA—pSUPER表达载体转染SK-N—MC细胞后，呈剂量依赖性降低TF表达水平；③转染TFsiRNA-pSUPER的SK—N—MC细胞与转染pSUPER质粒的对照细胞分别以不同浓度的阿霉素处理后，前者与后者相比存活细胞数显著降低。结论：以siRNA特异性下调人神经母细胞瘤细胞SK—N—MC中的TF表达，可增强阿霉素的细胞毒性。TF的异常高表达有可能增强肿瘤细胞对化疗药物的耐受性，籍此影响疾病预后。