人半月板纤维软骨细胞对人胰岛素样生长因子Ⅰ的效应反应

背景：人类半月板纤维软骨细胞可能会对有积极生物学效应的生长因子产生反应，例如人胰岛素样生长因子Ⅰ，半月板细胞也可能会成为将来临床基因治疗的有效供体。 目的：拟观察人半月板纤维软骨细胞对人胰岛素样生长因子Ⅰ的效应反应。 设计、时间及地点：开放性实验，于2007-10/2008-04在青岛大学附属医院骨科实验室完成。 材料：收集半月板撕裂和盘状半月板患者关节镜手术中切取的半月板组织用于人半月板纤维软骨细胞培养。 方法：利用聚合酶链式反应从人肝细胞cDNA文库中获得人胰岛素样生长因子Ⅰ基因，将其克隆入双顺反子真核表达载体pIRES2-EGFP中。将关节镜手术中切取的成人半月板组织，体外进行分离培养。利用阳离子脂质体FuGene6将人胰岛素样生长因子Ⅰ转染入人半月板纤维软骨细胞中。 主要观察指标：转染人胰岛素样生长因子Ⅰ后增强型绿色荧光蛋白的表达；检测细胞上清中人胰岛素样生长因子Ⅰ的分泌浓度；流式细胞仪检测细胞转染后的变化。 结果：基因测序及酶切，聚合酶链反应等均证实人胰岛素样生长因子Ⅰ基因的正确克隆，并形成正确的真核表达载体pIRES2-EGFP-hIGF-Ⅰ。人半月板纤维软骨细胞在接种40 h 后贴壁并伸展为成纤维细胞样，三角形或多角形外观。增强型绿色荧光蛋白的表达逐渐增加，在转染后56 h 达到峰值。细胞上清中人胰岛素样生长因子Ⅰ蛋白质的浓度变化趋势类似增强型绿色荧光蛋白的表达，峰值可达22.68 μg/L。蛋白免疫印迹、反转录-聚合酶链反应和免疫组织化学染色均证实人胰岛素样生长因子Ⅰ蛋白质的存在。转染后部分细胞表型发生变化，增殖加速。流式细胞仪检测转染后S期细胞比例增多。 结论：人类半月板纤维软骨细胞可被阳离子脂质体安全有效地转染，转染的人胰岛素样生长因子Ⅰ基因可分泌较高水平的生长因子并加速细胞的增殖。     

成体半月板细胞体外分区培养研究

目的分区培养成体半月板细胞,观察不同区域的半月板细胞生长特性以及生长因子对其的影响。方法无菌切取1月龄雄性山羊双后肢半月板,剪碎后D-Hanks液漂洗,Ⅱ型胶原酶振荡消化,滤网过滤后离心收集细胞。接种6孔细胞培养板,每孔1×105个,37℃、体积分数为0.05的CO2、饱和湿度培养。绘制生长曲线,台盼蓝染色测细胞活力。细胞爬片行苏木精-伊红及Ⅱ型胶原免疫组化染色。RT-PCR检测aggrecan的表达。用流式细胞仪检测细胞周期的分布。结果山羊成体半月板细胞自36 h后开始贴壁,外侧区细胞以长梭形为主,内侧区以多角形为主,混合区细胞形态为混合型。台盼蓝拒染试验测细胞活力约为92%。群体倍增时间约为47.4 h。加入人胰岛素样生长因子Ⅰ和碱性成纤维细胞生长因子后细胞增殖加快,多角形细胞增多;细胞爬片行Ⅱ型胶原免疫组化染色证实在转染细胞胞浆中有棕黄色颗粒。RT-PCR检测结果显示目的条带与aggrecan的预期大小相符。流式细胞仪检测加入生长因子后的半月板细胞S期比例增加,而G1期细胞减少。结论不同区域的半月板细胞有形态差异。加入生长因子后可促进其生长、增殖。     

藻酸钙海绵复合转基因骨髓基质干细胞的体外培养

目的采用不同方法制备藻酸钙海绵,观察其与细胞的复合情况.方法将藻酸钠与CaCl2或葡萄糖酸钙混合交联,采用慢速冷冻、酒精脱水或快速冷冻、真空干燥的方法制备藻酸钙海绵,与人胰岛素样生长因子(hIGF-I)基因转染的骨髓基质干细胞复合培养,观察标记基因和目的基因的表达.结果 CaCl2制备、酒精脱水的藻酸钙海绵韧性与强度最高,孔隙大,分布均匀;葡萄糖酸钙制备、酒精脱水组强度低,孔径小,冻干后质脆,弹性欠佳.复合培养后有增强绿色荧光蛋白(EGFP)表达.培养基中hIGF-I分泌浓度各组互有差异.结论冷冻脱水制备的藻酸钙海绵强度增高,与细胞复合后细胞存活并有目的基因和标记基因表达.     

膝关节创伤的关节镜手术进展

膝关节损伤指涉及膝关节的骨、软骨和关节内结构(交叉韧带、半月板等)的急性或慢性创伤。膝关节是结构复杂的负重关节,创伤机会多,病废率高。传统的诊断和治疗方法都存在一定的局限性,临床疗效并不满意,常导致关节失稳和创伤性关节病变的发生,影响关节功能。应用关节镜技术是诊断和治疗急性和慢性关节创伤的微创治疗方法。随着关节镜手术理论和技术的普及和提高、关节镜设备、器械和方法的改进,更显示了它是治疗关节创伤的一种重要手术方法〔1〕。1　急性膝关节创伤不同暴力的方向和程度,以及肢体所处的位置和动作,产生的急性膝关节创伤后有…     

软骨移植与软骨下骨钻孔修复全层关节软骨缺损的比较实验研究

目的 :评价软骨移植、软骨下骨钻孔修复关节软骨缺损的生物特性和效果差异。方法 :采用重复拉丁方设计 ,将 36只雄性新西兰大白兔按三个因素三个水平进行随机区组 ,对左右后肢按设计好的创面大小制造全层软骨缺损。软骨移植组将不同家兔关节软骨交换嵌入移植。钻孔组依创面大小制造孔直径、间距、深度相同的骨孔 ,深达松质骨。对照组缺损不作任何修复。术后 4、8、1 2周处死取材 ,分别进行大体观察、光镜观察、电镜观察 ,对观察指标进行量化统计学分析。结果 :(1 )两实验组在第 1 2周时均能以类透明软骨组织修复缺损 ,而对照组为纤维肉芽组织 ,统计学分析表明各组间有显著性差异 (P <0 .0 1 )。 (2 )光镜观察表明两种手术方法均能以软骨的方式修复缺损 ,软骨移植组无明显免疫排斥迹象 ,软骨细胞有活性 ,各组间有显著性差异 (P <0 .0 1 )。 (3)形态学分析表明 ,随时间延长 ,光密度与修复高度渐增 ,其中软骨移植组优于其他各组 (P <0 .0 1 )。 (4)随时间延长修复效果逐渐改善。小创面修复效果与中等创面间无明显差异。 (5)电镜观察表明 ,两种手术方法均有软骨细胞生成 ,细胞器发达。对照组符合纤维肉芽组织特征。结论 :(1 )软骨移植、钻孔均能以类透明软骨的结局修复关节软骨缺损 ,软骨细胞生物学特性类似     

癌胚抗原免疫放射与放射免疫测定对肺癌诊断的研究

采用英国产癌胚抗原(CEA)免疫放射(IRMA)试剂盒及国产CEA放射免疫(RIA)试剂盒,对肺癌组65例患者及对照组11例成人血清与支气管肺泡灌洗(BAL)液的CEA浓度进行测定。两种方法测定结果(X±S);对照组血清分别为2.09±1.19μg/L,7.58±4.07μg/L;BAL液分别为11.21±7.75μg/L,32.46±14.54μg/L。肺癌组血清分别为7.72±14.13μg/L,18.25±17.87μgBAL液分别为84.07±42.04μg/L,71.17±35.85μ/Lg。研究发现IRMA分析法明显优于RIA分析法,BAL液中CEA浓度明显高于血清浓度。其中以IRMA测定的BAL液对肺癌的阳阴性诊断率最高(70.8％)。     

ClC-3氯通道研究进展

容积敏感性氯通道普遍存在于哺乳动物细胞 ,对维持细胞容积平衡、调节细胞电活动等多种生理功能发挥重要作用。ClC 3作为可能编码ICl.swell的基因 ,受到广泛关注。本文就近年来对ClC 3氯通道在通道特点、生理作用及有关的通道调节机制等方面的研究进行了综述     

犬携带狂犬病毒简易检查法

犬携带狂犬病毒简易检查法江苏省盐城市卫生防疫站２２４００２邵荣标，张海宁，陈玉宏在狂犬病防治工作中，各级卫生机构为提高防治质量，时常需要知道伤人之犬是否携带狂犬病毒，要求能及时检测犬脑及唾液腺中病毒。我们设计了一套方法，可以简捷准确地检定犬脑及唾液腺...     

人软骨细胞培养上清诱导脐血间充质干细胞向软骨细胞分化

背景：人脐血间充质干细胞作为软骨缺损修复的种子细胞日益受到关注,现有常用诱导方法无论是应用诱导培养基还是诱导因子,因其价格昂贵、用量大等因素限制了实际应用。
　　目的：验证人软骨细胞培养上清诱导人脐血间充质干细胞向软骨细胞分化的可行性。
　　方法：利用密度梯度离心法和贴壁培养法分离新生儿脐血,获取并培养人脐血间充质干细胞,流式细胞仪鉴定细胞表面抗原。切取股骨头置换或全髋关节置换患者透明软骨组织,体外分离培养软骨细胞,利用其培养上清培养人脐血间充质干细胞,培养2周后观察细胞表型外观变化,免疫组化染色检测Ⅱ型胶原表达结果。
　　结果与结论：密度梯度离心法与贴壁培养法可以分离获取人脐血间充质干细胞,流式细胞仪鉴定表面标记CD90,CD105高表达,不表达CD34,CD45。软骨细胞培养上清诱导2周后,人脐血间充质干细胞向多角形、圆形转变,Ⅱ型胶原免疫组化检测表达阳性。提示软骨细胞培养上清可诱导人脐血间充质干细胞表达Ⅱ型胶原,向软骨细胞分化。     

银屑病伴发脑静脉系统血栓形成1例报告

正1病例介绍患者,男性,51岁,因"右上肢活动不利5个月,加重伴右下肢活动不利15 d"入院。患者于入院前5个月无明显诱因出现阵发性右手精细活动不能,每次发作持续约1 min,可自行缓解。于当地医院行头颅CT后诊断为"ICH",药物治疗过程中上述症状缓解后加重,复查CT示左侧额叶混杂密度影,病灶较前有所增大。入院前4个月行头颅MRI普通增强示左侧额叶结节状高低混杂信号影,其旁见小